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反义6A8 DNA文献资料
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BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡
目的采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质. 方法用Giemsa染色、annexin-Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法,分析细胞死亡的性质;应用Con A结合试验,检测转基因细胞6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变;应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca2+]i. 结果用重组腺相关病毒(rAAV)颗粒成功地将反义6A8 DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB.在克隆中,转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3～10个细胞时死亡,而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好.转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长,且有大量细胞肿胀,终死亡.Giemsa染色光镜观察、annexin-Ⅴ荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明,这种死亡是一种oncosis(肿胀死)样死亡.Con A结合试验表明,BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高,而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降.另外,转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca2+]i升高. 结论转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡,这种死亡可能与6A8 α-甘露糖苷酶表达被抑制有关.
