首页 > 文献资料
-
电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力和LIM激酶1磷酸化的影响
目的：探讨电针神庭、百会穴对脑缺血再灌注大鼠海马突触可塑性和学习记忆能力的影响，及其可能的机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠32只，随机分为假手术组、模型组、电针组、非穴组，每组8只。模型组、电针组、非穴组采用线栓法制备大鼠脑缺血120 min再灌注模型。电针组电针神庭、百会14 d，非穴组电针大鼠双侧胁下非经非穴14 d。采用Morris水迷宫检测学习记忆能力；电镜观察海马区突触形态；Western blotting检测海马LIM激酶1及其磷酸化水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显增加(t>6.789, P<0.01)，穿越平台次数显著减少(t=8.695, P<0.001)，突触数减少，LIM激酶1总蛋白(t=7.568, P<0.01)及磷酸化水平下降(t=8.874, P<0.001)；与模型组比较，电针组大鼠平均逃避潜伏期明显减少(t>4.938, P<0.01)，穿越平台次数显著增多(t=-7.891, P<0.001)，突触数量增多，LIM激酶1总蛋白(t=-6.473, P<0.01)及磷酸化水平上升(t=-6.579, P<0.01)。非穴组各项指标与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论电针神庭、百会穴可以改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力，可能与LIM激酶1磷酸化水平升高进而改善突触可塑性有关。
-
LIMK1与前列腺癌侵袭转移的研究进展
LIM激酶家族包括两大成员:LIM激酶1(LIM kinase 1,LIMK1)和LIM激酶2(LIM kinase 2,LIMK2),在多种生物学活动中起着重要的枢纽作用,由其上游的信号分子激活,具有独特的信号通路.LIMK1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,生理功能主要是把Cofilin磷酸化使之成为失活的 pCofilin,进而参与调节细胞肌动蛋白骨架聚合,从而调节细胞形态、运动、黏附及迁移.体内存在多种机制调控着LIMK1的活化,活化的LIMK1在前列腺癌的发生、发展过程中起着至关重要的作用.近年来发现LIMK1对前列腺癌细胞的迁移及侵袭有重要的调节作用,可能是引起前列腺癌细胞侵袭和转移的关键分子.
-
LIM激酶1的研究进展
LIM激酶1(LIM Kinasel,LIMK-1)是单丝氨酸蛋白激酶,它包含LIM和PDZ蛋白和蛋白相互作用区、P/S结构域、激酶结构域,在神经元中呈高表达.它的主要作用是使肌动蛋白解聚因子cofilin磷酸化和失活,从而导致肌动蛋白细胞骨架的改变.LIMK-1的活化受多种机制调控,成为联系细胞外刺激与细胞骨架稳定性的枢纽,在多种基本的生物学过程中起重要作用.
-
PAK4－LIM K1－Cofilin 信号通路对非小细胞肺癌迁移及侵袭能力的影响
目的：探讨p21活化激酶4（PAK4）对非小细胞肺癌（NSCLC）侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法：PAK4－siRNA或阴性对照转染A549和NCI－H520细胞株，实时荧光定量PCR和Western blot 分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平，Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响；Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平；免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定；体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物；Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果：沉默PAK4后A549和NCI－H520细胞迁移和侵袭能力明显减弱（P＜0．05）；LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化，而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调；免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定；激酶分析实验结果显示，激酶缺陷型PAK4（K350M）使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4（S445N）（P＜0．05）。 Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关（P＜0．05）；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后，迁移和侵袭细胞数均高于PAK4－siRNA转染组（ P＜0．05）。结论： PAK4通过直接磷酸化LIMK1而促进非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。
-
沉默LIMK1的表达抑制体外胶质瘤细胞的侵袭与迁移
目的 研究LIM激酶1(LIMK1)小干扰RNA (siRNA)敲低后对人胶质瘤细胞系SNB19侵袭迁移能力的影响及机制. 方法 (1)免疫组化染色检测对照脑组织及胶质母细胞瘤组织中LIMK1蛋白的表达.(2)将SNB19分为3组:siRNA-LIMK1组(转染siRNA-LIMK1干扰片段)、siRNA-NC组(转染对照siRNA片段)、空白对照组(未转染).采用实时定量(RT-PCR)法和Western blotting法检测3组细胞中mRNA和蛋白的表达情况.划痕实验和Transwell侵袭实验评价3组细胞的迁移和侵袭能力.免疫荧光法观察3组细胞的定位以及细胞片状伪足形态变化.Western blotting法检测3组细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9以及丝切蛋白(cofilin)、磷酸化cofilin (p-cofilin)的表达. 结果 (1)免疫组化结果显示蛋白在对照脑组织呈弱阳性表达,而在胶质母细胞瘤中呈强阳性表达.(2)siRNA-LIMK1组细胞mRNA和蛋白较其他2组细胞均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验和Transwell侵袭实验显示3组细胞创面愈合率、侵袭细胞数分别为34.33％±1.53％、75.67％±2.08％、78.33％±1.53％及40.33±5.03、136.67±5.13、143.33±2.52,差异均有统计学意义(F=608.59,P=0.000;F=515.52,P=0.000);其中siRNA-LIMK1组创面愈合率、侵袭细胞数较其他2组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光结果显示LIMK1表达于细胞质特别富集于细胞前缘的片状伪足处,siRNA-LIMK1组细胞片状伪足较siRNA-NC组和空白对照组明显变小甚至不伸展.Western blotting结果显示,与siRNA-NC组和空白对照组比较,siRNA-LIMK1组MMP-2、MMP-9以及p-cofilin的表达量均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);而cofilin的表达量无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 沉默LIMK1的表达可有效抑制体外胶质瘤细胞系的侵袭和迁移,LIMK1可能成为脑胶质瘤的新的治疗靶点.
-
Limk1不同突变体HA融合表达载体构建及在细胞内定位
目的:构建LIM激酶(Limk)1不同突变体的HA融合表达载体,并在真核细胞中表达,观察这些突变体在细胞内定位.方法:利用聚合酶链式反应(PCR)扩增Limk1全长序列,构建HA-Limk1真核表达质粒;利用定点突变策略对HA-Limk1进行核定位信号(NLS)缺失突变,命名为Limk1-NLS(del);用合成两条互补序列退火获得目标片段插入载体的策略构建Limk1-NLS;将2表达质粒转染HepG2细胞,细胞免疫荧光方法以及核质分离后用western-blot检测其在细胞中定位.结果:经测序鉴定Limk1及其不同突变体序列正确,在HepG2细胞中高表达;其中HA-Limk1在细胞质、细胞核均有表达,Limk1-NLS (del)主要定位于细胞质,Limk1-NLS主要定位于细胞核.结论:成功构建了Limk1全长及不同突变体的HA融合表达载体,初步明确突变体在细胞内的定位.
