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冷热应激对大鼠脊髓和脊神经节p38信号转导的影响
目的 观察冷热应激对大鼠脊髓和脊神经节内p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)的激活作用.方法 建立大鼠冷热应激模型,应用免疫组织化学和Western蛋白印迹法观察p38的激活水平.结果 磷酸化p38(p-p38)的免疫阳性细胞见于正常胸段脊髓后角Ⅱ层,细胞密度低,棕色反应产物见于细胞核,胞浆着色弱,在Rexed Ⅲ～Ⅹ层无阳性免疫反应.脊神经节p-p38免疫反应见于少数小型神经元,产物位于胞核.热应激刺激10 min和20 min后,Rexed Ⅱ层p-p38阳性细胞数明显减少;体温(38℃)水浴刺激(20 min)后阳性细胞数无显著变化.热应激未改变脊神经节p-p38免疫反应.冷应激10 min和20 min后,RexedⅡ层阳性细胞数轻微减少;脊神经节p-p38免疫反应无变化.蛋白印迹显示,热应激和冷应激都不同程度地降低胸段脊髓p38的激活水平.结论 正常脊髓p38具有一定的基础激活水平;热应激对p38激活有明显抑制,而冷应激有较弱抑制.
关键词： 冷应激 热应激 P38 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK) 大鼠 -
Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用
目的 探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平.结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量.结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用.
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斑蝥素酸镁阻断MAPK信号通路抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖
目的 观察斑蝥素酸镁对SMMC-7721肝癌细胞丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,探讨斑蝥素酸镁的抗癌机制.方法 使用蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性检测试剂盒分别检测斑蝥素酸镁和冈田酸(OA)对PP2A活性的影响.实时定量PCR检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721人肝癌细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p38MAPK、c-Jun N末端激酶1/2(JNK1/2) mRNA表达水平的影响;Western blot法检测斑蝥素酸镁、OA对SMMC-7721细胞ERK1/2、p38MAPK、JNK蛋白表达以及蛋白磷酸化水平的影响.结果 0.283 μmol/L斑蝥素酸镁对PP2A活性无明显抑制作用,0.567μmol/L斑蝥素酸镁能显著抑制PP2A活性,且随着药物浓度的增加,抑制作用愈趋明显;同时0.059 nmol/L OA对PP2A活性也有显著抑制作用.与空白对照组比较,0.283 μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1、ERK2mRNA表达量无明显变化,当浓度为0.567 μmol/L时,ERK1、ERK2mRNA表达量显著下降,且随着药物浓度的增加下降更明显;而0.059 nmol/L OA组ERK1、ERK2mRNA表达量却显著升高.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK1、JNK2 mRNA表达量均显著升高.与空白对照组比较,0.283μmol/L斑蝥素酸镁组ERK1/2磷酸化水平无明显变化,高于0.567 μmol/L斑蝥素酸镁处理显著下调ERK1/2磷酸化水平,其下调程度具有浓度依赖效应;而0.059 nmol/L OA组ERK1/2磷酸化水平却显著上调.0.059 nmol/L OA和不同浓度斑蝥素酸镁组的p38MAPK、JNK磷酸化水平均显著上调.结论 斑蝥素酸镁可能是通过抑制PP2A活性进而抑制ERK1/2通路来实现对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用.
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急性冷热应激对大鼠脊髓和脊神经节ERK信号转导的影响
ERK足细胞内MAPK信号转导系统的霞要蛋白激酶,参与多种刺激的应激反应.本实验建立冷热应激模型,应用免疫组织化学和Western blot方法,研究冷热应激刺激对大鼠脊髓和脊神经节ERK的激活作用.结果显示:(1)正常脊髓非磷酸化ERK1(pan-ERK1)阳性细胞分布于Rexed Ⅲ-Ⅹ层.而Ⅰ-Ⅱ层没有免疫反应,胞浆着色,没有核膜断裂;磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)阳性细胞见于厌质Rexed各层(Ⅱ-Ⅹ),散在分布.免疫产物位于胞浆核周区,少见于细胞核,核膜有断裂.脊冲经节p-ERK1/2免疫反应见于大、中、小型神经元,定位于细胞核;没有pan-ERK1免疫反应.(2)20 min热应激后,Rexed Ⅱ层P-ERK1/2阳性细胞数明显增多.核周着色区增大,核膜常有断裂,脊神经节阳性细胞数没有明显变化;10 min热应激和体温(38℃)应激后,脊髓和脊神经节阳性细胞数和核着色没有显著变化.(3)20 min冷应激后,脊髓Ⅱ层p-ERK1/2阳性细胞数轻度减少,核周着色区变窄,核膜有断裂,脊神经节阳性细胞数没有变化;10 min冷应激后阳忡细胞数没有明显变化.(4)Wostem blot显示,热应激和冷应激分别提高和降低了胸段脊髓p-ERK1/2的蛋白表达水平.本研究证实,ERK存在于脊髓灰质各层和脊神经节各型神经元,热应激提高了ERK激活水平而冷应激则相反,提示MAPK信号转导激活具有应激类型和应激强度的依赖性,参与了感觉神经元的功能调节.
