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汉滩病毒感染神经元细胞模型的建立
目的 利用体外培养的昆明小鼠胚胎脑皮质神经元，感染汉滩病毒(Hantaan virus.HT-NV)，建立病毒感染的神经元细胞模型，供探讨病毒感染神经元后细胞的变化及损伤机制之用。方法 将孕16～19 d的昆明种小鼠胚胎皮质神经元正常培养存活后，感染汉滩病毒A9株造成细胞损伤模型。使用间接免疫荧光方法 检测神经元荧光抗体阳性情况；利用MTT比色试验检测细胞存活情况；通过免疫组化方法 观察神经细胞生长的情况。结果 病毒感染的神经元在继续培养一周时，间接免疫荧光检测反应阳性；M TT比色试验显示病毒感染组神经元活性明显下降；神经元特异性烯醇化酶(Neuron speciafic enblase.HSE)免疫组化显示病毒感染组神经元胞体面积和突起长度均低于阴性对照组。结论 HTNV对神经元存在直接作用，使细胞在病毒感染后出现损伤性变化，胚胎鼠皮质神经元是敏感的H TNV靶细胞之一。
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汉滩病毒S基因全长和截短片段在大肠杆菌中表达及其初步应用
目的 体外克隆表达汉滩病毒全长及部分核蛋白编码基因,筛选病毒核蛋白在人体体液应答中的主要抗原决定簇区,以期获得高质量核蛋白抗原,为研制新型肾综合征出血热(HFRS)基因工程诊断试剂奠定基础.方法 利用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶酶切的方法分离汉滩病毒76-118 S基因全长及部分氨基端编码基因(S、SA、SB、SC和SD),分别将各编码基因克隆人T7原核表达载体,在大肠杆菌中表达;免疫印迹试验(Western-blot analysis)分析重组抗原活性.结果 完整和截短核蛋白皆得到有效表达,相对分子质量分别为50 000(recombinant S protein,rS)、4 500(rSA)、22 000(rSB)、25 000(rSC)和27 000(rSD),Westem-blot分析表明截短核蛋白(rSB、rSC和rSD)具有较好的抗原活性;粗提抗原Dot-blot方法检测HFRS患者血清结果与IFA法一致;重组小片段抗原与抗汉滩病毒单克隆抗体5H5及H7可发生特异性反应.结论 汉滩病毒核蛋白的氨基端含有一主要抗原决定簇区;原核表达的截短核蛋白在HFRS的血清学诊断中具有一定的价值.
关键词： 汉滩病毒属 重组核蛋白 免疫印迹试验 间接酶联免疫吸附试验 -
汉滩病毒重组核蛋白的克隆构建和活性初探
目的 制备新型高效的基因工程重组抗原,用于汉滩病毒的快速诊断和分型诊断.方法 聚合酶链反应(PCR)扩增得到汉滩病毒S基因的截短片段,将该片段克隆入原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,将包涵体进行胶上回收,Western blotting分析其抗原性.结果 纯化得到相对分子质量约为46×103的重组蛋白,可与肾病综合征出血热(HFRS)阳性血清发生反应,健康人血清为阴性对照.结论 研究得到的重组核蛋白在HFRS的血清学诊断中具有一定的应用价值.
