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人乳头状瘤病毒11型E7抗原HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的功能鉴定
目的 筛选和鉴定人乳头状瘤病毒11型E7抗原(HPVllE7)HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位.方法 预测HPVllE7抗原HLA-A*0201限制性CTL表位并合成相对应的表位多肽和四聚体(tetramer),即HPVllE7 7-15(TLKDIVLDL)、15-23(LQPPDPVGL)、47-55(PLTQHYQIL)、81-89(DLLLGTLNI)和82-90(LLLGTLNIV).从健康HLA-A*0201成人外周血单一核细胞诱导树突状细胞(DC)并负载上述表位多肽,流式细胞技术检测DC成熟分化标记及ELISA法检测DC分泌的IL-12;成熟DC负载各组多肽后观察DC激活T淋巴细胞的效应,ELISA法检测T细胞分泌的IFN-γ;四聚体检测抗原特异性CD8+ T细胞及乳酸脱氢酶(LDH)释放法评价DC诱导的CTL对靶细胞的特异性体外杀伤效应.结果 预测的5条HPVllE7表位多肽均能诱导DC的成熟分化;E7 7-15、82-90和15-23多肽负载的DC能激活T淋巴细胞分泌高水平IFN-γ;E7 7-15多肽负载的DC能刺激特异性tetramer+CD8+细胞增殖且其诱导的CTL对HPVllE7/293细胞产生高效率的特异性杀伤作用(P<0.05).结论 筛选并鉴定出1条HPVllE7HLA-A*0201限制性CTL表位E7 7-15(TLKDIVLDL),负载该表位肽的DC体外可诱导高效、特异性的CTL效应,抗原性较强,有可能作为HPV感染治疗用肽疫苗的候选表位.
关键词： 人乳头状瘤病毒11型 E7抗原 细胞毒性T淋巴细胞 四聚体 -
十肽表位HPV-16E711-20氨基酸置换修饰的研究
目的 采用氨基酸置换对人乳头状瘤病毒16型E7抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV-16E711-20进行修饰和鉴定.方法 运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较,以分子模拟方法确定合成序列,采用标准Fmoc方案进行合成与纯化多肽以及标准51Cr释放试验检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性.结果 修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,十肽YLLDLQPEVT具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性.结论 修饰表位YLLDLQPEVT具有更好的结合力和较强的抗原性,可以代替原有序列E711-20(YMLDLQPETT)作为人乳头状瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的新表位.
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不同病程尖锐湿疣患者特异性CTL细胞频率和功能分析
.48)%,缓解期CA患者的特异性CTL杀伤活性为(59.33±1.71)%,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 缓解期CA患者与复发期CA患者外周血中特异性CTL数量相近,但缓解期CA患者特异性CTL杀伤活性明显强于复发期CA患者,这可能是不同病程CA患者转归差异的根本原因.
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湖北土家族健康妇女HPV16型E7抗原HLA-A*02限制性CTL表位肽初步筛选
目的:初步筛选湖北省五峰县土家族健康妇女HPV16型E7抗原HLA-A* 02限制性CTL表位肽.方法:采集湖北省五峰县土家族HLA-A* 02健康妇女外周全血并分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),以HPV16型E7肽作为抗原,与人PBMC共培养9d后,采用酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunosorbent spot,ELLS-POT)检测不同多肽刺激PBMC产生特异性免疫反应的差异,使用SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果:实验组均能诱导PBMC产生特异性免疫应答,其中E741-55 (PAGQAEPDRAHYNIV)和E751-65 (HYNIVTFCCKCDSTL)免疫反应显著.经过方差分析,组间差异有统计学意义,F=155.3,P=0.001;对组间进行LSD检验,与阴性对照组相比,实验组差异均有统计学意义,P=0.003;其中,P2和P4与阴性对照组比较差异有统计学意义,P值分别为0.021和0.016.结论:E741-55(PAGQAEPDRAHYNIV)和E751-65(HYNIVTFCCKCDSTL)抗原性强,有可能作为该地区HPV感染治疗性肽疫苗的候选表位.
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HLA-A2限制性CTL表位HPV18E77-15分子修饰的实验研究
目的 对人类白细胞抗原A2分子(HLA-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位HPV18E77-15进行氨基酸置换修饰,并探讨修饰后多肽的免疫原性.方法 根据量化模体方案,比较置换后的多肽与HLA-A2分子的结合系数,采用标准Fmoc方案合成并纯化多肽、细胞毒实验(51Cr释放法),观察多肽是否能够诱导特异性CTLs.结果 修饰肽TLQDIVLHV符合HLA-A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性.结论 修饰肽TLQDIVLHV具有更好的结合力和较强的抗原性,可以作为高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染治疗性肽疫苗分子设计的候选表位.
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人乳头瘤病毒16型E7抗原细胞毒性T细胞预测表位的分子模拟研究
对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性.通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构.结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位的结构要求,能较好地与HLA-A2分子结合.根据分子模拟提供的理论支持,各预测表位均符合要求,提示可在后续实验中进行表位合成、筛选、鉴定和多肽疫苗的研制.
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人乳头瘤病毒16E749-57的分子修饰与鉴定
目的对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV16E749-57进行氨基酸置换修饰,并鉴定修饰表位.方法运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较,以分子模拟方法确定合成序列,采用标准Fmoc方案进行合成与纯化多肽以及乳酸脱氢酶释放法检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性.结果修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,9肽RLHYNIVTF具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性.结论修饰表位(氨基酸序列RLHYNIVTF)具有更好的结合力和较强的抗原性,可以代替原有序列E749-57(氨基酸序列RAHYNIVTF)作为人乳头瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的候选表位.
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HPV16 E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的筛选与鉴定
目的筛选和鉴定人工合成的人乳头瘤病毒16型E7抗原人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞预测表位.方法对预测的E7抗原人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位运用标准Fmoc方案进行合成与纯化,采用标准51Cr释放试验检测特异性CTL诱导活性.结果筛选并鉴定出E711-19(YMLDLQPET)和E749-57(RAHYNⅣTF)2条人乳头瘤病毒16型E7抗原人白细胞抗原A2分子限制性CTL表位.结论 E711-19(YMLDLQPET)和E749-57(RAHYNIVTF)抗原性较强,有可能作为HPV感染治疗用肽疫苗的候选表位.
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负载人乳头瘤病毒16型E7多肽树突细胞诱导抗原特异性细胞免疫反应
目的观察负载人乳头瘤病毒16型(HPV16)E749-57多肽树突细胞(DC)体外诱导针对HPV16+肿瘤细胞的特异性细胞免疫反应.方法用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素4(IL-4)从健康成人外周血单一核细胞诱导DC并负载HPV16 E749-57多肽,流式细胞仪检测DC表面抗原;混合淋巴细胞反应观察DC对同种淋巴细胞增殖的激发效应;乳酸脱氢酶(LDH)释放法评价DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对Caski肿瘤细胞体外杀伤效应.结果负载HPV16 E749-57多肽的DC表面表达CD1a(58.4±6.7)%、CD80(70.6±3.4)%及HLA-DR(74.8±4.2)%分子;具有刺激同种T淋巴细胞增殖的能力;其诱导的抗原特异性CTL对Caski肿瘤细胞产生特异性杀伤,而对SiHa、AN3CA肿瘤细胞无明显杀伤作用.结论负载HPV16 E749-57多肽的DC体外可诱导高效、特异性的CTL效应.
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HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位的预测与鉴定
目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞(T-Helper Cell)表位.方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位,候选表位分别命名为P1、P2、P3,以固相多肽合成技术合成,并运用HPLC进行纯化和质谱法(MS)鉴定.以密度梯度法分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC),合成肽刺激PBMC,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测淋巴细胞增殖活性,流式细胞仪分析细胞表型.结果:多肽P1(HPV18 E780-94)在体外刺激PBMC后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖.结论:P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th细胞表位.
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HPV18E7抗原HLA-A2限制性CTL表位的初步筛选
目的:初步筛选人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为表位免疫原性鉴定提供靶肽.方法:采用超基序、多项式和量化基序方案相结合的方法,对靶抗原HPV18E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位进行预测,并应用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果:分别预测出5条、1条和6条九肽表位,综合三种预测方案确定其中1条为候选合成表位,合成肽的纯度大于95%,经质谱分析合成肽的分子量测定值与理论值相符.结论:超基序、多项式和量化基序方案联合应用提高预测效率,避免了在研究HPV18E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,为后继的抗原表位的免疫原性的鉴定奠定了实验基础.
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HPV18E7抗原T细胞表位的鉴定及CD4+T淋巴细胞的免疫反应
目的 初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4+T淋巴细胞的免疫反应.方法 以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4+T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得的3个HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位刺激外周血CD4+T淋巴细胞,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测CD4+T淋巴细胞增殖活性.ELISA方法分析表位刺激CD4+T淋巴细胞分泌的细胞因子.结果 多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激CD4+T淋巴细胞后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),多肽P1 (HPV18 E780-94)刺激CD4+T淋巴细胞分泌IFN-γ,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位.
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HPV16E7抗原HLA-A2限制性CTL表位预测及其合成
目的预测、合成、纯化及鉴定人乳头瘤病毒E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位,为表位抗原特异性鉴定和临床研究提供靶肽.方法 [ 采用超模体、多项式和量化模体方案相结合的方法,对靶抗原HPV16E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位进行预测,并运用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果分别预测出了16个、10个和3个九肽表位,确定其中5个九肽为候选合成表位,各合成肽的纯度都在95%以上.经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符.结论超模体、多项式和量化模体方案联合应用可提高预测效率,避免了在研究E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,可用于后续实验研究.
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HPV16型E7抗原B细胞表位的预测与鉴定
目的 分析人乳头瘤病毒16型(HPV16)早期蛋白E7的B细胞优势表住,并对其进行免疫原性鉴定.方法 采用亲水性方案、柔韧性方案、抗原指数方案及表面可能性方案综合评估其B细胞优势表位,并运用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定.以合成肽免疫Balb/c小鼠,进行免疫效果评价.结果 综合分析考虑HPV16 E714-21(P1),HPV16E726-37(P2),HPV16E744-51(P3)可能是B细胞优势表位,免疫小鼠后可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,但只有P1和P2产生的抗体与人宫颈癌组织上清液结合呈阳性反应.结论 HPV16 E714-21和HPV16E726-37具有较强的免疫原性,可能成为HPV感染肽疫苗的候选表位.
