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针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞内钙离子浓度的影响
目的:研究针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞内钙离子[Ca2+]i的影响.方法:采用激光共聚焦显微镜的动态扫描功能和荧光分子探针技术,从针灸血清学和细胞学角度,对针刺通过颅脑损伤大鼠血清对SY5Y细胞[Ca2+]i的影响进行研究.结果:各组血清孕育后SY5Y细胞[Ca2+]i相比较显示,模型对照组的荧光强度明显高于空白对照组(P<0.01),而针刺治疗组的荧光强度虽然也高于空白对照组(6h组除外).但明显低于模型对照组(P<0.01).结论:颅脑损伤大鼠的血清可使SY5Y细胞[Ca2+]i升高,针刺可以通过血清减缓此过程的发生.
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APP基因真核表达载体的构建与鉴定
目的重组APP基因真核表达载体.方法采用定向克隆技术、脂质体转染和Nonhenblot杂交技术.结果在分别独立的反应中,PDGF启动子、APPcDNA、载体依摩尔比3∶3∶1及1∶1∶1同时连接,重组体利用脂质体介导转染SY5Y神经母细胞瘤细胞,Northernbolt杂交检测到瞬时表达.结论构建具有神经组织特异性的APP基因真核表达载体.
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APP基因真核表达载体的构建与鉴定
目的重组APP基因真核表达载体.方法采用定向克隆技术、脂质体转染和Northen blot杂交技术.结果在分别独立的反应中,PDGF启动子、APP cDNA、载体依摩尔比3∶3∶1及1∶1∶1同时连接,重组体利用脂质体介导转染SY5Y神经母细胞瘤细胞,Northern bolt杂交检测到瞬时表达.结论构建具有神经组织特异性的APP基因真核表达载体.
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电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2+]i和NE含量影响的实验研究
目的:对电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2+]i和NE含量的影响进行实验研究.方法:采用激光共聚焦显微镜的动态扫描功能和荧光分子探针技术,从针灸血清学和细胞学角度,对针刺通过颅脑损伤大鼠血清影响SY5Y细胞[Ca2+]i进行研究;采用高效液相色谱法研究电针对颅脑损伤大鼠脑组织NE含量的影响.结果:各组血清孕育12h后SY5Y细胞[Ca2+]i相比较显示,模型对照组的荧光强度明显高于空白对照组(P<0.01),针刺治疗组的荧光强度明显低于模型对照组(P<0.05);各组大鼠脑组织NE含量相比较,模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),针刺治疗组明显低于模型对照组(P<0.05).结论:电针12h可减慢颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2+]i和NE含量的上升趋势,提示电针可能是通过抑制脑皮质内大量NE聚集,降低皮质神经元的兴奋性,从而抑制细胞内Ca2+滞留和超载.减轻脑水肿,对脑组织起到保护作用.
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低氧增强SY5Y培养细胞内nPKCε的膜转位
目的:通过观察低氧刺激对培养SYSY神经母细胞瘤细胞内nPKCε和nPKCθ膜转位激活的影响,以探讨两者是否参与细胞低氧预适应的发生.方法:利用本室建立的体外培养SY5Y细胞低氧刺激模型,并应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白印记(Westem-Blot)等方法,半定量分析SY5Y细胞内nPKCε、nPKCθ的膜转位水平.结果:SY5Y细胞经低氧刺激后,随刺激时间(0.5、2、4、6、8、12和24 h)的延长,nPKCε在胞浆内的含量逐渐减少,而胞膜成分中的含量则明显增加,且于低氧刺激2h后的增高水平具有统计学显著意义(P＜0.001);然而,nPKCθ在正常情况下只存在于胞膜成分内,且其含量不随低氧刺激时间的增加而改变(P＞0.1).结论:nPKCε可能参与了细胞低氧耐受的发生.
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细胞外基质金属蛋白酶诱导因子降解途径的初步研究
目的:观察蛋白酶体抑制剂MG-132对细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,CD147)表达的影响,探讨CD147的降解途径.方法:在SY5Y细胞中分别加入0,1,2.5和5μmol/L不同浓度剂量的蛋白酶体抑制剂MG-132作用24 h后,通过Western Blot和In-cell Western的方法检测CD147的相对含量;免疫荧光双标检测SY5Y细胞中CD147与泛素(ubiquitin)的表达及共定位情况.结果:在一定时间内,随着MG-132浓度的增大,CD147的含量相对增多;与0μmol/L组比较,5μmol/L组的CD147含量在两种实验方法中分别增加了约151.81％ ±36.26％ (P ＜0.05)和76.43％±18.02％ (P ＜0.05);CD147与泛素在细胞胞体中存在共定位的特征.结论:蛋白酶体抑制剂MG-132可增加CD147的含量;CD147可被泛素化.提示CD147可能通过泛素-蛋白酶体途径进行降解.
关键词： 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 SY5Y细胞 蛋白酶体途径 泛素
