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胸腺基质细胞的抗原提呈作用
目的 研究胸腺基质细胞的抗原提呈能力.方法 应用OVA-特异的、受I-Ad分子识别限制的辅助T细胞杂交瘤(3DO.18.3)识别由I-Ad分子提呈的OVA的CNBr水解片段而被活化后产生IL-2,测定IL-2活性来分析胸腺基质细胞的抗原提呈作用.结果 IFN-γ能促进MTEC1和MTSC4表达I-Ad分子,并促进MTSC4表达B7-1分子.经IFN-γ作用后,MTEC1和MTSC4均有抗原提呈能力,MTSC4的抗原提呈能力较强.结论 抗原提呈能力的强弱,与TSC表达I-Ad和B7-1分子的水平相关,表明不同类型的TSC有不同的抗原提呈能力.
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胚胎胸腺细胞在体外胚胎胸腺器官培养中的发育研究
体外可调控的T细胞培养系统的建立,为研究T细胞发育及T细胞和基质细胞的作用提供了很好的实验模型,如胸腺或基质细胞的分离培养和胚胎胸腺器官培养(FTOC)[1].近年来研究表明,长期体外培养的胸腺基质细胞,由于表型的变化如MHCⅡ类分子丢失,而失去了支持T细胞发育的能力,其应用受到限制.
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小鼠胸腺基质细胞系MTDC的鉴定及细胞因子对其表面分子表达的作用
目的鉴定小鼠胸腺基质细胞系MTDC, 为进一步功能研究奠定基础. 方法利用多种鉴定小鼠胸腺树突状细胞的单克隆抗体对我室建立的一株缺乏上皮细胞典型特点的胸腺基质细胞系MTDC 进行了鉴定;并用多种细胞因子组合对MTDC及其MTDC(10)克隆进行诱导. 结果 CD40、B7.1、MHC class Ⅰ在MTDC的表达阳性率分别为70%、10%、10%;MTDC不表达CD11c、MHC class Ⅱ及Ly5.2,低表达CD8α;DEC-205这一重要的树突状细胞的表面分子在MTDC及其14个亚克隆中有不同程度的表达,阳性率分布于5%～58%.MTDC(10)克隆细胞在GM-CSF、IL-4、IFN-γ,anti-CD40 McAb联合作用下,可上调表达MHC class Ⅰ、MHC class Ⅱ及B7.1,阳性率分别为96.3%、42.1%、52.6%,高于MTDC被诱导后表达阳性率;并且发现去除4种因子中任何一种因子,均不能上调B7.1的表达,且IFN-γ在MHC Ⅱ类分子上调表达中起关键作用. 结论 MTDC缺乏典型树突状细胞的表面标志及上皮细胞特点,可能为一特殊的胸腺基质细胞系.
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人胚胎胸腺基质细胞的体外分离培养与鉴定
目的:体外分离培养胎儿胸腺基质细胞,即上皮网状细胞,为研究T淋巴细胞的分化增殖及相关药物筛选奠定基础.方法:从水囊引产的胎儿胸腺中分离组织细胞,经筛选培养获得胸腺上皮网状细胞.结果:细胞染色体正常,为46条染色体,包括1对性染色体.倒置显微镜下观察,细胞呈扁平状,多边形,胞体较大,核圆形或椭圆形,核仁明显,胞质内含明显的颗粒和小泡.透射电镜显示细胞间有桥粒相连,并可见张力丝.用免疫组化法检测上皮细胞特异性表达标志(角蛋白)为阳性.结论:本法获得细胞为胸腺网状上皮细胞,为进一步工作打下基础.
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4种与胸腺细胞发育相关的小鼠cDNA文库的建立
为深入研究胸腺细胞与胸腺基质细胞间相互作用的机制,我室制备了一系列抗胸腺基质细胞抗体,发现其中的两株单抗PF18-3和RS21-C6显示出非常有意义的作用.为克隆上述单抗识别分子的编码基因,我们成功地构建了分别来自早期T细胞株C320、ConA活化胸腺细胞、胸腺上皮样细胞株和胸腺树突状细胞株的4个高质量cDNA文库.
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小鼠Aire逆转录病毒表达载体的构建及表达
目的:将小鼠Aire基因定向连入MigR1-GFP质粒,得到长期稳定的Aire逆转录病毒表达载体,收集逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞,为研究Aire在胸腺细胞终末分化中的作用奠定基础.方法:以小鼠胸腺基质细胞的cDNA为模板扩增得到Aire的ORF片段;将该片段连接入MigR1-GFP质粒;将构建成功的Aire-MigR1-GFP质粒转染293T细胞,收集逆转录病毒上清;使用逆转录病毒上清感染胸腺基质细胞系MTEC9,流式细胞仪检测感染效率,Western blot确定Aire蛋白的表达.结果:(1)成功得到Aire的ORF片段.(2)构建的Aire逆转录病毒表达质粒能够成功表达Aire蛋白.(3)逆转录病毒上清成功感染胸腺基质细胞系MTEC9.结论:成功构建了小鼠Aire逆转录病毒表达载体,并实现了Aire蛋白在胸腺基质细胞系中的强制性表达.
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胸腺基质淋巴细胞生成素在鼻息肉的表达
胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin， TSLP）是一种与免疫性疾病有关的新型的细胞因子，于1994年由Friend等［1］在鼠胸腺基质细胞对B细胞作用的研究中首先发现。本研究检测TSLP在鼻息肉中的表达，以期为进一步阐明鼻息肉的发病机制提供理论依据。
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胸腺基质细胞促进CD4CD8双阳性胸腺细胞排除或成熟
胸腺基质细胞(Thymic stromal cells,TSC)是胸腺微环境重要的组成部分,对胸腺细胞的分化发育具有重要作用.TSC可促进胸腺细胞的成熟分化,减少胸腺细胞凋亡[1],也可促进CD4+CD8+双阳性(DP)胸腺细胞凋亡及克隆排除[2].本文用光镜和电镜观察初代TSC与胸腺细胞的相互作用,用流式细胞术检测TSC对胸腺细胞凋亡及CD4、CD8亚群的影响,探讨TSC对胸腺细胞发育的调节作用及其可能的机制.
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脐血CD34+细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的实验研究
目的:建立利用人造血干/祖细胞体外定向诱导分化为T淋巴细胞的方法,为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台.方法:MACS方法分离人脐带CD34+细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上,IMDM液体培养基含20%人AB血清并加入FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合,于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞利用流式细胞仪对细胞表型进行检测,并进行细胞形态学分析.结果:2周后,CD4+CD8+非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0.3%～13.3%,4～5周CD4+CD8+T淋巴细胞达到高峰占16.6%～26.5%,且CD3+CD4+CD8+和CD3+CD4-CD8+T淋巴细胞逐渐增多,6周后达26.5%～64.9%和11.6%～38.9%.培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL-2刺激后瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在.结论:利用人脐血CD34+在体外人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下,可诱导分化出T淋巴细胞,并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应.
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miR-146a下调小鼠TRAF-6并减少胸腺基质细胞凋亡率的实验研究
目的 探讨miR-146a在胸腺发育及增龄性萎缩中的作用.方法 转染miR-146a模拟物到小鼠胸腺基质细胞(thymic stromal cell,TSC)中,48 h后使用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcrip-tion-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术测其含量,观察有无成功过表达;72 h后使用Western blot检测其靶基因肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF-6)含量,并采用流式细胞仪观察TSC凋亡率的变化.结果 在转染48 h后TSC中miR-146a含量明显升高(mimics组为192.95±54.64,对照组为1,P<0.05);72 h后其靶基因TRAF-6在mimics组中含量相比对照组明显降低(mimics组为0.50±0.25,对照组为1,P<0.05);转染组胸腺基质细胞72 h凋亡率较对照组降低(mimics组为13.90％ ±1.84％,对照组为22.83％ ±3.43％,P<0.05).结论 miR-146a随年龄在胸腺基质中含量下降与胸腺萎缩是相关性,考虑其对靶基因的抑制减弱所引起,并且与靶基因TRAF-6能促进细胞凋亡有一定关系.
关键词： 胸腺 胸腺基质细胞 miR-146a 肿瘤坏死因子受体相关因子6 凋亡 -
胸腺基质细胞研究方法的进展
胸腺基质细胞(thymic stromal cell,TSC)是指胸腺内的非胸腺细胞,主要由上皮细胞(thymi epithelial cell,TEC)、成纤维细胞(thymic fibroblast cell,TFC)、巨噬细胞(thymic macrophage,TM )、树突状细胞(thymic deutrtic cell,TDC)组成[1,2].近来还发现有肥大细胞(mast cell)[3]和B细胞(thymic B cell,TBC)[4].
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胸腺基质细胞对热应激小鼠胸腺细胞亚群变化及HSP70表达的影响
目的 探讨胸腺基质细胞(TSC)对热应激小鼠胸腺细胞的调节作用.方法 应用光镜、电镜、流式细胞术等观察初代培养的TSC对热应激胸腺细胞发育的调节作用.结果 TSC可大量粘附和吞噬胸腺细胞,使热应激胸腺细胞数量明显减少,但尚存的胸腺细胞中活细胞比例却明显增加,凋亡率明显减少.TSC可促进热应激胸腺细胞HSP70表达增加,使热应激胸腺细胞的DP及SP细胞,尤其是DP细胞数量明显减少.结论 TSC可清除大量的热应激胸腺细胞,TSC促进热应激胸腺细胞HSP表达增高可能具有双重意义:既可保护胸腺细胞,又可促进TSC识别和吞噬已受损的或凋亡的胸腺细胞.
关键词： 胸腺基质细胞 胸腺细胞 热应激 CD4CD8细胞业群 热休克蛋白70 -
用mRNA差异显示方法寻找小鼠胸腺基质细胞差异表达基因
目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因.方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞4(5)和4(12),前者可诱导前体T细胞的进一步成熟,分别提取该两株细胞的总RNA,利用mRNA差异显示方法(DD-PCR)筛选4(5)细胞特异表达的基因片段.结果得到了17个4(5)细胞特异表达的基因片段(expressed sequences tag,EST),其中14个代表了尚未登录的小鼠新基因,另外3个则分别与小鼠的cytochrome C oxidase,Hsp65,Eps8基因高度同源.结论 DD-PCR方法是一种优良的寻找新基因的方法,小鼠胸腺基质细胞可能分泌或表达更多的新因子或分子.
关键词： DD PCR 表达序列标签(EST) 胸腺基质细胞 -
初代培养的胸腺基质细胞对小鼠胸腺细胞的粘附和吞噬作用
目的探讨胸腺基质细胞(TSC)对胸腺细胞的调节作用.方法应用光镜、电镜和流式细胞术等,观察初代培养的TSC对胸腺细胞发育的调节作用.结果光镜和电镜均可见,TSC可大量粘附和吞噬胸腺细胞,其中部分胸腺细胞发生凋亡.尽管与TSC共培养的胸腺细胞存活率高,凋亡率低,但其总数却显著减少. 结论 TSC可通过粘附和吞噬作用,清除部分胸腺细胞.
