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沉默信息调节因子1在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1线粒体损伤中的作用
目的 探讨沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog1,SIRT1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰岛素瘤细胞-1(insulinoma cell lines-1,INS-1)细胞线粒体损伤中的作用.方法 将对数生长期的INS-1细胞分为5组:正常对照组、1 mg/L LPS组(LPS干预细胞24 h)、白藜芦醇(resveratrol,RSV)+LPS组(10μmol/L RSV预处理1 h后,加入1 mg/L LPS干预24 h)、EX527+LPS组(20μmol/L EX527预处理1 h后,加入1 mg/L LPS干预24 h)、EX527+RSV+LPS组(20μmol/L EX527预处理1 h后,加入10μmol/L的RSV和1 mg/L LPS干预24 h).检测细胞活力和ATP生成;提取INS-1细胞总蛋白、胞质蛋白和线粒体蛋白,Western-blot法检测SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1、细胞色素C(cytochrome C,CytC)、线粒体融合蛋白1(mitofusion1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusion2,Mfn2)、线粒体分离蛋白1(fission1,Fis1)蛋白的表达;Real-time PCR方法检测SIRT1、FoxO1、Mfn1、Mfn2、Fis1基因水平的变化.多组间比较采用单因素方差分析,用LSD-t法进行组间两两比较.结果 1 mg/L LPS作用于INS-1细胞24 h后,细胞活力降低(n=4,F=13.98,P<0.01),ATP生成减少(n=4,F=27.92,P<0.05),RSV预处理后促进ATP生成(P<0.01),但不能逆转EX527预处理后ATP生成的降低(P>0.05).RSV可以促进SIRT1、Mfn1、Mfn2蛋白表达和基因上调,降低TLR4和Fis1蛋白表达,下调其基因水平,减少CytC在细胞质中的释放(P<0.01),而各组间FoxO1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 白藜芦醇可能通过改变SIRT1的活性,调控FoxO1的乙酰化,部分参与调节LPS诱导的INS-1细胞线粒体的损伤.
