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小鼠不同基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系研究
目的 研究实验小鼠基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系.以保证根据小鼠基因型选择适于进行免疫应答检测的实验小鼠,保证进行疫苗免疫应答检测时的规范化和标准化.方法 应用小鼠NIH1、2、3个种群和BALB/c、DBA/1共3种不同品系和同一品系不同种群的小鼠各40只,乙肝疫苗稀释4个不同的稀释度,每个稀释度注射动物10只.酶标法检测乙肝疫苗免疫效力,测定乙肝疫苗的半数有效剂量(ED50)值,再通过微量细胞毒法和PCR方法 检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分比,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性.结果 重组乙肝疫苗(酿酒酵母)经BALB/c鼠检测疫苗的ED50值为2.5μg/ml;经1号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.0μg/ml;经2号种群NIH鼠检测疫苗的EDM50值为1.3μg/ml;经3号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.3μg/ml;经上海某公司DBA/1鼠检测疫苗的ED50值为0.8μg/ml,对乙肝疫苗的效力反应强.根据<中国药典>2005年版三部的规定,疫苗的ED50值为≤1.5μg/ml.所以得出的结果 是2号种群NIH鼠和DBA/1鼠检测疫苗是合格的.基因检测结果 DBA/1为H-2q近交系小鼠,2号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,3号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是30%,而1号种群NIH小鼠含有H-2q型基因百分比为56%,因此DBA/1小鼠和2号种群NIH鼠对乙肝疫苗均产生高应答效应,且远远高于免疫基因型为H-2d的BALB/c小鼠.结论 在进行乙肝疫苗效力鉴定时选择含有q型基因较多的NIH小鼠作为检测动物可以取得较好的应答效果.
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用于乙肝疫苗效力检定的小鼠种群的建立
目的 在进行乙肝疫苗效力检测时应用统一的动物种群.方法 目前评价乙肝疫苗免疫效力的主要方法是用小鼠测定乙肝疫苗的ED50值(接种疫苗后使50%的动物抗体阳转的疫苗稀释度的倒数),而小鼠对HBsAg免疫应答的水平与H-2单倍型密切相关.因此我们通过微量细胞毒法和PCR方法检测小鼠的H-2单倍型的特点,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性,解决实际工作中的问题.结果 通过多方面的实验验证,NIH鼠可以对乙肝疫苗产生高应答效应.结论 NIH鼠的H-2单倍型中有q型基因,同时NIH鼠保持了原封闭群动物繁殖力强生长速度快等优点,所以便于进行乙肝疫苗效力检测时应用.
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两个NIH小鼠种群对不同种类的乙肝疫苗免疫应答效应的比较
目的 比较两种不同的NIH 小鼠种群基因组DNA中H-2q单倍型的百分比,对重组基因乙型肝炎疫苗 (酿酒酵母)、重组基因乙型肝炎疫苗 (CHO)、重组基因乙型肝炎疫苗 (汉逊酵母) 和治疗性乙型肝炎疫苗 (乙克) 免疫应答的影响.方法检测乙肝疫苗免疫效力用酶标法,测定乙肝疫苗的ED50值,再通过微量细胞毒法和PCR方法检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分数,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性.结果经验证,经1号NIH小鼠检测结果证实,重组基因乙型肝炎免疫效力依次为CHO＞汉逊＞酿酒,疗性乙型肝炎疫苗 (乙克) 效力检测合格,但经2号NIH 小鼠检测结果显示除CHO疫苗合格外,其他三种疫苗检测结果均为不合格.基因检测结果为,1号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,而2号种群NIH 小鼠含有H-2q型基因基因百分比为30%,因此不同的q型基因百分比导致了不同的检测结果. 结论根据本研究结果表明虽然NIH鼠的H-2单倍型中有q型基因,但不同来源的小鼠种群之间会存在差异,经不同的环境饲养后,小鼠的基因会发生不同的变化,因此在进行生物制品检定时,要注意不同品系小鼠及同一品系小鼠不同种群之间的差异对试验本身的影响.建立一种"动物免疫"的概念.
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小鼠LAK细胞MHC表达水平对其体外杀伤肿瘤活性的影响
目的 探讨LAK细胞表面MHC的表达水平与体外肿瘤细胞杀伤活性的关系.方法 使用siRNA沉默小鼠LAK细胞MHC-Ⅰ(H-2Kd)分子的表达,同时设空转染组和无关序列组,流式细胞仪检测不同组别靶蛋白的表达,LDH释放试验检测H-2Kd表达降低的LAK细胞对K562和H22肿瘤细胞株的杀伤活性.结果 流式细胞检测证实siRNA能够抑制靶蛋白的表达,H-2Kd表达降低组对K562和H22肿瘤细胞的杀伤活性与对照组相比明显降低,空转染组和无关序列组与对照组无显著性差异.结论 小鼠脾LAK细胞表面H-2Kd的表达水平与其体外杀伤活性相关.
关键词： H-2 小的干涉双链RNA 淋巴因子激活的杀伤细胞 细胞株
