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长链非编码 RNA Gm15577参与小鼠小脑神经元增殖与分化
目的鉴定新的参与奈美亨综合征（ NBS ）小鼠模型中与小脑发育缺陷相关的长链非编码RNA（ lncRNA），并探讨其与小脑增殖分化相关的功能。方法利用芯片技术分析野生型（野生组，Nbs1CNS-ctr）小鼠及Nbs1神经元特异性敲除（突变组，Nbs1CNS-del）小鼠小脑中RNA的表达差异；利用即时荧光定量PCR技术对芯片结果加以验证；针对目的RNA，检测其全身表达及小脑中表达模式、细胞内定位以及对母基因的表达调控模式。结果 lncRNA Gm15577是由神经生长调节因子-1（ Negr1）基因内部的内含子区反向转录而成，特异性表达于小脑，且在其发育过程中呈动态变化趋势，而Nbs1缺失之后整体表达水平显著降低；同时，与未分化期比较，分化后的小鼠小脑原代神经前体细胞中Gm15577及其母基因Negr1均有显著升高；Gm15577敲低之后导致Negr1以及小脑增殖分化相关因子Shh与β-catenin 在RNA水平的表达显著下调；人髓母细胞瘤临床样本数据分析表明Negr1基因在正常人群与肿瘤患者之间有显著的表达差异。结论从神经特异性敲除Nbs1小鼠模型出发报道了一个新的与小鼠小脑发育相关的lncRNA Gm15577，初步结果表明Gm15577通过调控Negr1进而影响小脑神经元增殖与分化进程中的Shh与β-catenin信号通路，其基因行为异常有可能与髓母细胞瘤发病有一定的相关性。
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NBS1在大鼠唾液腺放射损伤中的表达变化及意义
目的 探讨大鼠γ射线照射后唾液腺组织NBS1基因和蛋白的表达,及其在唾液腺上皮细胞放射性损伤修复中的调控作用.方法 将80只大鼠按随机数字表法均分为健康对照组和照射组,各40只.照射组大鼠以60Co γ射线分次照射,每次3 Gy,隔天1次,共5次,累积剂量为3、6、9、12和15 Gy.应用电镜观察唾液腺细胞超微结构变化.用免疫组织化学技术(IHC)和反转录聚合酶链技术(RT-PCR)分别检测照射后2～4h的腮腺、颌下腺NBSl mRNA和蛋白的表达情况.结果 照射组腮腺组织萎缩和损伤程度重于颌下腺.腮腺组织吸收剂量为9.12和15 Gy时、颌下腺组织吸收剂量为9和12 Gy时,NBSl mRNA表达水平明显降低(t=7.10、17.93、20.86,P ＜0.05;t=3.13和7.53,P ＜0.05).照射组腮腺浆液细胞吸收剂量为9.12和15 Gy时、导管上皮细胞剂量为12和15 Gy时,差异有统计学意义(t=4.29、17.91、91.29,P＜0.05；t =3.09和5.62,P＜0.05).颌下腺浆液细胞在12 Gy时,NBS1蛋白表达明显减少(t=4.61和11.84,P ＜0.05).颌下腺导管上皮细胞及黏液细胞其NBSI蛋白表达在整个照射过程中未见明显变化.结论 γ射线照射后大鼠唾液腺组织NBS1 mRNA和蛋白水平均出现下降,推测NBS1可能参与唾液腺放射损伤和修复的过程.
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宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1的表达与增殖、凋亡的相关性分析
目的 研究宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1表达与增殖、凋亡的相关性.方法 选择2012年5月～2015年12月在广东省第二人民医院妇科接受活检的宫颈鳞状细胞癌患者78例作为病理组,宫颈良性病变患者60例作为对照组.收集两组患者的宫颈组织后提取RNA并反转录为cDNA,采用荧光定量PCR法检测NBS1以及Ki67、CyclinD1、p27kip1、p57kip2、Fas、FasL、ActD、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的mRNA相对含量.分析各增殖、凋亡相关基因与NBS1 mRNA含量的相关性.结果 病理组宫颈组织中NBS1 mRNA相对含量显著高于对照组[(252.5±33.6)比(100.0±14.1),t=14.292、P＜0.05];病理组宫颈组织中Ki67[(246.4±39.5)比(100.0±12.8)、CyclinD1[(203.4±31.8)比(100.0±15.1)]的mRNA相对含量显著高于对照组且与NBS1 mRNA相对含量呈正相关(r=0.761、0.683,均P＜0.05);p27kip1 [(46.5±7.9)比(100.0±13.8)]、p57kip2 [(41.3±5.8)比(100.0 ±14.2)]、Fas[(35.9±6.8)比(100.0±12.7)]、FasL[(44.1±5.5)比(100.0±14.1)]、ActD[(26.8±3.6)比(100.0±16.7)]、Caspase-3[(38.1±5.8)比(100.0±15.5)]、Caspase-8[(24.2±4.5)比(100.0±11.9)]、Caspase-9[(56.1±7.9)比(100.0±14.6)]的mRNA相对含量显著低于对照组且与NBS1 mRNA的相对含量呈负相关(r=-0.614、-0.705、-0.662、-0.592、-0.783,均P＜0.05).结论 宫颈鳞状细胞癌中DNA损伤修复基因NBS1的表达量异常升高且与增殖、凋亡相关基因的改变有关.
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MRN复合物(MRE11/RAD50/NBS1)生物学作用的研究进展
双链DNA损伤(double strand breaks,DSBs)是导致基因组不稳定和细胞死亡的主要原因.MRE 11/RAD50/NBS1是检测和修复DSBs的重要复合物[1].细胞代谢过程中的复制、有丝分裂及遗传毒性化学物质和放射治疗均能引起DSBs[2-3].MRN复合物在DSBs修复过程中发挥重要作用,参与起始修复、引发信号转导和协助修复等DNA损伤修复应答的每个环节[4].近些年,在放射治疗敏感性的探索中发现,抑制MRN复合物活性,阻碍肿瘤细胞的DNA损伤修复,可达到放疗增敏的目的[5].
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抑制NBS1表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响
目的 探讨siRNA抑制NBS1基因表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响.方法 通过构建NBS1干扰质粒和阴性空载质粒,并通过腺病毒载体感染MDA-MB-231细胞,Western印迹法明确NBS1基因受干扰情况;CCK-8法检测转染质粒后对MDA-MB-231细胞体外增殖能力的影响;流式细胞法检测感染后实验组和阴性对照组MDA-MB-231细胞的凋亡情况.结果 Western印迹法检测结果表明实验组NBS1蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);CCK-8实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞增殖能力受到抑制(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示,实验组较阴性对照组凋亡率上升(P＜0.05).结论 抑制NBS1基因的表达可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,并促进癌细胞的凋亡.
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NBS1基因多态与宫颈癌发生的相关性研究
目的：分析 DNA 双链损伤修复基因 NBS1的 Glu185Gln 单核苷酸多态性与广东地区汉族妇女的宫颈癌遗传易感性的关系。方法：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性( PCR-RFLP)技术,对139例宫颈癌患者及264例健康对照者的 NBS1 Glu185Gln 多态位点进行基因分型,比较病例组与对照组的基因型分布情况,并采用非条件 logistic 回归方法分析该多态位点与宫颈癌发生的关系。结果：携带 GG 基因型的个体患宫颈癌的风险显著增加(OR =2.231,95% CI =1.247~3.991,P =0.007),并且 G 等位基因增加个体患宫颈癌风险的趋势在Ⅰ期的宫颈癌患者中更显著(GG vs CC：调整后 OR=3.703,95% CI=1.559~8.798,P =0.003)。结论：NBS1基因的 Glu185Gln 多态位点与广东地区汉族妇女宫颈癌的发生相关,G 等位基因可能是影响宫颈癌易感的风险因素。
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大鼠涎腺放射损伤模型的建立及NBS1的表达变化
目的:研究大鼠涎腺放射损伤模型中NBS1基因的表达,初步探讨其在放射性涎腺上皮细胞损伤修复中的调控作用.方法:放射组40只大鼠以60Co γ射线分次照射,每次3GY,隔天1次,共5次,累积剂量分别为3、6、9、12、15 GY,对照组40只大鼠同期进行麻醉.照射后2～.4 h,收集大鼠腮腺,颌下腺.应用苏木素-伊红染色(HE)和透射电镜观察涎腺组织的显微和超微结构变化；应用逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测腮腺、颌下腺NBS1mRNA的表达情况.结果:腮腺较颌下腺组织损伤严重:放射组和正常组比较,腮腺放射剂量9 GY组起,颌下腺于12 GY组起,NBS1mRNA表达水平减少(P＜0.05).结论:大鼠涎腺放射损伤模型建立成功,NBS1可能参与涎腺放射损伤修复.
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靶向NBS1的RNA干扰对鼻咽癌CNE-2细胞放射增敏作用的研究
目的:研究靶向NBS1的RNA干扰对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用.方法:靶向NBS1的小干扰RNA转染鼻咽癌CNE-2细胞48小时后,4 Gy剂量X射线照射.照射后24小时,流式细胞仪分析鼻咽癌细胞凋亡率.结果:X线照射+RNAi-NBS1组的细胞凋亡率显著高于单独X线照射组和X线照射+RNAi-阴性对照组(P<0.01).结论:靶向NBS1的RNA干扰在鼻咽癌CNE-2细胞中有显著的放射增敏作用,诱导细胞凋亡是其放射增敏的重要机制之一.
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中国湖南家族性和早发性乳腺癌患者PTEN和NBS1基因突变检测
目的:探讨中国湖南人群家族性和早发性乳腺癌患者磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)和Nijmegen断裂综合征1(Nijmegen breakage syndrome 1,NBS1)基因的突变特点及潜在意义.方法:纳入131例家族性和早发性乳腺癌患者,采用变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)对PTEN基因所有外显子以及NBS1基因外显子5和外显子6的突变位点进行筛查,然后采用DNA直接测序证实.结果:在131例患者中,有2例发生PTEN基因插入突变IVS4+ 109insTCTTA,其突变频率为1.15％;首次发现PTEN基因的2个突变225 A＞C(Thr 160 Pro)与IVS5+13T＞C,另一个已报道的错义突变为rs121909229 G＞A(Arg 130 Gln).在NBSl基因上发现3个突变,其中IVS6+43A＞G与IVS6+127A＞G为首次发现,另一个已报道的同义突变为rs1805794G＞C(Glu 185 Gln).结论:新发现的PTEN和NBS1突变可能是中国湖南人群家族性和早发性乳腺癌的特有突变位点.
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NBS1基因8360G＞C(Glu185Gln)多态位点与南方人群肺癌的相关性
目的:研究DNA双链断裂修复基因NBS1编码区8360G＞C(Glu185Gln)多态与我国南方人群肺癌发病的关联.方法:应用病例对照研究方法,采用PCR-RFLP技术检测300例肺癌患者与正常对照8360G＞C多态位点的基因型,用SAS9.13软件分析该位点变异与肺癌发病的关系.结果:NBS1的8360G＞C基因型频率在肺癌与对照中的分布差异有显著性(P =0.0230)；携带GC变异基因型个体发生肺癌的危险性是GG基因型携带者的1.28倍(adjusted OR=1.28;95％CI=1.04 - 1.59;P =0.025),携带CC变异基因型个体的危险性则是1.93倍(adjusted OR=1.89；95％CI=1.43 -2.51；P＜0.001),且存在显著的等位基因剂量-效应关联(Ptrend=0.0049).结论:NBS1编码区8360C变异基因型与我国南方人群肺癌发病有关,它可能是我国南方人群肺癌发病的一个遗传相关因素.
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沉默大鼠颌下腺细胞SSB1对NBS1蛋白表达的影响
目的:初步研究沉默大鼠单链DNA结合蛋白1(SSB1)基因对NBS1蛋白表达的影响.方法:将大鼠颌下腺(SMG)细胞分为病毒转染组、空白质粒对照组,分别转染rAdE5-SSB1-1 p2-shRNA腺病毒表达载体、空载腺病毒,另设正常组,通过west-ern blotting法检验SSB1、NBS1蛋白表达量.结果:病毒转染组NBS1、SSB1蛋白相对表达量均较空白质粒对照组、正常组显著降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:成功沉默大鼠SMG细胞SSB1基因,SSB1沉默可下调NBS1蛋白表达.
