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miR-145-3p通过下调CDK1抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、侵袭与凋亡
目的 研究mircoRNA-145-3p(miR-145-3p)对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭与凋亡的调控作用.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定miR145-3p在MG-63细胞与人成骨细胞系hFOB1. 19细胞中的表达水平.将MG-63分成实验组和对照组,通过人工合成miR145-3p-mimic(miR-145-3p类似物),使用慢病毒载体将miR-145-3p-mimics转入实验组MG-63细胞内,同时使用慢病毒载体将空质粒转入对照组细胞内.通过CCK-8方法检测两组细胞增殖能力;流式细胞仪分析两组细胞的细胞周期及凋亡情况;Transwell实验测定细胞侵袭能力;RT-PCR测定两组细胞miR-145-3p和周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)的表达情况;通过Targetscan数据库和荧光素酶实验确定CDK1是否为miR-145-3p的靶基因;Western印迹法检测基因的表达水平.结果 miR-145-3p在骨肉瘤细胞系MG-63细胞中的表达量为(0.59 ± 0.24),较人成骨细胞系hFOB1.19细胞中的表达量(1.46 ± 0.21)明显降低,差异具有统计学意义(P ＜0.05).CCK-8结果显示,在48 h、72 h、96 h、120 h时,实验组细胞增殖能力较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P ＜0.05).流式细胞周期结果显示,处于G1期细胞数量为(69.92 ± 0.13)% ,较对照组(49.43 ± 0.09)%明显增多(P ＜0.05),而处于S期细胞数量(26.01 ± 0.08)% ,较对照组(40.67 ± 0.11)%明显减少,差异具有统计学意义(P ＜0.05).凋亡实验结果显示,实验组细胞的凋亡比率为(31.3 ± 4.7)% ,较对照组(9.35 ± 1.9)%明显增高,差异具有统计学意义(P ＜0.05).转染野生型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P ＜0.05);而转染突变型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组无明显变化,差异无统计学意义(P ＞0.05).Western印迹实验结果显示,实验组中CDK1的表达量较对照组明显降低,且表达水平较对照组也明显降低(P ＜0.05).结论 miR-145-3p通过下调节 CDK1表达,抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡.
关键词： 骨肉瘤 miR-145-3p 周期素依赖性蛋白激酶1 增殖 侵袭 凋亡 -
大鼠miR-142-3p、miR-145-3p表达模式分析
目的：筛选并鉴定对大鼠乳腺发育和泌乳调控起关键作用的微RNAs（miRNAs）。方法以U6为内参基因，运用实时荧光定量PCR，比较miR-142-3p、miR-145-3p在泌乳21 d大鼠乳腺、肝、心、脾、肺、肾、卵巢、子宫各器官的组织样品表达量的差异及不同泌乳阶段（1、7、21 d）乳腺组织miR-142-3p、miR-145-3p的表达规律。结果miR-142-3p在泌乳21 d各组织的表达存在差异，乳腺中的表达量显著高于心、脾、肺、肾、卵巢和子宫，仅次于肝中的表达量（P<0.05）。miR-145-3p在乳腺中的表达量显著高于肝、脾和肾，而在心、肺、卵巢和子宫中差异无统计学意义（P>0.05）。乳腺组织在泌乳1、7、21 d比较，miR-142-3p的相对表达量持续下调，而miR-145-3p的相对表达量先下调后上调。结论 miR-142-3p和miR-145-3p在大鼠各组织及不同生理时期存在表达差异；miR-142-3p可通过调节靶基因催乳素受体（Prlr）来调控乳腺的发育和泌乳的形成，miR-145-3p可能具有与miR-145、miR-145-5p相似的功能。
关键词： 乳腺 动物 微RNAs 肝 心脏 脾 肺 肾 卵巢 子宫 大鼠 Sprague-Dawley miR-142-3p miR-145-3p 实时荧光定量PCR -
miR-145-3p在多发性骨髓瘤中表达及其对多发性骨髓瘤细胞凋亡与自噬作用机制的研究
目的 探讨微小mRNA-145-3p(miR-145-3p)在多发性骨髓瘤( MM)中表达及其对MM细胞凋亡与自噬作用机制.方法 2014年6月至2017年5月我院收治的MM患者60例( MM组)、健康体检者30例(正常组),采用荧光定量PCR法检测两组血浆样本及细胞株(MM细胞株选择U266、RPMI-8266、LP-1、H929,以CD138+浆细胞为对照组)中miR-145-3p表达水平,后选择毒性低的MM细胞株(LP-1)进行miR-145-3p mimic或inhibitor转染(分别为mimic组、inhibitor组),并设立对照,以流式细胞仪进行凋亡检测[吸光度值(OD值)],并采用westren blot检测转染细胞凋亡与自噬相关标志物[肿瘤蛋白21(P21)、unc-51样激酶1(ULK1)、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)].结果 MM组血浆及细胞株(U266、RPMI-8266、LP-1、H929)中miR-145-3p水平均低于正常组(P＜0.05);转染后随时间延长,OD值均增加,且转染后3 d及5 d OD值大小均为mimic组＜对照组＜inhibitor组;mimic组P21水平高于inhibitor组及对照组,ULK1、LAMP2水平低于inhibitor组及对照组( P＜0.05).结论 miR-145-3p在MM中呈低表达,可能通过靶向调控P21/ULK1/LAMP2信号通路而抑制细胞凋亡,促进细胞自噬.
