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中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白A的克隆表达及免疫保护性的初步研究
目的克隆并表达中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型代表菌株PD91的外膜蛋白A(OspA),并对其免疫保护性进行初步研究,为进一步研制莱姆病疫苗提供基础. 方法用聚合酶链反应(PCR)从莱姆病螺旋体PD91全基因组DNA中将OspA基因调出,插入原核表达载体P42,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物用SDS-PAGE、Western blot分析,并进行基因序列测定.用重组OspA(rOspA)免疫新西兰家兔,用间接免疫荧光(IFA)检测其血清特异性抗体(IgG),并进行体外中和试验,从而对其免疫保护性有初步的了解. 结果 rOspA在宿主菌内表达高效、稳定;Western blot显示其与抗OspA的多抗有较好的免疫反应性;用rOspA免疫新西兰家兔后,其血清抗体(IgG)效价显著升高(32倍),体外中和试验表明,每毫升兔抗rOspA血清可杀灭105个莱姆病螺旋体. 结论在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因型的OspA基因进行了克隆和表达.rOspA有较好的免疫保护性,可作为多价莱姆病疫苗的一种成分.
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中国莱姆病螺旋体FP1外膜蛋白C克隆表达及免疫保护性初步研究
目的：克隆并表达中国莱姆病螺旋体( Borrelia afzelli)基因型代表菌株FP1的外膜蛋白C( OspC),并对其免疫保护性进行初步研究。方法聚合酶链反应( PCR)扩增莱姆病螺旋体FP1的ospC基因,克隆至原核表达载体pET-30a上,构建pET-30a-OspC重组质粒,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达。表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化,SDS-PAGE电泳、Western blot分析。将rOspC免疫新西兰白兔,间接免疫荧光方法( IFA)检测免疫前、后兔血清中特异性抗体IgG的滴度,进行体外中和试验,从而对OspC的免疫保护性有初步的了解。结果重组质粒pET-30a-OspC构建成功并在宿主菌内高效表达；Western blot表明rOspC与莱姆病螺旋体FP1的多抗有明显的抗原抗体反应；rOspC免疫兔血清IgG效价显著升高(1∶3200或1∶6400)；体外中和试验表明实验组的免疫兔血清均能中和106个/ml的莱姆病螺旋体。结论莱姆病螺旋体的rOspC蛋白具有一定的免疫保护性,可作为研制莱姆病多价亚单位疫苗的一个成分。
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眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的保护试验
目的:制备特异性高的鸡眼镜王蛇毒卵黄抗体,并对其进行体外和体内保护试验.方法:用眼镜王蛇毒免疫母鸡,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体IgY,用水溶解法提取IgY,进行小鼠体外中和试验和体内保护试验.结果:体外、体内保护试验显示,6 mg/kg的IgY可有效中和小鼠体内低剂量(≤3LD50)的蛇毒,对致死剂量蛇毒有很好的保护效应.结论:从卵黄中制备的抗眼镜王蛇毒IgY可有效地中和眼镜王蛇毒.
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卵黄中蝮蛇蛇毒抗体对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用
目的:制备特异性高的蝮蛇蛇毒卵黄抗体,并对其体内保护和体外保护作用进行了研究.方法:用蝮蛇蛇毒作为抗原免疫鸡,使之在蛋黄中产生抗体IgY,然后用聚乙二醇法提取IgY,并通过小鼠体内保护和体外中和试验,研究IgY对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用.结果: 通过本法制得的IgY在体内和体外试验中都能中和蝮蛇蛇毒,对蝮蛇蛇毒急性中毒的小鼠有明显的保护作用.结论:聚乙二醇法从免疫鸡蛋黄中提取的蛇毒抗体IgY,可用于救治蝮蛇蛇毒急性中毒的小白鼠.
关键词： 蛋黄抗体IgG(IgY) 体内保护作用 体外中和试验
