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热惊厥幼龄大鼠脑内Fos和热休克蛋白-70及锌离子转运体3 mRNA表达的研究
目的 探讨热应激(Heat stress,HS)和热惊厥(Febrile convulsions,FC)对脑内FOS蛋白、热休克蛋白70(Heat stress protein-70,HSP-70)和锌离子转运体3(Zinc transporter 3,ZnT3)表达的影响.方法 清洁级21日龄雄性SD大鼠,体重(52～62)g,由浙江大学医学实验动物中心提供.36只大鼠随机分为正常对照组(8只)和热应激组(28只).28只热应激处理大鼠中15只达到5级(设为热性惊厥组,Febrile convulsion group,FC),10只未出现惊厥(设为单纯热应激组,Heat stress group,HS),3只达到2级惊厥,弃用.采用热水浴诱导21日龄大鼠FC模型,应用免疫组织化学技术对HS和FC大鼠Fos、HSP-70免疫反应性在不同脑区的表达进行分析,原位杂交检测ZnT3表达.计量资料以均数±标准差(-x±s)表示,首先作正态性W检验和方差齐性检验,符合正态性分布和总体方差相等时,采用方差分析.P＜0.05认为差异具有统计学意义.结果 FC组大鼠大脑皮层各区和海马各区Fos阳性细胞数明显高于HS组大鼠(P＜0.01).HS组和对照组未见HSP70-IR阳性细胞,而FC组则于大脑皮层、海马、杏仁核、丘脑及下丘脑见大量HSP70-IR阳性细胞,呈弥漫性分布.FC组海马区域可见明显ZnT3 mRNA表达,而HS组和对照组无明显表达.结论 FC组海马及大脑皮层各区FOS高表达,表明FC组大鼠脑神经元呈过度兴奋状态,为神经元的早期轻微损伤提供了依据.FC组出现HSP-70迅速表达,而HS组表达阴性,提示FC可能导致神经细胞在很早的时间内发生损伤变性.FC组海马ZnT3 mRNA明显表达提示FC组海马区域存在异常增高的锌离子转运.
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铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3表达的影响
目的 探讨铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3(zinc transporter 3,ZNT3)表达的影响.方法 将12只健康SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别为对照(去离子水)组和低(0.5 g/L乙酸铅)、高(2.0 g/L乙酸铅)剂量铅染毒组,每组4只.采取自由饮水方式进行染毒,自妊娠前10d至仔鼠断乳(出生后21 d).采用等离子体发射光谱(ICP-AES)法检测雄性仔鼠全血及海马组织中铅、锌的含量;采用RT-PCR法检测其海马组织中ZNT3 mRNA的表达水平;采用Western blot法检测其海马组织中ZNT3蛋白的表达.结果 与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠全血与海马组织中的铅含量均较高,锌含量均较低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着铅染毒剂量的升高,雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量呈上升趋势,锌含量呈下降趋势.与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 mRNA及蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P＜0.05);但高、低剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 mRNA及蛋白的表达水平间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 铅暴露上调了大鼠海马组织中ZNT3的表达水平,这可能与铅暴露使海马锌含量的降低有关.
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低锌对未成熟大鼠视网膜锌离子转运体3(ZnT-3)mRNA表达的影响
目的:通过观察视网膜锌离子转运体3(ZnT-3)mRNA表达对低锌饮食的反应,探索低锌是否会引起ZnT-3转录水平的调节.方法:将36只雄性SD大鼠(4周龄)随机分为三大组分别喂养2周(第1组)、4周(第2组)、6周(第3组),每组大鼠又随机分为两个亚组分别给予正常锌含量饮食和低锌饮食,第3组低锌饮食大鼠从第4周开始恢复正常饮食.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ZnT-3以及碳酸酐酶2(CA2)、碳酸酐酶14(CA14)的mRNA相对表达量.结果:大鼠锌摄入低下2周后,与空白对照组相比视网膜CA2和CA14的mRNA水平有所降低,而ZnT-3 mRNA表达量有所增高;锌摄入低下4周后,视网膜ZnT-3、CA2和CA14 mRNA表达量均明显下降;恢复正常锌饮食后2周,实验组视网膜ZnT-3、CA2和CA14的mRNA的表达回升与对照组无差异.结论:饮食锌的变化将导致大鼠视网膜ZnT-3在转录水平上的调节.含锌酶CA2和CA14mRNA表达也同时发生变化.为保持视网膜组织内锌含量的稳定,ZnT-3mRNA表达量随饮食含锌量降低的时间和程度而改变.
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急性热应激与热惊厥幼龄大鼠海马ZnT3 mRNA表达和代谢变化的1H-MRS波谱研究
目的 探讨氢质子磁共振波谱分析(1H-MRS)结合神经病理手段对急性热应激(HS)和热惊厥(FC)后脑神经元代谢和损伤的早期检测价值.方法 采用热水浴诱导21 d龄大鼠FC模型,应用1H-MRS检测HS和FC后脑内N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、复合胆碱(Cho)、肌酸(Cr)和乳酸(Lac)含量的变化,原位杂交检测海马锌离子转运体3(ZnT3)mRNA表达.结果 MRS检测结果显示对照组、HS组与FC组NAA/Cr比值分别为1.50±0.42,1.57±0.50和1.61±0.37,Cho/Cr比值分别为0.93±0.27,1.13±0.17和1.28±0.31,各组间差异均无统计学意义(P0.05);Lac/Cr仅见于FC组,为0.64±0.23.FC组海马齿状回检测到ZnT3 mRNA表达.结论 Lac波峰是惊厥性神经元损伤的特征性1H-MRS变化;ZnT3与海马苔藓纤维再生性发芽密切相关;单次短暂的FC发作也能使脑神经元早期发生不同于HS的显著的神经活性物质表达和物质代谢的变化,对脑神经元造成一定的损伤.
