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银杏苦内酯B对内毒素血症幼鼠肠道的保护作用
目的 胃肠功能障碍与严重感染引起的肠屏障功能破坏密切相关.通过应用血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)受体拮抗剂银杏苦内酯B(Ginkgolide B)对幼年大鼠内毒素血症小肠上皮细胞形态学及二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)的影响,探讨PAF在内毒素血症肠损伤中的作用.方法 18日龄Wistar大鼠,随机分为内毒素(lipopolysaccharide,LPS)组和PAF受体拮抗剂组(预防组和治疗组)及对照组(每一时相点n=8),注射LPS后1.5,3,6,24,48,72 h取回肠.LPS组和对照组分别腹腔注射内毒素5 mg/kg及生理盐水1 ml/kg;预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS前、后30 min腹腔注射PAF受体拮抗剂BN52021(Ginkgolide B)5 mg/kg.苏木精-伊红染色及透射电镜作形态学检查.采用分光光度计法分别测定回肠组织及血中DAO含量.根据数据的正态性和方差齐性,选择单因素方差分析ANOVA比较多组间差别,小显著差异法LSD(least significant difference)-t检验比较两组间差别.所有实验在本院动物实验室、病理实验室、生化实验室及辽宁中医药科大学电镜室进行.结果 1.5,3,6,24 h LPS组可见绒毛水肿,固有层血管充血,间质淋巴管扩张,肠腔炎性渗出;拮抗剂组可见绒毛水肿.电镜下对照组肠微绒毛及细胞间紧密连接未见异常.实验组上皮细胞连接增宽,微绒毛变细、稀疏,部分断裂、脱落;细胞器受损.拮抗剂组改变较实验组减轻.LPS组回肠DAO水平明显低于对照组,6 h从对照组(0.172±0.004)15/mg降至(0.096±0.010)U/mg(F=13.372,P＜0.01);LPS组血浆DAO水平明显高于对照组.预防组及治疗组变化趋势同LPS组.结论 PAF在内毒素血症肠道屏障功能损伤中可能起一定作用,预防和治疗性应用PAF受体拮抗剂Ginkgolide B可减轻肠损伤.血浆和小肠组织中DAO活性同步变化,故测定血浆DAO活性可早期、敏感地反映小肠黏膜功能的破坏.
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银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠血浆细胞因子的影响
目的:观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血浆中TNF-α,血小板活化因子(PAF),IL-10,IL-12,sTNFR的水平变化及其银杏苦内酯B(BN52021)的影响.方法:实验选用Wistar♂大鼠45只,随机分成SAP模型组(SAP,n=15),BN52021治疗组(BN,n=15)和阴性对照组(NC,n=15).前两组以50 g/L牛磺胆酸钠逆行注入主胰管制成SAP模型,NC组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次关腹.制模15 min后,SAP组经股静脉以5 mL/mg注射生理盐水;BN组以BN52021(5 mg/kg)代替生理盐水静注.制模后分别于1,6,12 h采血,应用ELISA技术测定血浆TNF-α,PAF,IL-10,IL-12和sTNFR水平.结果:SAP组,NC组和BN组大鼠血浆TNF-α和PAF水平相比,具有显著性差异,sAP组(746.2±374.1,82.5±35.4 ng/L)显著高于NC组(385.1±86.3,1.1±1.9 ng/L),BN组(503.7±177.9,39.9±29.9 ng/L)显著低于SAP组(P＜0.05).血浆sTNFR水平三组相比存在明显差异,SAP组(488.7±363.8 ng/L)显著高于NC组(50.0±21.0 ng/L),BN组(883.4±552.5 ng/L)显著高于SAP组(488.7±363.8 ng/L)(P＜0.05).血浆IL-12三组相比存在明显差异,SAP组(97.1±55.9 ng/L)显著高于NC组(20.4±19.4ng/L),BN组在1 h时相点(133.5±33.4 ng/L)显著高于SAP组(55.9±14.7 ng/L)(P＜0.05).血浆IL-10三组相比不存在明显差异(P＞0.05).结论:SAP大鼠促炎细胞因子和抗炎细胞因子均显著升高.BN52021能降低血浆促炎因子含量,提高IL-12和细胞因子拮抗剂sTNFR含量.
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关键词：
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银杏苦内酯B对缺血豚鼠心室肌动作电位、L-型钙电流和延迟整流钾电流的作用
目的:研究银杏苦内酯B对正常和缺血心室肌细胞动作电位(action potential,AP),L-型钙电流(L-type calcium current,ICa-L)、延迟整流钾电流(Delayed Rectifier Currennt,IK)的影响.方法:用常规细胞内微电极方法记录豚鼠心室肌细胞动作电位,用全细胞膜片钳技术记录游离心室肌细胞离子流.结果:①在生理条件下,银杏苦内酯B可缩短心室肌细胞动作电位时程 (action potential duration,APD),但对AP其他参数无影响,银杏苦内酯B可增大IK,呈浓度依赖性,但对ICa-L无显著作用;②在缺血条件下,APD50、APD90明显缩短,RP、APA减小,Vmax减慢,而银杏苦内酯B则可延缓和减轻缺血所引起上述参数的变化;3.在缺血条件下,IK和ICa-L均受到抑制,但加入银杏苦内酯B后可逆转缺血所造成这两种离子流的减小.结论:银杏苦内酯B可对抗心肌缺血所引起的心肌电生理的变化,提示银杏苦内酯B可预防心律失常的发生.
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重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织腺苷酸环化酶活性的变化及银杏苦内酯B的影响
[目的]观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织腺苷酸环化酶(AC)活性的变化及银杏苦内酯B(BN52021)的影响.[方法]Wistar雄性大鼠随机分为阴性对照组(NC组)、SAP模型组(SAP)和BN52021治疗组(BN组),每组按术后不同时相点(1、2、3、6、12、24 h)分为6小组,用放射免疫的方法检测胰腺组织中AC活性的变化,同时对胰腺组织进行病理学观察和测定血清淀粉酶的变化.[结果]血清淀粉酶和病理学结果显示SAP大鼠制模成功,BN52021能降低SAP的血清淀粉酶和改善病理学变化;SAP组AC活性在2 h,3 h较NC组显著升高(P<0.05);BN组AC活性在2、3、12 h较NC组显著升高(P<0.05);在2 h、3 h较SAP组显著降低(P
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银杏苦内酯B对脂多糖致MS1细胞炎症反应中P38丝裂原活化蛋白激酶的活化作用
[目的]探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的胰腺微血管内皮细胞(MS1细胞)中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen activated protein kinase,P38 MAPK)基因表达量变化和蛋白的磷酸化激活及BN52021对其的干预,阐明BN52021的作用机制.[方法]MTT法探索LPS导致MS1细胞炎症反应的佳浓度和作用时间点,以该浓度时间点为前提,确定BN52021对MS1细胞炎症反应的佳抑制浓度.通过Real-time PCR、Western blotting技术检测P38 MAPK基因在不同组之间表达量的变化及蛋白磷酸化激活情况.[结果]MTT法显示当LPS浓度达到10 μg/ml,作用时间点为24 h时,MS1细胞株活性(OD490:0.25±0.01)与未作处理对照组细胞活性(OD490:0.63±0.01)相比,前者对细胞产生明显损伤(P＜0.05);BN52021在浓度达到50 mmol/L时细胞活性(OD490:0.20±0.03)与LPS阳性对照组细胞活性(OD490:0.14±0.02)相比,前者的细胞活性明显提高(P＜0.05).Realtime PCR结果显示LPS诱导的MS1细胞株炎症状态下P38 MAPK(F=3.87±0.07)基因表达明显上调(P＜0.05),在BN52021干预下上调的P38 MAPK基因表达量相比LPS诱导组明显下调(F=1.49±0.18)(P＜0.05).Western blotting蛋白磷酸化激活符合基因表达情况.[结论]BN52021能通过下调P38 MAPK的基因表达和蛋白磷酸化激活有效地抑制LPS所诱导的MS1细胞株的炎症.
关键词： 银杏苦内酯B 重症急性胰腺炎 p38丝裂原活化蛋白激酶 炎症 -
银杏苦内酯B对内毒素血症幼年大鼠肠氧化损伤的保护作用
目的 氧化应激与炎性反应引起的肠组织损伤密切相关.应用血小板活性因子(PAF)受体拮抗剂银杏苦内酯B对幼年大鼠内毒素血症模型中肠黏膜氧化损伤的保护作用作初步研究.方法 18日龄Wistar大鼠,随机分为内毒素脂多糖(LPS)组和PAF受体拮抗剂组(预防组和治疗组)及对照组,注射LPS后1.5,3,6,24,48,72 h取回肠.LPS组和对照组分别腹腔注射内毒素5 mg/kg及生理盐水1 mL/kg;预防组和治疗组分别于每一时相点注射LPS前、后30 min腹腔注射PAF受体拮抗剂(银杏苦内酯B)BN52021 5 mg/kg.苏木精-伊红染色及透射电镜作形态学检查,剩余部分回肠于-80℃深低温冰箱中保存,检测黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD).结果 LPS组1.5,3,6,24 h可见绒毛水肿,固有层血管充血,间质淋巴管扩张,肠腔炎性渗出,拮抗剂组可见绒毛水肿.电镜下对照组肠微绒毛及细胞间紧密连接未见异常.实验组上皮细胞连接增宽；微绒毛变细、稀疏,部分断裂、脱落；细胞器受损.拮抗剂组改变较实验组减轻.LPS组1.5,3,6,24 h XOD明显高于对照组,6h从(239.85±17.64)U/g升至(330.99±61.73)U/g(P＜0.01),预防组及治疗组XOD变化趋势同LPS组,但各时相点XOD较LPS组略低.LPS组1.5,3,6,24,48 h SOD较对照组明显降低,6h从(141.55±28.12)U/mg降至(86.89±9.99)U/mg(P＜0.01),预防组及治疗组SOD变化趋势同LPS组,但各时相点SOD较LPS组高.结论 氧化损伤在内毒素血症肠损伤中发挥一定作用,预防和治疗性应用银杏苦内酯B BN52021可减轻肠道的炎性反应,对肠黏膜损伤具有一定的保护作用.
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银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织G蛋白αi2亚单位mRNA表达的影响
目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)时G蛋白αi2亚单位Gαi2 mRNA在大鼠胰腺组织的表达变化及血小板活化因子(PAF)拮抗剂银杏苦内酯B(BN52021)的影响,从而探讨SAP发病过程中Gαi2与PAF信号转导途径及BN52021治疗机制的关系.方法 雄性Wistar大鼠180只,随机分为阴性对照组(NC组),SAP模型组(SAP组)及BN52021治疗组(BN组),每组再分为6个时相点(1、2、3、6、12、24 h),每个时相点10只.观察各组大鼠胰腺组织病理学变化,采用全自动生化分析仪检测血浆淀粉酶,并以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测Gαi2 mRNA在各组大鼠胰腺组织的表达水平.结果 各组大鼠胰腺组织均检测到了Gαi2 mRNA的表达信号.制模后12 h Gαi2 mRNA表达显著上调(t=-7.213,P=0.000),该上调持续到24 h以后(t=-8.597,P=0.000),BN52021治疗未改变这种上调趋势.结论 Gαi2 mRNA在正常大鼠胰腺组织有稳定表达,Gαi2有可能参与了SAP的发病过程,但其与SAP时PAF信号转导通路及BN52021治疗SAP信号转导机制的关系尚不十分明确.
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银杏苦内酯B对创伤性脑损伤大鼠脑组织病理形态学的影响
目的 探讨银杏苦内酯B(BN52021)对创伤性脑损伤大鼠脑组织病理形态学的影响.方法 48只SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、低剂量BN52021组和高剂量BN52021组,每组12只.后3组制作液压打击脑损伤模型.低剂量BN52021组和高剂量BN52021组于模型制作当天开始分别腹腔注射1 mg/kg和5mg/kg BN52021,每大1次,连续7d.第7天治疗后取脑组织进行形态学及免疫组织化学检测和超微结构观察.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脑组织神经元相对数量减少(P＜0.05),OX-42阳性小胶质细胞和星形胶质细胞数量增加(P＜0.05),caspase-3阳性细胞数增多(P＜0.05);电镜下可见神经元染色质边集,部分出现核碎裂、核溶解,线粒体变圆变大,空泡形成,嵴消失,内质网增宽,溶酶体增多,核膜皱褶.低剂量和高剂量BN52021组与模型组比较,小胶质细胞和星形胶质细胞比例减少(P＜0.05),caspase-3阳性细胞数减少(P＜0.05),超微结构明显改善;高剂量组较低剂量组改善更加明显.结论 BN5202对创伤性脑损伤大鼠脑组织具有保护作用.
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银杏苦内酯B抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受性反射
本研究在30只麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠隔离灌流颈动脉窦区观察了银杏苦内酯B(ginkgolide B)对颈动脉窦压力感受性反射的影响.结果显示:(1)银杏苦内酯B(0.1,1,10 pmol/L)隔离灌流序侧颈动脉窦区,使压力感受性机能曲线向右上方移位,曲线大斜率(peak slop,PS)减小,血压反射性下降(reflex decrease,RD)幅度减小(P<0.01),阂压(threshold pressure,TP)、平衡压(equilibrium pressure,EP)和饱和压(saturation pressure,SP)均升高(P<0.05,P<0.01).其中PS、RD、TP、EP和sP呈明显的剂量依赖性;(2)预先应用钙通道开放剂Bay K8644(500 nmol/L),可以完伞取消银杏苦内酯B的抑制作用.(3)预先应用钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA,1 mmol/L),银杏苦内酯B的上述作用也被完全取消.结果表明,银杏苦内酯B对大鼠颈动脉实压力感受性反射有抑制作用,此作用与银杏苦内酯B减少颈动脉窦压力感受器神经末梢钙离子内流和增加钾离子外流有关.
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银杏苦内酯B对豚鼠模拟缺血心室肌细胞L-型钙电流及胞内游离钙的影响
应用全细胞膜片钳及激光共聚焦技术, 研究银杏苦内酯B(ginkgolide B,GB)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流及胞内游离钙的作用, 并探讨GB心肌保护作用的机制.实验结果显示, 在指令电压为0 mV时, GB对生理状态下豚鼠心室肌细胞L-型钙电流无明显作用.在模拟缺血状态下, L-型钙峰值电流减小37.71%, 但加入1 μmol/L GB后, 可逆转缺血引起的L-型钙电流的降低, 与缺血对照组比较, 有显著性差异(P<0.05).1 μmol/L GB能使由于模拟缺血而上移的L-型钙电流-电压曲线回复正常.在生理状态下, 0.1、 1、 10 mol/L GB 分别使心肌细胞内游离钙降低10.58% (n=12)、 17.27%(n=12)、 16.35% (n=10), 与对照组相比有非常显著性差异.模拟缺血液灌流12 min时, 细胞内游离钙浓度增加20.15%, 在模拟缺血液中分别加入1 μmol/L nifedipine或5 mmol/L NiCl2, 结果显示: 模拟缺血液灌流12 min, 与正常对照组相比细胞内钙分别增加18.18% (P>0.05)与11%(P<0.05).在模拟缺血液中加入1 mol/L GB灌流12 min时细胞内钙仅增加9.60% (n=12,P<0.001), 与缺血对照组相比有显著性差异(P<0.05). 结果表明, GB可逆转模拟缺血造成L-型钙电流的降低, 同时可部分减轻由于缺血所造成的细胞内钙的超载.
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银杏苦内酯B的药理学研究概述
银杏苦内酯为"国宝"银杏叶提取物中的萜类化合物,分为银杏苦内酯A、B、C、M、J和白果内酯,编号分别为BN52020、BN52021、BN52022、BN52023、BN52024,共约占银杏提取物的6%.银杏提取物中仅含有微量银杏苦内酯B(BN52021),但近年来国内外的研究显示该化合物具有抗炎、抗休克、保护心脑血管、治疗急性胰腺炎等作用.本文对银杏苦内酯B的药理作用进行了概述,为临床应用提供参考.
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银杏苦内酯B对急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB表达的影响
目的 研究银杏苦内酯B(BN52021)对脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠肺组织中核转录因子κB(NF-κB)蛋白质表达的影响.方法 健康昆明小鼠50只,随机分为2组:LPS组和BN52021预处理组.每组又根据不同的观察时间点(0、1、3、9 h和12 h)随机分为5个业组,每组5只小鼠.通过检测肺湿质量/干质量值(W/D)初步判断肺功能,普通光镜观察HE染色肺组织的病理变化,Western blot检测NF-κB p65在蛋白水平上的表达差异,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)浓度.结果 LPS注射后,LPS组W/D显著升高,提示存在肺水肿;BN52021预处理组在不同时间点的W/D均低于LPS组(P<0.05,P<0.01).LPS注射后1 h即有明显炎症反应的病理变化:两组光镜下均显示肺泡出血及中性粒细胞浸润,但BN52021预处理组明显轻于LPS组.LPS组NF-κB p65呈双峰表达,峰值分别为LPS注射后1 h和9 h;BN52021预处理组NF-κB p65呈单峰表达,峰值出现于9 h,除9 h外,各时间点BN52021预处理组NF-κB 065的表达均低于LPS组(P<0.05).与LPS组相比,BN52021预处理组可以明显降低TNF-α的表达(P<0.05),但2组IL-10峰值无统计学意义.结论 BN52021通过抑制NF-κB的早期活化抑制炎症反应,减轻肺组织损伤.
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血小板激活因子对大鼠任意皮瓣成活力的影响
目的检测随意皮瓣移植时,皮瓣局部组织中的血小板激活因子(PAF )水平,探讨其在皮瓣移植过程中的作用机制.方法皮瓣移植术后0,2 ,4,6和8 h将皮瓣取下,分蒂段、中段、末段匀浆提取组织液,检测血小板激活因子前体(lyso-PAF)的水平变化;皮瓣移植术前0.5 h皮瓣局部sc银杏苦内酯B(BN52021),分别于术后3,6和9 h采用99 Tcm 体内标记红细胞的方法进行ECT检测和免疫组织化学检查;采用上述方式给予单一剂量的BN52021, 术后7 d观察皮瓣成活情况.结果皮瓣组织lyso-PAF含量明显增高,尤以皮瓣中段为明显;BN52021处理之皮瓣中,末段的放射性记数明显升高;BN52021处理之皮瓣的血管内皮细胞表面的粘附分子-1表达明显减少;BN52021明显提高皮瓣的成活面积(60% vs 32%, P<0.01).结论鼠任意皮瓣移植时,皮瓣组织中的PAF含量明显增高 ;BN52021可改善皮瓣局部的血供,有利于皮瓣整体的血流动力学平衡,减轻皮瓣局部的炎症反应,明显地增强随意皮瓣的成活能力;任意皮瓣局部的PAF水平增高将严重影响皮瓣的成活能力.
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银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎胰腺组织病理变化的影响
目的 通过银杏苦内酯B(BN52021)对血小板活化因子(PAF)的拮抗作用,探讨BN52021治疗重症急性胰腺炎(SAP)的疗效.方法 Wistar大鼠180只按随机数字表法分为对照组(60只)、SAP组(60只)、BN52021组(60只),每组按不同时相点(1、2、3、6、12、24 h)分为6小组,分别监测血清淀粉酶的变化,用RT-PCR和Western blot法分别监测胰腺组织PAF受体mRNA和蛋白表达的变化,同时对胰腺组织进行病理学观察.多组比较采用单因素方差分析.结果 血清淀粉酶和病理学结果显示SAP制模成功,BN52021组血清淀粉酶在3、6、24 h[(4185 ±148)U/L,(3785 ±124)U/L,(1360 ±161)U/L]较SAP组[(4799 ±107)U/L,(4920±140)U/L,(2283±127)U/L]显著降低,病理学评分在3、6、12 h(5.95 ±0.19,5.55 ±0.36,6.72 ±0.30)较SAP组(8.85±0.39,9.15±0.55,10.10±0.65)显著降低;PAF受体mRNA及蛋白检测结果显示,SAP组和BN52021组早期逐渐上升(0.49±0.09～0.71±0.14,0.43±0.06～1.69±0.06),在3 h达到高峰,3组比较差异有统计学意义(F=4.58.6.24,P<0.05).结论 PAF受体在SAP大鼠胰腺组织中表达是动态变化的,PAF受体参与了SAP病情的发生、发展;BN52021可降低SAP血清淀粉酶和改善胰腺组织病理变化,发挥了一定的治疗作用,但对胰腺组织PAF受体的表达无显著影响.
