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花粉变应原的分类和相关的进化分析
目的 分析各种花粉变应原所属的蛋白家族,统计各类蛋白作为变应原出现的次数和在各科植物间的分布情况,结合进化树分析,以了解花粉变应原在自然界分布的一般规律.方法 通过NCBI数据库获取目前已知的所有变应原.用批处理(Batch Entrez)获得全部的氨基酸序列.将每个序列与Pfam数据库比对,以确定各种花粉变应原所属的蛋白家族.对成员众多的Profilin、Ex-pansin家族,应用BLAST搜索变应原的同源序列,获取序列号,Batch Entrez获得全部的氨基酸序列,后用MEGA4.0软件生成进化树.结果 目前已知的168个花粉变应原,分属于26个蛋白家族.其中,Profilin、pollen_allerg_1和EF hand是3种成员多的变应原家族,分别有25、20、19种变应原,占总数的38%.10个排名靠前的蛋白家族,变应原数量占总数的79%.在花粉变应原家族中,既有Profilin般分布广泛的,几乎涉及所有的科;也有局限于某科植物的如Ribonuclease、FAD_binding pro-tein、Amb_V、Thaumatin等.通过进化分析可知,各种Profilin变应原高度同源,变应原序列在不同物种间具有高度保守性.禾本科花粉的β-Expansin与无变应原性的Expansin分开进化.结论 通过对花粉变应原的蛋白家族分类,可为变态反应学的基础研究、过敏性疾病的临床诊疗提供参考,并有助于快速发现新的致敏物种和新的变应原.Profilin的高度保守性可能是交叉反应(cross reactivity)发生的主要原因之一.
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花粉变应原的分离与鉴定
花粉变应原的分离与鉴定是研究花粉变应原性的基础,同时也是建立变应原标准定量方法以实现花粉变应原制剂标准化的前提.在花粉症的其他防治研究中,花粉变应原的分离与鉴定可为分子诊断方法的建立、低致敏性重组变应原疫苗、肽段疫苗及DNA疫苗的研究奠定良好的基础,也有利于特异性免疫治疗机制的阐明.因此,花粉变应原的分离和鉴定对花粉症及其防治研究具有重要意义.
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花粉变应原研究概况
花粉症又称季节性变应性鼻炎或枯草热,是敏感个体对花粉的一种超敏反应.据调查发现50%的过敏性疾病患者对草花粉过敏[1].机体首次接触花粉变应原,体内产生IgE抗体,结合于肥大细胞和嗜碱性粒细胞,再次接触时,花粉变应原与上述细胞表面两个或两个以上的临近IgE分子搭桥结合,致肥大细胞脱颗粒,释放生物活性介质,引起鼻粘膜、眼结膜和支气管卡他炎症,甚至哮喘发作.自然界花粉种类繁多,仅少数可引起花粉症.绝大多数花粉变应原为风媒传播,须具备以下条件:产生花粉的植物广泛生长;花粉量大、授粉期长;花粉体积小、质量轻、易飘散.本文拟从以下几方面就花粉变应原的研究概况作一综述.
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花粉症
花粉症(花粉热)又称季节性变应性鼻炎或枯草热,是特应性体质患者被花粉变应原致敏后引起的一系列的病理生理过程.主要表现为呼吸道和眼的卡他性炎症,偶尔也引起皮肤或其他器官的病变.花粉症有明显的季节性和地域性.霉菌、尘螨或食物接触也可引起相同的症状,只是季节性不明显.其实,它是变应性鼻炎的一个类型,称为常年性过敏性鼻炎.本病与枯草无关,一般也不发热,但由于历史的原因,一些早期的文献还一直沿用此名.
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过敏性疾病患者常见花粉变应原相关性研究
通过对441例过敏性疾病患者蒿、豚、藜、苍耳四种花粉变应原血清特异性免疫球蛋白E(sIgE)水平进行相关性分析,初步探讨四种变应原之间是否存在交叉反应.结果显示sIgE 2级及以下者,所有变应原两两之间均呈正相关;3级及以上者,豚藜、豚苍耳和藜苍耳均呈显著相关,蒿豚低度相关,蒿藜和蒿苍耳均不相关.提示蒿藜及蒿苍耳的相关性可能是假阳性造成的,不存在交叉反应.蒿豚不同级别相关系数均较低,其交叉反应可能是发生在小分子蛋白间的.豚藜、豚苍耳和藜苍耳不同级别相关系数均较高,可能存在着主要或多种致敏蛋白分子间的交叉反应.
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花粉变应原的标准化
自英国Charies Blackley在1873年进行大气孢粉学研究,证实花粉症是由花粉引起的以来,世界各地对花粉及其变应原进行了大量的研究.人们发现花粉变应原的成份极为复杂,普通短豚草花粉的提取物就可测到能与特异人IgE结合的22种蛋白质,Amba1,Ambα2,Ambα3,Ambα5,Ambα6都是它的主要变应原[1],这就为花粉变应原的标准化带来了一定困难.
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白花鬼针草花粉过敏原的分离鉴定与纯化
目的：提取和分离纯化白花鬼针草花粉主要过敏原，并鉴定主要过敏原的致敏性。方法提取白花鬼针草花粉蛋白粗提液，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离粗提液蛋白组分并测定其分子质量，经离子交换层析法分离纯化几类主要的蛋白，Western blotting分别检测其与花粉过敏患者血清 IgE结合情况及10位正常人阴性混合血清结合情况，对比鉴定每种主要蛋白质致敏原的致敏性。结果 SDS-PAGE 结果示：在12．5～120 ku之间广泛分布了20余条蛋白条带，其中主带7条，分子质量在35～70 ku和10～15 ku的区带蛋白含量为丰富，余下的范围内还有约10余条次带。Westen-blotting检测示：白花鬼针草花粉变应原的致敏性强，与花粉过敏患者血清特异性 IgE结合大。离子交换层析出6类主要变应原蛋白，其分子质量分别为70、65、54、49、39及33 ku；阴性对照组 Westen-blotting在70 ku处有弱显色。结论白花鬼针草花粉的主要过敏原为70、65、54、49、39及33 ku；70 ku变应原致敏性强。
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变应性鼻炎的中医辨治探讨
变应性鼻炎是IgE介导的鼻粘膜炎性疾病,以喷嚏,鼻漏,鼻粘膜充血和鼻痒为表现的临床常见难治病.相当于中医鼻鼽的范畴.其由空气传播花粉变应原引起季节性发病,环境变应原则引起常年性发病.本病可使患者生活质量下降,影响工作和学习,特别在儿童可引起发育迟缓.笔者在临床中运用名中医祝湛予的过敏煎[1]进行加减治疗,取得了较好的临床效果.
