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胱硫醚γ-裂解酶产生的内源性硫化氢对脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡的调节作用
目的 探讨内源性胱硫醚γ-裂解酶(CSE)/硫化氢(H2S)体系在脂多糖(LPS)诱导的肝细胞凋亡中的调节作用.方法 培养大鼠正常肝细胞系BRL.实验随机分组为溶剂对照组、siRNA阴性对照组、CSE siRNA组、LPS组、CSE siRNA+LPS组.设立时间点为0h、4h、12h、24h;每组4个平行样.通过LPS孵育大鼠肝细胞系BRL不同时间,造成细胞损伤模型,以培养液上清中LDH活性反映细胞损伤程度.通过RT-PCR与Western blot检测CSE基因、蛋白表达,用去蛋白法检测H2S生成情况;应用RNAi干扰技术,成功转染CSE siRNA于肝细胞中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多.通过荧光染色法检测BRL细胞线粒体膜电位(MMP)变化,通过Western blot检测胞浆细胞色素C蛋白表达变化,应用流式细胞术检测BRL细胞凋亡率变化情况.结果 LPS可显著提高CSE基因、蛋白的表达,并使H2S生成增多.同时也可使MMP降低并导致细胞凋亡率的增加.通过RNAi干扰技术,成功转染CSE siRNA于肝细胞系BRL中,降低LPS引起的内源性H2S生成增多.与LPS单独作用BRL细胞相比,LPS作用转染后BRL细胞可导致MMP在短时间点降低,而在长时间点出现逐渐增加趋势;相应的细胞凋亡率则出现相反的趋势.结论 在LPS诱导的细胞凋亡过程中,内源性CSE/H2S体系表现为早期抑制凋亡,晚期促进凋亡的特点.
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硫化氢与细胞的增殖和凋亡
硫化氢是内源性气体分子家族中的一员,是一种气体递质(gasotransmitter).近年来,内源性硫化氢的产生及生理意义已经被认识,其代谢异常与许多疾病有关.本文综述了近发现的硫化氢对细胞增殖和凋亡的调节作用,并重点概述硫化氢细胞效应的分子机制,包括丝裂原活化蛋白激酶、细胞周期相关激酶、细胞死亡相关基因以及离子通道等的改变.对硫化氢调节细胞生长或死亡的深入了解将为新药设计及许多疾病的治疗提供新的思路.
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硫化氢在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化中的水平变化及其干预影响
目的 本研究通过构建单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾小管间质纤维化(TIF)大鼠模型,观察硫化氢(H2S)在血浆中的水平变化及两种关键合成酶胱硫醚β-合酶(CBS)、胱硫醚γ-裂解酶(CSE)在梗阻肾中的表达,并探讨H2S在TIF中的作用.方法 构建UUO致TIF大鼠模型,96只Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、NaHS低剂量治疗组(低剂量组)和NaHS高剂量治疗组(高剂量组),每组24只.治疗组分别于术后立即腹腔注射NaHS 1.4 μmol/kg和7μmol/kg,每日两次；假手术组和模型组同时腹腔注射等量生理盐水.各组分别于术后7d、14 d及21 d随机处死8只大鼠,采用去蛋白法测定血浆H2S含量；梗阻肾组织行苏木精-伊红及Masson染色,观察肾脏病理学变化；免疫组化方法检测梗阻肾组织CBS、CSE蛋白表达；RT-PCR法检测梗阻肾组织CBS mRNA、CSE mRNA的表达.结果 UUO大鼠肾小管间质损伤程度与血浆H2S浓度呈负相关(r=-0.891,P＜0.01)；外源性给予NaHS能显著减轻肾小管间质损伤(P＜0.01),上调肾组织CBS、CSE蛋白及其mRNA的表达和血浆H2S水平(P＜0.01),肾小管间质纤维化程度明显减轻(P＜0.01)；低、高NaHS剂量组间血浆H2S水平、CBS、CSE蛋白及其mRNA表达比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 H2S参与UUO致肾小管间质纤维化的发展过程,而且CBS/H2S体系和CSE/H2S体系在TIF中发挥关键作用.外源性补充NaHS可以延缓TIF的进展.
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硫化氢在ob／ob小鼠皮肤创面愈合中的作用与调控机制
目的：观察硫化氢（ H2 S）对ob／ob小鼠皮肤创面愈合的影响并探讨其作用机制。方法：将ob／ob小鼠随机分为生理盐水组、胰岛素组和NaHS（H2S供体）组，C57BL／6小鼠作为对照组，构建小鼠背部皮肤创面模型。干预后检测各组H2S释放量；用Western blot检测胱硫醚γ－裂解酶（CSE）及基质金属蛋白酶－9（MMP－9）蛋白的表达差异；用RT－qPCR检测CSE的mRNA表达变化；使用免疫组织化学法检测中性粒细胞及单核／巨噬细胞的浸润数量；使用ELISA检测肿瘤坏死因子（TNF）－α和白细胞介素（IL）－6的水平；用Masson染色检测胶原沉积情况。结果：ob／ob小鼠皮肤创面肉芽组织中 H2 S 释放及 CSE 蛋白、mRNA 的表达水平以及胶原沉积显著低于C57BL／6小鼠（P＜0．05）。外源性H2S可加速ob／ob小鼠皮肤创面愈合（P＜0．05），增加胶原沉积。 ob／ob小鼠创面中性粒细胞及单核／巨噬细胞浸润数量，TNF－α、IL－6的水平及MMP－9蛋白表达水平显著增加（P＜0．05）， NaHS组显著降低。结论：H2 S可显著改善糖尿病难愈性溃疡的愈合，作用机制可能与其抗炎作用有关。
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肿瘤坏死因子α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的机制
目的：探讨内源性硫化氢(H2S)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用。方法3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后，分别加入0、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml TNF-α培养24 h，干预组在加入50 ng/ml TNF-α前30 min分别加入胱硫醚γ-裂解酶(CSE)抑制剂炔丙基甘氨酸(PPG，10 mmol/L)和二辛可宁酸(BCA，2 mmol/L)。上述处理后各组细胞用胰岛素刺激。另设无TNF-α和胰岛素作用的对照组。用葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗，2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖摄取，亚甲基蓝法测定检测细胞H2S含量。结果与对照组比较，3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖消耗[(32.43±2.60)%vs (5.31±1.87)%，P<0.01]和摄取[(7.91±0.31) cpm vs (1.38±0.13) cpm，P<0.01]明显增加，10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml TNF-α作用后脂肪细胞葡萄糖消耗[(23.27±1.41)%、(14.73±3.76)%、(7.81±1.56)%vs (32.43±2.60)%，P<0.01)和摄取[(5.86±0.95) cpm、(2.60±0.35) cpm、(1.87±0.17) cpm vs (7.91±0.31) cpm，P<0.01)呈剂量依赖性减少；而H2S生成量呈浓度依赖性增加[(0.06±0.002) mmol/(g·protein)、(0.11±0.003) mmol/(g·protein)、(0.14±0.005) mmol/(g·protein) vs (0.17±0.001) mmol/(g·protein)，P<0.01)]。PPG和BCA预处理分别使脂肪细胞对胰岛素刺激的葡萄糖消耗[(24.52±2.63)%、(27.84±1.82)%vs (14.73±3.76)%，P<0.01]和葡萄糖摄取[(7.22±0.27) cpm、(7.96±0.19) cpm vs (2.60±0.35) cpm，P<0.01]显著增加。结论内源性H2S在TNF-α诱导的脂肪细胞胰岛抵抗中发挥介导作用，抑制内源性CSE/H2S体系可能是治疗胰岛素抵抗的新靶点。
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门静脉高压大鼠内源性硫化氢体系的变化
在肝硬化门静脉高压形成中,门静脉系统的血流量增加是门静脉高压产生和加重的重要因素之一,近几年来人们发现气体信号分子NO、CO可以引起内脏血管扩张而使门静脉系统血流量增加.
