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PD-L1信号对T细胞体外激发的调节作用
目的探讨PD-L1信号在PHA体外激发体系中对人外周血T细胞的协同调节作用.方法采用10μg/ml PHA刺激人外周血T细胞体外培养体系,加入转基因细胞PD-L1/L929混合培养;免疫荧光标记和流式细胞仪分析T细胞表型及细胞周期;3H-TdR掺入法观察T细胞的增殖;ELISA法检测T细胞对IL-2和IFN-γ的产生.结果 PD-L1转基因细胞在PHA激发T细胞增殖的培养体系中,具有显著下调T细胞活化表型,抑制T细胞对PHA促增殖的反应性,这种抑制效应与其阻断T细胞于G0/G1细胞周期及使活化T细胞分泌IL-2和IFN-γ的水平下降有关.同时还发现PD-L1信号能抑制PHA介导的T细胞活化诱导凋亡.结论 PD-L1信号在体外PHA激发T细胞培养体系中,具有显著的负性调节其活化增殖和相应功能的作用.
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催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导的人外周血T细胞凋亡的影响
目的 探讨催乳素(PRL)在T细胞的活化诱导凋亡(activation induced cell death,AICD)中的作用.方法 用葡萄球菌肠毒素(sEA)体外刺激人外周血T细胞作为T细胞AICD的模型,在第2次向模型中加入SEA诱导T细胞凋亡的同时,分别加入3种不同浓度的hPRL(20、300和1000 ng/ml)进行干预,同时设不含hPRL的对照组.0～24 h内,以MTT法检测T细胞的增殖情况.PI染色后用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA.流式检测T细胞的Fas和FasL的表达水平变化.Western blot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax.结果 在T细胞的AICD模型中高浓度PRL组(300、1000 ng/ml)其T细胞增殖得到显著维持(P＜0.05),各PRL处理组T细胞凋亡率比对照组降低了32.9%～78.2%(P＜0.05).PRL组(300、1000 ng/ml)Bax/Bcl-2比值比对照组下降了44.4%～46.0%(P＜0.05).PRL可明显抑制细胞表面Fas和FasL的表达,其中各PRL处理组Fas的细胞阳性率比对照组下降了51.1%～75.0%(P＜0.01),FasL的细胞阳性率比对照组下降了28.2%～39.1%(P＜0.01).结论 在SEA诱导T细胞的AICD过程中,PRL可通过抑制Fas、FasL和Bax的表达,并提高Bcl-2的表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞的增殖.
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催乳素对葡萄球菌肠毒素A诱导T细胞凋亡的影响
目的:观察作为重要细胞因子的催乳素在T细胞活化诱导凋亡过程中的作用.方法:实验于2005-03/2006-06在校级实验室新乡医学院免疫学实验室完成.实验材料:正常人外周血由新乡医学院第一附属医院提供,葡萄球菌肠毒素A(sigma).实验方法:①T细胞活化诱导凋亡模型的建立:取健康人外周血5 mL,加入等体积淋巴细胞分离液,采用密度梯度离心法获得淋巴细胞.完全1640培养基重悬细胞,加入葡萄球菌肠毒素A(SEA),置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养,至第4天,800 r/min离心10 min,以新鲜完全1640培养基换液,尽可能除去SEA.培养液中加入人白细胞介素2继续培养2周待用.②催乳素干预:将获得细胞离心并弃去培养液,用新鲜完全1640培养基重悬,调整细胞密度为5x109 L-1,加入24孔板中,分别加入4 mg/L SEA诱导细胞凋亡,同时加入20,300,1 000 μg/L催乳素,以不加催乳素的为对照组.③实验评估:于培养0,16,24 h时采用MTT法检测T细胞增殖情况.培养16 h时用流式技术检测细胞凋亡情况,并通过琼脂糖凝胶电泳检测T细胞凋亡DNA,并采用流式细胞术检测T细胞膜表面Fas和FasL,Western Blot法检测T细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax.结果:①MTT法检测T细胞增殖:不同质量浓度催乳素干预组在16,24 h的T细胞数量较对照组明显增多[吸光度值:对照组:0.65±0.02,0.54±0.04;20 μg/L催乳素组:0.81±0.04,0.71±0.11;300 μg/L催乳素组:1.14±0.10,1.22±0.10;1 000μg/L催乳素组:1.12±0,12,1.22±0.12,P＜0.01].0～24 h内300,1 000μg/L催乳素组T细胞数量呈上升趋势(P＜0.01),20μg/L催乳素组T细胞数量呈下降趋势(P＜0.01).②流式细胞术检测T细胞凋亡率:培养16h时,与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组T细胞凋亡率降低[(46.80±9.21)%,(31.40±7.03)%,(17.50±4.29)%,(10.20±3.84)%,P＜0.05].③流式细胞术检测T细胞膜表面Fas、FasL:与对照组比较,各质量浓度催乳素干预组Fas和FasL细胞阳性率均下降[Fas:(88.0±17.3)%,(43.0±13.1)%,(22.0±6.7)%,(25.0±8.2)%,P＜0.01;FasL:(46.0±17.5)%,(33.0±11.4)%,(31.0±14.0)%,(28.0±13.8)%,P＜0.05].④Western Blot检测T细胞Bcl-2、Bax:与对照组比较,20μg/L催乳素组Bax和Bcl-2表达均无明显差异(P＞0.05),300 μg/L,1 000μg/L催乳素组Bax表达明显降低(P＜0.05),Bcl-2表达明显升高(P＜0.05).结论:在葡萄球菌肠毒素A诱导的T细胞活化诱导凋亡过程中,催乳素以细胞因子的身份,可通过抑制Fas、FasL和Bax表达,提高Bcl-2表达,来抑制T细胞凋亡,维持T细胞增殖.
