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亚低温对心肺复苏大鼠海马神经细胞活性氧及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和自噬相关蛋白轻链3的影响
目的：观察亚低温（MH）对心肺复苏（CPR）后海马神经细胞活性氧（ROS）产生量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3） mRNA和自噬相关蛋白轻链3（LC3）表达的影响。方法65只健康成年雄性SD大鼠随机数字法随机分为2组：空白对照组（BC，n＝5）；CPR组（n＝60）。CPR组制作窒息法心肺复苏模型，在自主循环恢复（ROSC）后再随机分为2组：常温CPR组（NT）和低温CPR组（HT）。NT组在ROSC后保持37℃恒温，HT组在ROSC后立即行低温32℃干预4 h。根据观察时点的不同，再将两组CPR组随机分2个亚组：即 ROSC后12 h和24 h组（NT-12，NT24，HT-12，HT-24）。到达观察时点先对存活大鼠进行神经功能缺损评分（NDS），然后立即取双侧海马组织，应用流式法检测大鼠海马单细胞悬液ROS水平。利用透射电镜观察海马神经细胞细胞核和线粒体的超微结构形态学变化。利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定海马神经细胞caspase-3mRNA的表达水平；蛋白免疫印迹法（WB）测定海马神经细胞LC3蛋白水平。应用SPSS 19.0软件包，计量数据以均数±标准差（x ±s）表示，两组间均数比较用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果60只大鼠中有44只（73％）成功ROSC，存活到观察时点的有33只大鼠（55％）。NT和HT组各时点的NDS明显低于BC组（F＝8.107，P＜0.05），HT-12和HT-24组的NDS与相同时点的NT组比较有显著提高（t＝9.692，P＜0.01；t＝14.374，P＜0.01）。NT和HT组各时点的ROS产生量明显高于BC组（F＝16.824，P＜0.05），而HT-12和HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的NT组大鼠（t＝9.836，P＜0.01；t＝7.499，P＜0.01）。NT和HT组各时点的caspase-3mRNA表达量明显高于BC组（F＝24.527，P＜0.05），而HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t ＝6.935，P＜0.01；t＝4.317，P＜0.01）。NT 和 HT 组各时点的 LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量明显高于 BC 组（F＝6.584，P＜0.05），而 HT-12和 HT-24组的升高程度则明显低于相同时点的 NT 组大鼠（t＝10.836，P＜0.001；t＝2.653，P＝0.02）。NT组海马神经细胞核和线粒体的形态学变化较BC组有明显改变，HT组海马神经细胞核和线粒体与相同时点NT组比较损伤有所减轻。结论 MH能减轻ROSC后大鼠脑神经细胞损伤并提高其神经功能，其机制之一是减少了CPR后大鼠神经细胞ROS的产生，并通过抑制caspase-3和LC3的表达使神经细胞凋亡和自噬减少。
