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PRMT1对哮喘小鼠的影响以及作用机制分析
目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)对哮喘的影响及作用机制.方法 构建小鼠哮喘模型,然后分别利用氨茶碱(AMI)和磷酸盐缓冲液(PBS)处理两组小鼠,收集并用ELISA试剂盒检测小鼠支气管肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.运用Bradford方法检测小鼠支气管肺泡灌洗液中蛋白含量.Western blotting检测肺脏组织中PRMT1的含量以及NF-κB信号通路下游分子P65的变化.结果 哮喘模型组IL-4,IL-1β和TNF-α的水平较对照组明显升高(25.48±4.96 pg/ml vs.4.01±0.56 pg/ml,23.48±6.11 pg/ml vs.3.77±0.27 pg/ml,29.45±6.98 pg/ml vs.5±1.84 pg/ml);经AMI处理的哮喘模型组IL-4,IL-1β,TNF-α的水平较PBS处理的哮喘模型组明显降低(12.14±3.87 pg/ml vs.25.48±4.96 pg/ml,11.95±2.55 pg/ml vs.23.48±6.11 pg/ml,16.81±7.49 pg/ml vs.29.45±6.98 pg/ml),差异有统计学意义(P＜0.05).哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液中蛋白渗出量较对照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),同时对比PBS处理组和AMI处理组发现,AMI处理后小鼠支气管肺泡灌洗液中蛋白渗出含量明显减少(P＜0.05).Western blotting检测了四组小鼠肺脏组织中PRMT1和P65的蛋白含量,结果显示在患有哮喘的小鼠中PRMT1和P65的表达水平较对照组显著升高,无论是对照组还是哮喘模型组,AMI处理后的PRMT1和P65的表达水平较PBS处理组降低.结论 PRMT1通过上调NF-κB信号通路促进肺脏炎性因子IL-1β、IL-1和TNF-α的产生以及蛋白渗出,诱导哮喘的发生.
关键词： 小鼠 哮喘 蛋白质精氨酸甲基转移酶1 NF-κB信号通路 p65 -
EGCG对老龄大鼠阴茎组织中PRMT1、DDAH、ADMA、NOS通路的影响
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对老龄大鼠阴茎组织中蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)、二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)、不对称二甲基精氨酸(ADMA)、一氧化氮合酶(NOS)通路表达的影响,探讨其对改善老龄大鼠勃起功能效果.方法 3月龄雄性SD大鼠10只(青年组),18月龄雄性SD大鼠40只,其中筛选出老龄勃起功能障碍(ED)大鼠30只,随机分为老龄组,小剂量治疗组(10 mg/kg EGCG)和大剂量治疗组(100 mg/kg EGCG),每组各10只.连续EGCG灌胃治疗12周后,测定大海绵体内压(Max ICP)、平均动脉压(MAP)和Max ICP/ MAP,处死各组大鼠取阴茎组织.应用免疫组化和Western blotting法测定大鼠阴茎组织中PRMT1、DDAH和NOS表达.酶联免疫法检测大鼠阴茎组织中ADMA和环磷鸟苷(cGMP)含量.黄嘌呤氧化法测定大鼠阴茎海绵体中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量.结果 与青年组比较,老龄组Max ICP/MAP降低(P＜0.05),SOD活性下降(P＜0.05),MDA含量增高(P＜0.05),cGMP含量降低(P＜0.05),ADMA含量升高(P＜0.05),DDAH和NOS蛋白表达量均降低(P＜0.05),PRMT1蛋白表达量升高(P＜0.05).与老龄组比较,大、小剂量组治疗可使老龄大鼠Max ICP/MAP升高(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05),MDA含量降低(P＜0.05),cGMP含量升高(P＜0.05),ADMA含量降低(P＜0.05),DDAH和NOS蛋白表达量明显升高(P＜0.05),PRMT1蛋白表达量降低(P＜0.05).结论 EGCG可以通过其抗氧化作用,在一定程度上调节PRMT1、DDAH、ADMA、NOS通路在老龄大鼠阴茎组织中的表达,改善老龄大鼠勃起功能.
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PRMT1结合并增强HMGCR活性对食管鳞癌细胞增殖能力的影响
目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)结合羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)后活性变化及其对食管鳞癌细胞增殖能力的影响.方法 以食管鳞癌ECA109细胞为模型,通过免疫共沉淀法观察PRMT1与HMGCR在细胞中的相互结合作用.将ECA109细胞随机分为感染组和对照组,分别以表达特异性针对PRMT1的RNA干扰分子的慢病毒质粒转染48 h,采用Western blot法分别检测PRMT1、HMGCR蛋白及甲基化HMGCR蛋白,分光光度法检测HMGCR酶活性,CCK-8法检测细胞增殖活性.结果 细胞裂解后的蛋白共沉淀复合物分别用抗PRMT1 、HMGCR抗体捕获后,可检测到HMGCR、PRMT1蛋白条带.感染组和对照组ECA109细胞中PRMT1蛋白相对表达量分别为0.057 ±0.011和0.239 ±0.041 (P ＜0.01),HMGCR蛋白相对表达量分别为0.175±0.031和0.184 ±0.037(P ＞0.05).感染组和对照组ECA109细胞甲基化HMGCR蛋白相对表达量分别为0.028±0.006、0.107±0.016,HMGCR相对活性分别为0.104 ±0.009、0.277 ±0.013,P均＜0.01.感染组ECA109细胞培养24 h后,细胞增殖的OD450值已低于对照组(P＜0.05);培养48 h及72 h后,两组OD450值差距进一步扩大(P均＜0.01).结论 PRMT1可通过结合HMGCR蛋白促进其甲基化途径增强HMGCR蛋白活性,进而促进食管鳞癌细胞的体外增殖能力.
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利格列汀对2型糖尿病SD大鼠肾脏PRMT1表达及肾功能的影响
目的 观察利格列汀对2型糖尿病SD大鼠肾脏组织中蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)表达及其肾功能的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=10)和观察组(n=20),将观察组全部注射链脲佐菌素后用于制备2型糖尿病肾病模型组,建模成功后将观察组随机分为糖尿病组(DM组,n=10)和糖尿病利格列汀干预治疗组(LM组,n=10),12周后测定所有大鼠体质量、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FBG)、胰岛素(FINS)水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肌酐(Cr)、尿微量清蛋白肌酐比值(ACR)及24 h尿微量清蛋白(24 h mALB);同时分离各组大鼠肾脏组织,分别采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹法及免疫组组化学法检测其PRMT1的mRNA及蛋白表达.结果 DM组体质量、SBP、DBP、FINS、HOMA-IR、Cr、ACR及24 h mALB与NC组比较均明显升高,且肾脏PRMT1表达也明显升高;经利格列汀干预治疗12周后,LM组大鼠体质量、SBP、DBP、FBG、FINS、HOMA-IR、Cr、ACR及24 h mALB均降低,肾脏PRMT1表达也明显下降.结论 利格列汀可能通过降低肾脏组织中PRMT1的表达发挥肾脏保护作用.
关键词： 2型糖尿病 蛋白质精氨酸甲基转移酶1 利格列汀 氧化应激
