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MiR-132-3p介导FOXO1对内皮祖细胞增殖的调控作用
目的 探讨miR-132-3p对内皮祖细胞增殖的影响及调控机制,为深静脉血栓的治疗提供新的理论依据.方法 随机(随机数字法)挑选血栓患者22例,健康志愿者27例,采集静脉血,分离血浆和内皮祖细胞,实时定量PCR检测miR-132-3p在血浆及内皮祖细胞中的表达;实时定量 PCR检测常氧和低氧条件下内皮祖细胞中miR-132-3p的表达;用电转法将miR-132-3p的模拟物(实验组)与特异性siRNA (对照组)分别转染入内皮祖细胞,MMT和CCK-8法检测miR-132-3p对内皮祖细胞增殖的影响;利用萤光素酶实验和免疫印迹实验分析miR-132-3p对内皮细胞中FOXO1表达的影响.结果 血栓患者血浆中miR-132-3p平均水平为健康志愿者的(0.45 ±0.05)倍(P＜0.05);低氧条件下内皮祖细胞中miR-132-3p表达水平为常氧状态下的(0.23 ± 0.13 )倍(P＜0.05);实验组中miR-132-3p的表达水平是对照组的(15.72 ± 2.06)倍,MMT法检测结果显示在低氧条件下,实验组细胞增殖是对照组的(7.79±1.37)倍(P＜0.01 ),CCK-8法检测结果表明实验组的细胞增殖是对照组的(6.46 ± 0.38)倍(P＜0.01);软件分析显示FOXO1为miR-132-3p的直接靶标,在低氧条件下miR-132-3p模拟物mimic转染的内皮祖细胞中荧光素酶活性是siRNA处理组的0.47倍,免疫印迹结果显示在低氧条件下miR-132-3p模拟物mimic转染的内皮祖细胞中FOXO1蛋白表达水平是siRNA处理组的0.18倍.结论 与健康志愿者相比,血栓患者miR-132-3p表达明显降低,结果促进了FOXO1的表达,抑制了内皮祖细胞的增殖,这可能与静脉血栓的形成密切相关.
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高表达miR-132-3 p间充质干细胞外泌体对缺氧/复氧受损脑微血管内皮细胞功能的改善作用
目的 研究高表达miR-132-3p间充质干细胞(MSCs)释放的外泌体(EXs)对缺氧/复氧(H/R)受损内皮细胞功能的作用. 方法 原代培养从C57BL/6小鼠骨髓中提取的MSCs,采用装载miR-132-3p载体的慢病毒感染MSCs获得MSCmiR-132-3p,同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染MSCs获得 MSCNC.分离提取 MSCNC及 MSCmiR-132-3p释放的 EXs,分别获得 MSC-EXs 及MSC-EXsmiR-132-3p.将所得EXs与H/R受损小鼠脑微血管内皮细胞(bend3)共培养,根据培养条件将细胞分为正常培养组(细胞正常培养)、H/R组(制作H/R模型)、 MSC-EXs处理组( MSC-EXs共培养)、 MSC-EXsmiR-132-3p处理组( MSC-EXsmiR-132-3p共培养)、 MSC-EXsmiR-132-3p+LY294002 组[细胞与MSC-EXsmiR-132-3p共培养前加入磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)信号通路阻断剂LY294002(20 μmol/L)处理].实时荧光定量聚合酶链反应检测MSCs、MSC-EXs及bend3细胞中miR-132-3p的表达.血管形成试剂盒检测bend3细胞血管形成能力,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测bend3 细胞增殖能力,划痕实验检测bend3 细胞迁移能力,hochest33258 染色显示细胞的凋亡,Western blot检测蛋白激酶B( Akt)的磷酸化水平. 结果 与 H/R组相比,MSC-EXs处理组显著改善H/R诱导下bend3细胞受损的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平[ H/R组分别为(3 ± 1)条、0. 275 ± 0. 020、(147 ± 8) μm和0. 89 ± 0. 12;MSC-EXs处理组分别为(8 ± 3)条、0. 358 ± 0. 030、(218 ± 10) μm和1. 37 ± 0. 25,均P<0. 01],细胞凋亡明显减少[(47 ± 2)%比(63 ± 2)%,均P<0. 01].与MSC-EXs处理组比较,MSC-EXsmiR-132-3p处理组bend3细胞的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平增加[分别为(14 ± 3)条、0. 444 ± 0. 050、(357 ± 10) μm和1. 67 ± 0. 23,均P<0. 01],细胞凋亡明显减少[(34 ± 1)%,P<0. 01].与MSC-EXsmiR-132-3p处理组比较,MSC-EXsmiR-132-3p+LY294002组细胞的增殖、迁移、血管形成能力及Akt磷酸化水平明显减少[分别为(5 ± 2)条、0. 304 ± 0. 050、(175 ± 8) μm和0. 95 ± 0. 11,均P<0. 01]. 结论 高表达miR-132-3p的MSC-EXs能够通过激活PI3K/Akt信号通路改善H/R诱导受损脑血管内皮细胞多种生理功能.
关键词： miR-132-3p 间充质干细胞 外泌体 脑微血管内皮细胞 细胞功能
