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靶向融合防龋重组质粒pGJA-P免疫定菌鼠的研究
变异链球菌(Streptococcus mutans,S. mutans)是公认的主要致龋菌,细胞表面蛋白抗原PAc和葡糖基转移酶(glucosyltransferases,GTFs)是S.mutans的重要致龋毒力因子.我们构建了同时针对PAc和GTF的融合防龋重组质粒pGLUA-P,经动物实验证实确有防龋作用.Boyle等提出同时表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4,CTLA4)和目的抗原融合蛋白的DNA疫苗能加快和增强免疫反应,原因是通过CTLA4与APC表面的B7结合,目的抗原被靶向引导至APC,从而加强了APC对目的抗原的提呈作用.据此我们在pGLUA-P中引入编码人CTLA4胞外区和Igγ1恒定区的基因,构建出靶向融合防龋重组质粒pGJA-P.本实验用pGLUA-P和pGJA-P重组质粒免疫定菌鼠,观察CTLA4的靶向作用对免疫效果的影响.
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变形链球菌表面蛋白及葡糖基转移酶基因疫苗的防龋动物实验
变形链球菌(S.mutans)是主要的致龋菌,其毒力因子PAc和GTF-B在龋病的发生和发展中有重要的生物学作用.我们利用变形链球菌防龋基因疫苗pcDNA3-pac和pcDNA3-gtfB单独及联合免疫定菌鼠后评价龋损,以初步证实基因疫苗的免疫防龋效果.
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基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究Ⅱ:实验龋齿记分研究
目的:了解基因重组乳链球菌防龋疫苗的抗龋效果.方法:采用携带有变形链球菌表面蛋白(PAc)结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌鼠进行免疫,统计龋齿记分进行比较.结果:经过重组乳链球菌免疫的大鼠口腔内龋齿记分明显低于未重组的乳链球菌LM0230免疫组.结论:基因重组乳链球菌能有效预防龋病的发生,可望在将来作为一种新的免疫原用于龋病的免疫学预防中.
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GTF-PAc融合防龋DNA疫苗研究(Ⅲ)pGLUA-P免疫定菌鼠防龋研究
目的:了解GTF-PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P激发机体免疫反应和抑制龋病的能力.方法:将pGLUA-P和携带pac基因A-P基因片段的DNA防龋疫苗pCIA-P以颌下腺周围区域皮下注射(TSG)和股四头肌注射途径分别免疫定菌SD大鼠,以ELISA法检测血清和唾液中的抗体水平,采用Keyes法评估大鼠磨牙患龋情况.结果:pGLUA-P和pCIA-P经TSG免疫及pGLUA-P经股四头肌注射免疫组的血清抗PAc的IgG抗体水平明显高于对照组(P<0.05),pGLUA-P和pCIA-P经TSG免疫组的唾液抗PAc的IgA抗体水平明显高于其余组(P<0.05); pGLUA-P经TSG免疫组的釉质龋和牙本质浅龋记分低(P<0.05);经TSG免疫pGLUA-P组和pCIA-P组的牙本质中龋记分低(P<0.05).结论:GTF-PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P可以有效地诱导机体的免疫反应,抑制龋病的发生和发展,防龋效果优于防龋DNA疫苗pCIA-P.
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特异性抗变形链球菌鸡蛋黄抗体IgY对定菌鼠龋齿发生的影响
目的研究特异性抗变IgY形链球菌鸡蛋黄抗体对定菌鼠龋齿发生、发展的影响.方法将35只Wistar 大鼠随机分为5组,接种耐链霉素的S.mutans MT 8148,并给予致龋饲料,使用特异性抗变链的鸡蛋黄抗体IgY通过不同方式对实验动物进行被动免疫.实验结束后,根据Keyes评分方法作龋齿计分,并采用t检验进行统计分析.结果在食物中添加特异性IgY冻干粉或经口腔喷雾IgY漱口水均能显著降低大鼠牙釉质及牙本质外层龋齿计分.给予含特异性抗体的鸡蛋黄饮食能减低龋齿的发生,但与对照组比较无显著性差异.结论特异性抗变链的鸡蛋黄抗体IgY能减少定菌鼠龋齿的发生,减缓龋齿的发展.
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减毒鼠伤寒沙门氏菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究
目的:本研究通过建立定菌鼠模型,采用携带变形链球菌PAc A区片段的减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A) 防龋疫苗,经不同途径免疫定菌大鼠,观察其在大鼠肠道定居的能力和诱发的特异性免疫应答反应.方法:采用携带变形链球菌表面蛋白基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A),通过口服、皮下、粘膜下等途径免疫50只定菌SD大白鼠,以酶联免疫吸附试验对鼠血清及唾液中抗PAc-IgG、SIgA水平进行测定.采集不同时间大鼠粪便样本,观察减毒鼠伤寒沙门氏菌在肠道的定居情况,并进行质粒抽提鉴定.结果:口服活菌苗组免疫后血清PAc-IgG及唾液SIgA水平皆明显高于免疫前(P<0.01).各组免疫水平比较,口服活菌苗组免疫水平也明显高于其它4组(P<0.01).其大鼠粪便中存在大量氨苄抗性的沙门氏菌,即沙门氏菌SL3261 (pET-17b/A).结论:用基因重组减毒鼠伤寒沙门氏菌免疫定菌大鼠,能刺激其产生免疫反应.重组减毒鼠伤寒沙门氏菌S.typhimurium SL3261(pET-17b/A)可在大鼠肠道较持久的寄生,并能较稳定地携带质粒.