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TAK-242调控TLR4/NF-κB对大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨TAK-242调控TLR4/NF-κB信号通路对大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后心肌细胞凋亡的影响及意义.方法 45只SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、CME组和CME+ TAK-242组(n=15);经左心室注入微栓塞球构建CME模型;假手术组注射等量生理盐水;CME+ TAK-242组构建CME模型前30 min经尾静脉注射TAK-242 (2 mg/kg).各组术后6h行心脏超声检测心功能;组织切片HBFP染色测定微梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测TLR4mRNA表达;Western blot检测TLR4、NF-κB p65及活化Caspase-3蛋白表达.采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,组间比较采用单因素方差分析.结果 与假手术组比较,CME组左室射血分数(LVEF)显著降低[(68.91±4.12)％和(84.80±2.51)％,P＜0.05],心肌微梗死面积(P＜0.05)及心肌细胞凋亡指数明显增加[(3.36±0.63)％和(0.19±0.08)％,P＜0.05],TLR4、NF-κB p65及活化Caspase-3表达水平显著增加(均P ＜0.05);与CME组比较,CME+ TAK-242组LVEF明显改善[(75.58±5.01)％和(68.91±4.12)％,P ＜0.05],心肌微梗死面积比[(8.58±2.12)％和(14.65±4.23)％,P＜0.05]及心肌细胞凋亡指数[(1.43±0.51)％和(3.36±0.63)％,P＜0.05]明显减少,TLR4、NF-κB p65及活化Caspase-3表达水平显著降低(均P＜0.05).结论 TAK-242可改善大鼠CME后心功能,其机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路进而减少心肌细胞凋亡有关.
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Toll样受体-4抑制剂TAK-242对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的研究
目的：探讨Toll样受体-4（TLR-4）的选择性抑制剂 TAK-242对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及可能机制。方法健康雄性SD大鼠60只，随机分为正常对照（NC ）组、DN模型（M ）组及 T AK-242治疗（TAK-242）组。腹腔一次性注射STZ（60 mg／kg）建立DN大鼠模型。造模成功后4和8周测定体重、血糖、24 h尿蛋白、血肌酐（Scr ）、血浆白蛋白水平，8周末取新鲜肾组织检测人核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、核转因子p65（NF-KBP65）、TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达量。结果与NC组相比，M组和TAK-242组血糖、Scr、尿蛋白水平均升高（P＜0.05），体重、血浆白蛋白水平降低（P＜0.05）；与M组相比，TAK-242可减少Scr[（69.8±7.96）μmol／L]、尿蛋白[（35.21±8.06） mg／d]含量（P＜0.05），增加血浆白蛋白[（28.1±6.9） g／L]含量（P＜0.05）；与M组相比，TAK-242可减轻DN大鼠肾脏组织中核内NF-KBP65含量，以及 TNF-α和MCP-1的表达，抑制IκBα的降解（P＜0.05）。结论TAK-242对DN大鼠有保护作用，其机制可能与抑制NF-κB信号通路相关。
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Toll样受体4拮抗剂TAK-242对C57BL/6小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的：探讨TAK-242治疗对心肌缺血再灌注损伤（I/R）小鼠的保护作用及可能机制。方法将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：假手术组（sham组）、模型组（缺血30 min/再灌注24 h，I/R组）和治疗组〔I/R+TAK-242（3 mg/kg）〕。再灌注24 h后应用心脏超声检测小鼠心功能、TTC染色法测定心肌梗死面积、HE染色观察心肌病理改变、实时荧光定量PCR和Western印迹法检测心肌组织TLR4 mRNA和蛋白表达、ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）浓度。结果与sham组比较，I/R组小鼠左心室收缩期直径（LVIDs）缩短（P＜0.01），左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短分数（LVFS）均有显著性降低（P＜0.01），出现大面积心肌梗死以及严重心肌炎症病理改变，心肌TLR4表达上调（P＜0.01），血清IL-6、TNF-α、IL-10和HMGB1浓度升高（P＜0.01）。与I/R组比较，TAK-242治疗组小鼠LVIDs有所延长（P＜0.05），LVEF和LVFS显著提高（P＜0.01或P＜0.05），心梗面积显著缩小（P＜0.01），心肌炎症浸润减轻，心肌TLR4表达降低（P＜0.05），血清促炎因子IL-6和TNF-α水平明显下降（P＜0.01），而抗炎因子IL-10和HMGB1浓度进一步升高（P＜0.01）。结论 TAK-242治疗对I/R小鼠心肌具有保护作用，其作用机制可能与抑制炎症反应有关。
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TLR4抑制剂对糖尿病周围神经痛模型大鼠的治疗作用
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对糖尿病周围神经痛(DPN)模型大鼠的治疗效果及其可能的作用机制. 方法 SPF级雄性SD大鼠60只, 随机均分为3组, 分别为正常对照组 (NC组)﹑DPN模型组(DPN组)﹑TAK-242治疗组(TAK组). 采用链脲佐菌素(STZ)方法建立DPN大鼠模型,采用ELISA及RT-PCR方法检测DPN模型大鼠腰膨大脊髓组织的高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)-TLR4轴上下游基因(HMGB1﹑TLR4﹑MAPK﹑NF-κB﹑IL-6)的变化,分析上述细胞因子表达水平与大鼠疼痛行为的相关性.使用TLR4抑制剂TAK-242对DPN模型大鼠进行药物干预, 观察其治疗效果及对HMGB1-TLR4轴基因表达的影响. 结果 ELISA检测显示,DPN组大鼠的血清HMGB1﹑TLR4﹑IL-6表达水平均较NC组升高(P<0.05);TAK组大鼠的TLR4及IL-6表达水平较DPN组下降(P<0.05). RT-PCR检测显示,DPN组大鼠的HMGB1﹑TLR4﹑NF-κB﹑IL-6 mRNA表达水平较NC组升高(P<0.05);TAK组大鼠的TLR4﹑NF-κB﹑IL-6 mRNA表达水平较DPN组下降(P<0.05). 结论 TLR4抑制剂TAK-242通过阻断HMGB1-TLR4轴对DPN模型动物起治疗作用.
关键词： TLR4 TAK-242 HMGB1-TLR4 糖尿病周围神经痛 -
TOLL样受体4拮抗剂干预周围神经损伤后的瓦勒变性
背景：外周神经损伤后发生瓦勒变性，其机制复杂，从免疫学角度对其进行调控可以影响神经早期修复效果。
目的：分析特异性拮抗Toll样受体4(TLR4)对于大鼠坐骨神经损伤早期瓦勒变性及轴突再生的影响。
方法：将50只Wistar大鼠随机分成3组：处理组及模型组横断大鼠右侧坐骨神经后，行神经外膜端端吻合；假手术组仅游离出坐骨神经，然后关闭切口。术前1h及术后7d处理组大鼠每天尾静脉注射0.15 mg/kg Toll样受体4拮抗剂TAK-242，模型组及假手术组大鼠尾静脉注射同等体积生理盐水。于术后24 h、3 d、4 d和7d取术侧坐骨神经。
结果与结论：①实时定量PCR显示，与假手术组相比，术后24 h模型组白细胞介素1βmRNA和单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达均明显升高(P<0.001，P<0.001)，与模型组相比，术后24 h处理组白细胞介素1βmRNA和单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达明显降低(P<0.001，P<0.001)；②免疫荧光可见，与模型组相比，术后3 d处理组中CD68+细胞和iba1+细胞表达均显著下调(P<0.01，P<0.05)；③固兰染色可见，在术后7 d，模型组和处理组坐骨神经断端均出现脱髓鞘反应，但与模型组相比，处理组神经断端髓鞘碎片清除率明显降低(P<0.05)；④苏木精-伊红染色可见，在术后7 d，模型组坐骨神经断端较多炎性细胞浸润，许旺细胞增殖活跃，神经纤维大量再生通过吻合口，断端修复正常，处理组神经断端炎性细胞较少，纤维组织增生较少，吻合口有缝隙，断端修复能力减弱；⑤免疫组织化学可见，与模型组相比，术后4 d处理组中生长相关蛋白43蛋白表达均显著下调(P<0.05)；⑥坐骨神经功能指数显示，与模型组相比，处理组大鼠在术后20，30和40 d同期比较明显降低，差异有显著性意义(P<0.05)。⑦结果证实，Toll样受体4拮抗剂导致大鼠坐骨周围神经损伤早期再生延迟，其机制可能是抑制了瓦勒变性过程中的的Toll样受体4信号通路。 -
TLR4抑制剂Tak-242对慢性盆腔炎大鼠炎症指标及病理形态学改变的影响
目的 探讨Toll样受体(TLR)4抑制剂Tak-242对慢性盆腔炎大鼠炎症指标及病理形态学改变的影响.方法 采用向60只SD大鼠子宫注射苯酚胶浆的方法制备慢性盆腔炎模型,随机分为4组(每组15只):模型组、Tak-242低剂量组、Tak-242中剂量组和Tak-242高剂量组;Tak-242低、中、高剂量组则在造模后第8天开始腹腔注射0.1、0.3和1 mg/kg Tak-242,隔日1次,连续4w;模型组则注射等体积生理盐水.另选取15只同周龄SD大鼠作正常对照(对照组).待治疗结束后检测各组大鼠血清炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-6、IL-1β和高敏c-反应蛋白(hs-CRP)]、免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)水平和免疫细胞功能(T细胞百分率、淋转率和脾细胞NK活性),取出子宫后进行病理形态学观察.结果 与对照组相比,模型组的TNF-α、IL-6、IL-1β、hs-CRP及子宫病理评分均升高,IgG、IgA、T细胞百分率、淋转率及NK细胞活性均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);Tak-242腹腔注射治疗后可改善上述指标,Tak-242中、高剂量组的上述指标均优于模型组(P＜0.05),且高剂量组的上述指标水平均优于低、中剂量组(P＜0.05).结论 Tak-242可抑制慢性盆腔炎大鼠的炎症反应,改善免疫功能及子宫病理改变,抑制TLR4通路可能成为慢性盆腔炎治疗的新策略.
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TAK-242对心肺复苏后大鼠脑损伤的神经保护作用
目的 探讨TLR4抑制剂TAK-242对心肺复苏后大鼠脑组织的神经保护作用、可能机制及其临床应用的可能性.方法 成年雄性SD大鼠173只,随机分为假手术组(n=20)、复苏组(n=56)、TAK-242低剂量治疗组(n=50)、TAK-242高剂量治疗组(n=47),复苏组和药物治疗组采用窒息方法制作大鼠呼吸心脏骤停模型,模型建立后立即行心肺复苏治疗,药物组心肺复苏治疗的同时通过腹腔注射给予TAK-242治疗.复苏后24 h取脑组织标本,免疫印迹法检测NF-κB p65和cleaved caspase-3的表达,以ELISA法检测大鼠脑组织中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的变化,TUNEL法检测神经元的凋亡.结果 与假手术组比较,模型组中cleaved caspase-3、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平显著增加;TAK-242显著降低cleaved caspase-3、NF-κB p65、IL-6、TNF-α和IL-1β的表达水平,增加NF-κB p65的表达,同时显著降低神经元的凋亡数量,且呈剂量依赖性.结论 TAK-242抑制炎性因子的产生对心肺复苏后脑损伤具有一定的保护作用.
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TAK-242通过调控JAK2/STAT3通路抑制小鼠心肌缺血再灌注损伤炎症反应
目的:探讨Toll样受体4拮抗剂TAK-242抑制小鼠心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)炎症反应的分子机制.方法:选用48只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(sham)、模型组(I30min/R24h)、给药组[I/R+ TAK-242(3 mg·kg-1)]、干预组[I/R+ TAK-242+ AG490(15 mg·kg-1)].再灌注24 h后心脏超声检测小鼠心功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理改变,WB检测心肌JAK2/STAT3磷酸化水平,ELISA检测血清IL-6、TNF-α、IL-10和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)浓度.结果:与sham组比较,I/R组小鼠左心室收缩期直径(LVIDs)延长(P＜0.01),左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短分数(LVFS)显著降低(P＜0.001或P＜0.01),心梗面积明显增加并出现心肌炎性浸润,心肌p-JAK2/p-STAT3表达明显升高(P＜0.01或P＜0.05),血清IL-6、IL-10、TNF-α和HMGB1水平显著升高(P＜0.001或P＜0.01).与I/R组比较,TAK-242给药组小鼠LVIDs缩短(P＜0.05),LVEF和LVFS显著升高(P＜0.01或P＜0.05),心梗面积缩小(P＜0.01),心肌炎症浸润减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低(P＜0.01或P＜0.05),血清IL-6和TNF-α水平明显下降(P＜0.001或P＜0.01),而IL-10和HMGB1浓度进一步升高(P＜0.01).与TAK-242给药组比较,AG490干预可显著加强TAK-242治疗作用,包括心肌收缩功能增强,心梗面积缩小及炎性浸润程度减轻,心肌p-JAK2/p-STAT3表达降低(P＜0.05),血清IL-6、TNF-α浓度下降而IL-10、HMGB1浓度升高(P＜0.01或P＜0.05).结论:Toll样受体4拮抗荆TAK-242抑制小鼠I/R炎症反应与JAK2/STAT3信号通路失活有关.
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TAK-242对Aβ25-35诱导大鼠海马神经元损伤的作用及其机制研究
目的 探讨TAK-242对 β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的大鼠海马神经元损伤的作用及其相关机制.方法 用Aβ25-35注射大鼠双侧海马复制阿尔兹海默病的动物模型,TAK-242腹腔注射进行治疗,Nissl染色观察大鼠海马CA3区神经元的形态和数量,Western blot检测大鼠海马Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)蛋白的表达,酶联免疫吸附法检测大鼠海马白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)表达水平.结果 大鼠海马注射Aβ25-35后引起大鼠海马CA3区神经元破坏和数量减少,而TAK-242可以抵抗Aβ25-35所造成的神经毒性并保护海马神经元,同时TAK-242可降低Aβ25-35所引起的海马组织内TLR4、MyD88、IL-1β 和TNF-α 表达升高.结论 TAK-242可以通过抑制TLR4/MyD88信号通路,降低炎症因子IL-1β 和TNF-α 水平,从而保护大鼠海马神经元抵抗Aβ25-35诱导的神经毒性.
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Toll样受体4抑制剂TAK-242对Aβ25-35诱导PC12细胞毒性损伤的保护作用
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242在β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导PC12细胞毒性损伤中的保护作用及机制. 方法 利用CCK-8法检测不同浓度Aβ25-35(0、10、20、30 μmol/L)作用PC12细胞24 h后的细胞存活率,以确定构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型的Aβ25-35浓度,同时进一步检测TAK-242预处理1h后该Aβ25-35浓度下的细胞存活率.将PC12细胞分为4组:正常对照组、Aβ处理组、TAK-242预处理组和TAK-242对照组.采用Hoechst33258染色检测各组细胞凋亡情况,采用酶联免疫反应吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养基上清液中白介素-lβ(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,采用Western blotting检测各组细胞TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、IκB激酶复合体(IKKα/β)和核因子-κB(NF-κB)表达水平. 结果 20 μmol/L Aβ25-35作用PC12细胞24 h后的细胞存活率约为0 mol/L Aβ25-35组的50％,因此采用此浓度Aβ25-35构建AD细胞模型;并且经TAK-242预处理后,其细胞存活率较20 μmol/L Aβ25-35组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Hoechst 33258染色显示TAK-242预处理组凋亡细胞较Aβ处理组明显减少.ELISA检测显示:与正常对照组相比,Aβ处理组IL-1β、TNF-α表达量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与Aβ处理组相比,TAK-242预处理组Ⅱ-1β、TNF-α表达量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting检测显示:与正常对照组相比,Aβ处理组TLR4、MyD88、IKKα/β和NF-κB蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与Aβ处理组相比,TAK-242预处理组TLR4、MyD88、iiKo/β和NF-κB蛋白相对表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 Aβ25-35可通过上调TLR4/MyD88信号通路蛋白表达,增加IL-1β、TNF-α释放,引起PC12细胞存活率下降,诱导细胞凋亡;TAK-242能通过负调控TLR4/MyD88信号通路,终减少炎性因子Ⅱ-1β、TNF-α分泌,抵抗Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性作用.
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TAK －242对糖尿病周围神经痛大鼠的治疗作用
目的：明确HMGB1－TLR4轴在糖尿病周围神经痛（ DPN）致病过程中的作用及机制，为新型靶向药物治疗的临床研究提供动物实验基础。方法60只SD大鼠随机分为NC组、DPN 组、TAK组。 NC组按大鼠体重腹腔注射55 mg／kg柠檬酸／柠檬酸钠缓冲液，DPN腹腔注射55 mg／kg链脲佐菌素溶液造模，TAK组腹腔注射3 mg／kg TAK－242对大鼠进行行为学分析以及刺激实验，包括热辐射刺激、冷板试验以及触觉过敏试验。采用Western blot方法检测DPN大鼠模型脊髓组织的HMGB1－TLR4轴上下游基因（ HMGB1、TLR4、MAPK、NF－κB、IL－6）的变化，分析上述细胞因子表达水平与大鼠疼痛行为的相关性。观察TAK－242对DPN大鼠模型的治疗效果。结果 DPN组大鼠热辐射、冷刺激反应以及机械性触觉异位性疼痛阈值均较NC组下降（P＜0．05）。 West－ern blot检测显示DPN组大鼠HMGB1、TLR4、NF－κB、IL－6蛋白表达量较NC组升高（ P＜0．05）；TAK组TLR4、NF－κB、IL－6表达较DPN组下降（ P＜0．05）。结论 TLR4抑制剂TAK－242通过阻断HMGB1－TLR4轴对DPN动物模型起治疗作用。
关键词： TLR4 TAK-242 HMGB1-TLR4 糖尿病周围神经痛 -
抑制Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路加重鲍曼不动杆菌感染大鼠的炎症
目的 利用Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242处理大鼠,检测鲍曼不动杆菌(A.baumannii)感染过程中TLR4的作用.方法 将健康雄性SD大鼠分为正常对照组、TAK-242处理组、A.baumannii接种组以及TAK-242和A.baumannii联合处理组.TAK-242处理组大鼠通过尾静脉注射TAK-242(1 mg/kg),感染大鼠通过气道接种方法接种A.baumanniio于接种后72 h,取肺组织匀浆后接种至LB培养基,进行肺组织细菌计数;HE染色观察肺组织炎症变化.收集支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平.分离外周血单个核细胞(PBMC),Western blot法检测PBMC中磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)的蛋白水平.结果 免疫功能正常的大鼠感染A.baumannii72 h后,肺内细菌基本被清除,而TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,肺中细菌计数显著增加;正常大鼠感染后,肺部有轻微炎症,TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后肺部炎症较为明显;TAK-242处理的大鼠接种A.baumannii后,TNF-α和IL-6增加幅度小于正常感染组大鼠;正常大鼠感染A.baumannii 72 h后,PBMC中p-NF-κBp65蛋白水平升高,而经过TAK-242处理的大鼠感染后,PBMC中p-NF-κBp65的水平升高不明显.结论 抑制TLR4/NF-κB通路引起大鼠A.baumannii感染加重.
