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miR-155抑制剂对内毒素血症小鼠肺组织JAK/STAT1信号通路的影响
目的 探讨microRNA-155 (miR-155)抑制剂对内毒素血症小鼠肺脏JAK/STAT1信号通路的影响,以及miR-155在内毒素血症诱导肺损伤中的作用.方法 120只BALB/c小鼠按随机数字表法分为内毒素血症组(LPS组)、miR-155抑制组(inhibitor+LPS组)和对照组,每组40只.内毒素血症组腹腔注射LPS 20 mg/kg;miR-155抑制组尾静脉注射miR-155抑制物80 mg/kg 24h后,腹腔注射LPS 20 mg/kg;对照组注射等容量生理盐水.注射LPS6、12、24、48 h后,每组各处死10只小鼠,留取肺脏标本.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-155、SOCSI mRNA、STAT1 mRNA表达;酶联免疫吸附试验(EHSA)检测白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变.结果 小鼠腹腔注射LPS后,肺组织miR-155表达在24 h内呈升高趋势,48 h时已下降.LPS组各时间点miR-155表达分别为6h (8.52±1.12)、12 h(11.04±0.99)、24h (15.84±0.80)、48 h(4.03 ±2.55).inhibitor+ LPS组miR-155表达量较LPS组低,12 h(t=6.08,P＜0.01)、24h (t=23.64,P＜0.01)差异具有统计学意义.STAT1 mRNA和SOCS1 mRNA表达均在6h高,后逐渐下降.LPS组STAT1 mRNA高于inhibitor+ LPS组,6h(t=4.41,P＜0.01)、12h(t=2.69,P＜0.05)、24h(=3.62,P＜0.01)差异具有统计学意义.inhibitor+ LPS组SOCS1 mRNA表达高于LPS组,6h(t=4.55,P＜0.01)、12 h(t=4.12,P＜0.01)、24h(t=2.38,P＜0.05)差异具有统计学意义.TNF-α含量于6h高,IL-10含量于48 h高.LPS组含量高于对照组和inhibitor+LPS组,6、12、24、48 h差异均有统计学意义(P＜0.01).光镜下观察到inhibitor+ LPS组肺组织病变轻于LPS组.结论 miR-155在内毒素血症小鼠肺组织中表达升高,抑制miR-155能下调JAK/STAT1信号通路,减轻内毒素血症小鼠肺损伤.
关键词： miR-155抑制剂 内毒素血症 肺损伤 JAK/STAT1信号通路 小鼠 -
雷公藤内酯醇抑制小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究
目的 探讨雷公藤内酯醇(TPL)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的影响及其调控机制,为TPL应用于狼疮肾炎的治疗奠定理论基础、提供实验数据.方法 将MMC随机分为空白组、IFN-γ激组、TPL干预组,用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测各组中IP-10 mRNA相对表达量;用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞培养上清液中IP-10分泌量;用蛋白印迹法(Western blot)检测各组中JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1,以及IFN-γ受体(IFN-γRβ)和JAK/STAT1信号通路负反馈调节蛋白SOCS1的表达情况.结果1)MMC经不同质量浓度(2、4、8、10 ng/ml)TPL预处理2h后再加入IFN-γ同作用24h,IP-10 mRNA相对表达量与刺激组相比分别下降45.35％、65.40％、89.76％和94.72％(P均＜0.01);IP-10蛋白分泌量分别下降了5.21％ (P=0.531)、54.70％(P＜0.01)、87.17％(P＜0.01)和92.45％(P＜0.01).2)MMC经TPL预处理40min后再加入IFN-γ同作用20 min,JAK1、JAK2、STAT1蛋白磷酸化水平与刺激组相比明显降低(PJAK1＜0.01、PJAK2＜0.01和PSTAT1＜0.05).3)MMC经IFN-γ刺激后,IFN-γRβ蛋白表达水平与空白组相比明显增加(P＜0.01);经TPL干预后,IFN-γRβ蛋白表达水平与刺激组相比明显减少(P＜0.01).4)IFN-γ刺激MMC后,SOCS1蛋白表达水平与空白组相比小幅升高(P＜0.05);而经TPL刺激后,SOCS1蛋白表达与刺激组相比明显增加(P＜0.01).结论 TPL可能通过抑制JAK/STAT1信号通路,从而下调IFN-γ导的MMC表达IP-10;抑制IP-10表达,减轻或阻止炎症反应,有望成为TPL治疗狼疮肾炎的新靶点.
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γ干扰素诱导小鼠肾小球系膜细胞表达IP-10及其机制研究
目的 探讨γ干扰素对小鼠肾小球系膜细胞(MMC)表达γ干扰素诱导蛋白10 (IP-10)的影响及其机制.方法 将MMC随机分为空白组、γ干扰素刺激组、α-氰基-(3,4-羟基)-N-苄苯乙烯胺(AG490)干预组,运用实时荧光定量PCR检测IP-10 mRNA相对表达量;酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中IP-10蛋白分泌量;蛋白质印迹法检测JAK/STAT1信号通路相关蛋白JAK1、JAK2、STAT1及其磷酸化蛋白p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1表达情况.结果 γ干扰素刺激MMC后IP-10 mRNA及蛋白分泌量明显增多(P＜ 0.01),并呈浓度、时间依赖性;AG490干预后,与刺激组相比,IP-10 mRNA相对表达量下降了81.16％ (P＜ 0.01),IP-10蛋白分泌量下降了91.81％ (P＜ 0.01);γ干扰素刺激后p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达明显增加(P＜0.01),经AG490干预后p-JAK1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表达减少(P＜0.01).结论 γ干扰素通过激活JAK/STAT1信号通路诱导MMC表达IP-10;抑制JAK/STAT1信号通路对减少MMC表达IP-10具有重要意义.
