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hCEACAM1介导淋病奈瑟菌对COS-1细胞的黏附
目的 研究人癌胚抗原相关细胞黏附因子1(hCEACAM1)在淋病奈瑟菌黏附宿主细胞过程中的作用.方法 将hCEACAM1 cDNA置于hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子之后,构建重组真核表达载体pCDPGICEA1.转染COS-1细胞,G418筛选和流式细胞术分选稳定表达hCEACAM1的基因转染细胞.细菌黏附实验检测淋病奈瑟菌对基因转染COS-1细胞的黏附.结果 在hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子的作用下,hCEACAM1 cDNA在COS-1细胞获得高效表达,淋病奈瑟菌可以黏附表达hCEACAM1的COS-1细胞.结论 hCEACAM1可以介导淋病奈瑟菌对动物细胞的黏附,可能是淋病奈瑟菌特异性感染人体的一种重要受体,可用来制备淋病奈瑟菌感染的相应转基因动物模型.
关键词： 淋病奈瑟菌 人癌胚抗原相关细胞黏附因子1 基因转染 COS-1细胞 黏附 -
人脂蛋白脂酶基因重组质粒的构建及其表达
目的 研究野生型人脂蛋白脂酶(LPL)cDNA重组表达质粒的构建了及其在COS-1细胞中的表达.方法 采用RT-PCR法从人大网膜脂肪组织获取LPL cDNA基因,以pcDNA3.1Zeo(+)质粒作为载体,运用基因克隆技术构建野生型人LPLcDNA重组质粒,限制性内切酶酶切、PCR以及双向测序鉴定重组质粒;运用Lipofectamine 2000TM将重组pcDNA3.1Zeo(+)-LPLcDNA质粒导入COS-1细胞,RT-PCR法检测LPL mRNA,ELISA法和比色法分别检测细胞裂解液及细胞培养基中LPL浓度及活性.结果 经限制性内切酶酶切及PCR鉴定,证实LPL基因已被连接到pcDNA3.1Zeo(+)质粒中;DNA双向测序证实其产物与基因库中LPL基因序列完全一致.LPL mRNA和蛋白表达及其活性测定结果表明,pcDNA3.1Zeo(+)-LPL cDNA重组质粒已转染入COS-1细胞中.结论 实验成功构建野生型人LPL cDNA重组表达质粒,并证实其能在COS-1细胞中有效表达.
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人釉原蛋白重组质粒PcDNA3-AMG在COS-1细胞系中的表达
目的 研究人釉原蛋白(AMG)重组质粒PcDNA3-AMG在COS-1细胞系中的表达.方法 采用脂质体载体法将釉原蛋白重组质粒PcDNA3-AMG导入COS-1细胞系,用Zeoin筛选得到稳定转染克隆,并经ELISA检测细胞内和细胞培养液中重组釉原蛋白AMG的表达.结果 在未经转染的对照组细胞内和细胞培养液中均未检测到AMG的表达,而经转染的实验组不论细胞内或细胞培养液中均检测到AMG的较高表达,重组质粒PcDNA3-AMG转染组细胞内AMG浓度达0.253 μg/ml.结论 PcDNA3-AMG具有较强的在真核细胞系中表达和分泌AMG的能力,适宜基因工程体外制备重组釉原蛋白.
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人釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在COS-1细胞系中表达
目的研究人釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在COS-1细胞系中的表达,为基因工程制备釉原蛋白奠定基础.方法采用脂质体载体法将釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG导入COS-1细胞系,用Zeoin筛选得到稳定转染克隆,并经免疫组化及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞内和细胞培养液中重组釉原蛋白的表达.结果在未经转染的对照组细胞内和细胞培养液中均未检测到重组釉原蛋白的表达,而经转染的实验组不论细胞内或细胞培养液中均检测到重组釉原蛋白的较高表达,重组质粒PsecTaq2A-AMG转染组ELISA定量检测细胞内重组釉原蛋白浓度达0.877 μg/ml.结论 PsecTaq2A-AMG具有较强的在真核细胞系中表达和分泌重组釉原蛋白的能力,适宜基因工程体外制备重组釉原蛋白.
