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骨髓间充质干细胞细胞周期同步化的方法及对向神经细胞分化的影响
目的：分析不同处理条件下细胞同步化于G0/G1时期的效果以得到佳的同步化条件，并研究同步化对骨髓间充质干细胞(BMSCs)在碱性成纤维细胞因子(bFGF)的作用下分化为神经细胞的影响。方法分离培养成年大鼠BMSCs，5%、1%、0.5%、0.1%、0胎牛血清(FBS)分别处理24 h、48 h。PI染色后经流式细胞仪检测细胞周期各时相细胞所占比例，与正常培养条件(10%FBS)处理下对比。得到佳处理条件后，bFGF处理3 d、7 d，免疫荧光细胞化学方法检测Nestin和Tuj-1的表达。结果成年大鼠BMSCs原代提取，经传代后，细胞形态为长梭形。不同处理条件下G1/G0期细胞比例均高于正常培养条件，1%FBS处理48 h时G1/G0期细胞比例为(94.274±0.468)%，达高峰(F=39.91, P<0.001)。bFGF诱导3 d后，细胞周期同步化后的Nestin+细胞数显著高于未同步化的细胞数[(80.3±2.4)%vs.(12.1±1.5)%](F=28.25, P<0.001)；bFGF诱导7 d后，同步化后的Tuj-1+细胞数显著高于未同步化的细胞数[(74.8±3.2)%vs.(19.3±2.5)%](F=17.95, P<0.001)。结论1%FBS处理48 h是将BMSCs同步化于G0/G1期的佳条件。细胞周期同步化于G0/G1期能够提高BMSCs向神经细胞分化的比例。
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血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究
目的探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素.方法用无血清和低血清浓度培养基饥饿Anip973和AGZY83-a两种人肺腺癌细胞系,分别在培养48 h、72 h和5 d时收集各组细胞,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数.结果 Anip973细胞系在含0.2% FBS的RPMI 1640培养基中培养5 d得到理想结果,G0-G1期细胞百分比高达84.19%.AGZY83-a在含0.2% FBS的RPMI 1640培养基中培养48 h也获得较满意的结果,G0-G1期细胞百分比达61.30%.结论细胞类型、血清浓度和饥饿时间是血清饥饿法进行细胞周期同步化实验成功与否的影响因素.可应用血清饥饿法使不同细胞系同步于G0-G1期.
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血清浓度及饥饿时间在HeLa细胞G0/G1期同步化中的影响
目的: 探索HeLa细胞血清饥饿法周期同步化的培养条件.方法: 采用流式细胞术(FCM)研究了血清浓度及饥饿时间对HeLa细胞G0/G1期同步化及细胞凋亡的影响.结果: (1)当血清浓度处于0～10 mL/L, 饥饿时间为20～26 h时便可获得80%～90%的G0/G1期细胞;(2)当血清浓度处于0～2 mL/L且饥饿时间达到44 h以上时, 可以获得接近100%的G0/G1期细胞, 但此时饥饿时间越长, 凋亡细胞的比例会越高.结论: HeLa细胞可以通过血清饥饿法获得高纯度的G0/G1期细胞, 为周期相关研究提供了实验依据.
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人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究
目的:探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞(HKC)的同步化方法.方法:将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组, 分别采用胎牛血清浓度为0、 1、 2、 3、 4、 5和100 mL/L的DMEM培养液培养24 h.根据流式细胞术结果选择的佳同步化HKC的胎牛血清浓度.将HKC的同步化处理时间分别延长为24 h、 48 h和72 h, 选择佳同步化时间.用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响.采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果.结果:选择无血清(0 mL/L)和1 mL/L为HKC佳同步化的胎牛血清浓度, 选择48 h为HKC同步化佳时间.细胞生长曲线表明采用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h后恢复正常培养的HKC细胞, 其生长曲线更接近于正常培养的细胞.Brdu进一步证明, 用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可以使90%以上的HKC细胞处于G0/G1期.结论:用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可获得90%以上的G0/G1期HKC.
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血清饥饿法对人牙髓细胞周期同步化的研究
目的:探讨不同的血清饥饿方法和饥饿时间对人牙髓细胞(HDPCs)细胞周期的影响.方法:血清直接饥饿和梯度饥饿处理人牙髓细胞.倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8检测血清饥饿处理对HDPCs增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期验证HDPCs同步化的效果.结果:血清直接饥饿处理或梯度饥饿处理后其G0/G1期HDPCs的比例均显著高于一般培养组(P<0.05),但血清直接饥饿组和梯度饥饿组间无显著性差异(P>0.05).用含5 mL/L FBS的DMEM培养基培养48 h能获得较满意的结果,G0/G1期细胞百分比达85.95%.结论:血清饥饿法能有效地使人牙髓细胞同步于G0/G1期;5 mL/L FBS血清饥饿处理细胞48 h可取得较好的细胞周期同步化效果.
