首页 > 文献资料
-
结核分枝杆菌DNA指纹技术研究及其应用
目的建立限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)方法分析结核分枝杆菌DNA指纹并探讨其分子流行病学特点及与药物敏感性的关系.方法提取结核分枝杆菌DNA,经内切酶PvuⅡ酶切、琼脂糖凝胶电泳、Southern转印后,与地高辛标记的IS6110探针杂交,以酶免疫试验检测信号,比较各临床分离株IS6110指纹.结果根据IS6110指纹特征的同源性的高低,将所检测的127株结核分枝杆菌分为A、B、C和D 4簇,4簇的株数(比例)分别为50(39.4%)、12(9.4%)、16(12.6%)和49(38.6%).各簇菌株的IS6110指纹特征:A簇菌株间相似系数在70%以上,共同拥有1.3kb、1.9kb、2.1kb、2.7kb、3.3kb、4.5kb、5.0kb、6.5kb等位置的条带;B簇菌株间相似系数也在70%以上,与A簇菌株族间相似系数较高,为65%,与A簇相比,1.9kb以上条带与A簇相似,但缺乏1.9kb以下的条带;C簇带型分布散且较为平均,在1.3kb、2.2kb、3.3kb、5.5kb等位置都有共同拥有的片段;D簇菌株条带数目少,呈现高度多态性,所有菌株之间没有相同位置的条带,相互间同源性较低.其中A、B、C 3簇相似系数在55%以上,且有相同位置的片段,将它们称为"成簇菌株".元共同条带的D簇称为"不成簇菌株".30岁以上人群"不成簇菌株"所占比重高于30岁以下人群,低年龄组"成簇菌株"比例高,近期传播结核较为严重.检测菌株的多态性变化在结核分枝杆菌耐药与敏感株中的分布,A族菌株的耐药比例低于其它3簇菌株.未发现结核分枝杆菌DNA指纹特征与居住状况和职业之间的联系,也没有发现传播频率在男女性别之间存在差异.结论深圳地区菌株基因型与北京地区菌株相似.深圳地区低年龄组(30岁以下)的结核病传播以近期传播为主.与北京地区相似菌株耐药比例低于其它型菌株.
关键词： 结核分枝杆菌 DNA指纹 限制性内切酶片段长度多态性 -
小儿常见感染菌16S-23S rRNA基因区间的分子生物学研究
目的探讨聚合酶链反应(PCR)加限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析在细菌rDNA区间检测中的应用.方法以16S-23SrRNA基因区间为靶序列,设计引物,选择合适的内切酶,采用PCR法加RFLP法检测标准菌株及临床菌株的rDNA区间.结果26株不同的标准菌株经PCR扩增后,分别出现一条带,两条带,三条带及多条带的不同DNA图谱,敏感性试验可检出2.5CFU的细菌,与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应.其中14种菌经一步PCR扩增即可区分.另12种菌除肺炎克雷伯氏菌与坚韧肠球菌经HinfI或Alu I酶切后仍不能区分外,其余经其中一内切酶酶切后均能区分.32例血培养阳性标本均扩增出与相应标准菌株相一致的图谱.结论16S23S rRNA区间基因PCR扩增加RFLP技术检测细菌rDNA区间,具有特异、敏感、快速、准确的特点,为细菌感染的病原诊断提供新的科学依据.
-
改良PCR-RFLP方法快速鉴别常见致病念珠菌
目的:建立快速准确鉴别常见致病念珠菌菌落的PCR-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)方法.方法:结合直接菌落PCR检测技术,使用通用引物扩增6种念珠菌(包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌)ITS1-ITS2区.分别用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、MspⅠ和Hpy F10Ⅵ等5种内切酶对PCR产物进行酶切,建立以菌落PCR为基础的RFLP方法,然后对30株临床株进行PCR-RFLP图谱分析.结果:应用MspⅠ进行酶切反应,6种念珠菌的酶切带型有明显差异,易于鉴别.结论:通过直接菌落PCR检测技术,使用MspⅠ进行酶切,可以经1次反应,简便快速鉴别出常见的6种致病念珠菌,为临床念珠菌感染的快速准确诊断赢得时间.
关键词： 念珠菌 菌落PCR 限制性内切酶片段长度多态性 -
中国独龙族人群中细胞色素P450 2C19基因多态性的研究
目的研究细胞色素P450 2C19(CYP2C19)基因在中国云南地区特有少数民族人群中的基因型及突变频率.方法采用聚合酶链式反应(PCR)与限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术.结果 205例独龙族人群中的基因型(其中有一个家系),84人为CYP2C19野生型纯合子(wt/wt);98人为CYP2C19m1杂合子(wt/m1);23人为CYP2C19m1突变纯合子(m1/m1).突变频率为0.351.结论与国内外相关报道比较,结果与文献报道相符.
-
中国独龙族人群中细胞色素P450 2C19基因多态性的研究(摘要)
细胞色素P450 2C19(CYP2C19)基因是细胞色素P4502C亚家族的主要成员,参与体内多种药物的代谢.现已证明,CYP2C19是主要的S-美酚妥英4'-羟化酶,在人群中的代谢呈现出明显的遗传多态性,并依此将个体表型分为强代谢者(EM)和弱代谢者(PM).
-
中国独龙族人群中细胞色素P450 2C19基因多态性的研究
目的:为研究CYP2C19基因在中国云南地区特色少数民族独龙族人群中的基因型及突变频率.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)与限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术分析了205例独龙族人群中的基因型.结果:84人为CYP2C19野生型纯合子(wt/wt);98人为CYP2C19 m1杂合子(wt/m1);23人为CYP2C19 m1突变纯合子(m1/m1).突变频率为0.351.结果与苗族人群CYP2C19基因突变频率有显著差异,但与国内外其他相关报道未见显著差异.
