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运动对Apo E基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子和NF-κB的调控作用
目的:探讨长期中等负荷耐力运动对载脂蛋白E(Apo E)基因敲除小鼠冠状动脉粥样硬化的影响和对冠状动脉超氧化物阴离子、CD40L的调控作用.方法:40只6周龄Apo E基因敲除小鼠随机分为运动干预组和对照组.运动干预组给予长期中等负荷耐力跑台运动干预32周；一般对照组未予以特殊干预.实验结束后评估两组小鼠冠状动脉主干的动脉粥样硬化病理形态学改变程度,采用荧光免疫组化法测定冠状动脉主干的超氧化物阴离子、CD40L的表达、实时PCR的方法测定NF-κB、MCP-1mRNA的表达.结果:一般对照组冠状动脉粥样硬化进展显著；长期中等负荷耐力运动组冠状动脉粥样硬化程度显著下降、冠状动脉主干狭窄率较对照组显著下降(33.3±5.66％vs 48.3±5.91％,P＜0.01)、冠状动脉主干超氧化物阴离子显著低于对照组(2.17±0.69 vs 3.70±0.51,P＜0.01),CD40L的表达均显著低于对照组(1.97±0.41 vs 2.47±0.35,P＜0.01),并且NF-κB、ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达也显著低于对照组.结论:长期中等负荷耐力运动可显著下调Apo E基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子与CD40L的表达,减轻炎症浸润并延缓冠状动脉粥样硬化的进展.
关键词： 耐力运动 载脂蛋白E基因敲除小鼠 动脉粥样硬化 超氧化物阴离子 核因子-κB -
盐酸乐卡地平对高血压伴动脉粥样硬化载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉弹力纤维降解、胶原合成的影响
目的 观察盐酸乐卡地平对高血压载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉弹力板降解及胶原合成的影响及相关机制.方法 雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠60只,自6周龄始予以高脂饲料,8周龄时随机分为对照组(n=20)、高血压组(n=20)、盐酸乐卡地平组(n=20),高血压组和盐酸乐卡地平组小鼠8周龄时接受改良主动脉缩窄术制作高血压模型,盐酸乐卡地平组饲料中加入盐酸乐卡地平1.50 mg/(kg·d),给药22周.治疗结束测定各组血压、升主动脉弹力纤维分级及胶原含量,ELISA方法测定可溶性细胞间黏附分子1(ICAM-1)水平,放射免疫法测定肾素活性,采用荧光法测定超氧化物阴离子的含量、免疫荧光的方法测定抗鼠单核细胞/巨噬细胞2(MOMA-2)单克隆抗体的表达、实时定量PCR (real-time PCR)法测定核转录因子kB的P65亚基(NFkB P65)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结果 高血压组主动脉内膜中层厚度[(147.3±22.6)比(104.0±17.2)μm,P＜0.01]、弹力纤维Ⅲ级病变[(15.2±3.7)％比(8.1±3.3)％,P＜0.01]、Ⅲ型胶原含量[(23±6)％比(11±4)％,P＜0.01]、主动脉超氧阴离子(5.9±0.8比3.1±0.3,P＜0.01)、MOMA-2 (6.1±0.5比4.0±0.3,P＜0.01)的表达及NFkBP65(5.2±0.4比1.1±0.1,P＜0.01)、MMP-9 mRNA的表达(5.1±0.2比1.0±0.1,P＜0.01)较对照组均有明显升高.与高血压组比较,盐酸乐卡地平组主动脉内膜中层厚度[(111.8±31.1)比(147.3±22.6)μm,P＜0.01]、主动脉弹力纤维Ⅲ级病变[(10.9±4.1)％比(15.2±3.7)％]、Ⅲ型胶原含量[(15±5)％比(23±6)％,P＜0.05],主动脉超氧阴离子(3.5±0.4比5.9±0.8,P＜0.01)、MOMA-2(4.4±0.5比6.1±0.5,P＜0.01)的表达及NF-kB P65(3.9±0.2比5.2±0.4,P＜0.01)、MMP-9 mRNA(3.8±0.2比5.1±0.2,P＜0.01)的表达均降低.结论 盐酸乐卡地平能够抑制高血压ApoE基因敲除小鼠弹力板降解及胶原合成,其作用与抑制氧化应激及炎症作用有关.
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褪黑素通过抑制线粒体通透性转换孔开放保护缺氧缺糖SHSY5Y细胞
目的观察褪黑素对体外缺氧缺糖SHSY5Y细胞的保护作用及线粒体通透性转换孔开放对该保护作用的影响.方法体外培养SHSY5Y神经母细胞瘤株,以缺氧缺糖(OGD)、褪黑素(10μmol/L)伴或不伴苍术苷(atractyloside)(20μmol/L)处理,以MTT检测SHSY5Y细胞活性,应用calcein-AM、HEt和fluo-3/AM的荧光强度测定OGD后SHSY5Y细胞线粒体通透性转换孔(MTPT)开放、细胞内超氧阴离子和钙离子的浓度.结果褪黑素能提高OGD后SHSY5Y细胞的活性,这种神经保护作用可被苍术苷阻断.褪黑素降低OGD后calcein-AM、HEt和fluo-3/AM的荧光强度.结论褪黑素通过抑制SHSY5Y细胞MTPT开放,来降低细胞内超氧阴离子的浓度,进而抑制细胞内钙超载,从而达到保护SHSY5Y细胞对抗OGD的细胞损害的作用.
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丹参酚酸通过抑制超氧阴离子生成保护SHSY5Y细胞的研究
目的:观察丹参酚酸对体外缺氧缺糖SHSY5Y细胞的保护作用及超氧阴离子生成对该保护作用的影响.方法:体外培养SHSY5Y神经母细胞瘤株,以缺氧缺糖(OGD)、丹参酚酸(100mg/L)及三亚乙基四胺(1 mM)处理,以MTT检测SHSY5Y细胞活性,应用calcein-AM、HEt和fluo-3/AM的荧光强度测定OGD后SHSY5Y细胞线粒体通透性转换孔开放、细胞内超氧阴离子和钙离子的浓度.结果:丹参酚酸可以提高OGD后SHSY5Y细胞的活性,降低OGD后calcein-AM、HEt和fluo-3/AM的荧光强度.丹参酚酸的神经保护作用可被三亚乙基四胺阻断.结论:丹参酚酸通过减少SHSY5Y细胞超氧阴离子生成,进而抑制线MPTP开放及细胞内钙超载,从而达到保护SHSY5Y细胞对抗OGD的细胞损害的作用.
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SOD模拟物抗缺血再灌注损伤的作用
超氧化物歧化酶(SOD)在调节超氧化物水平方面起着主要的作用,这些酶的活性有两种形式:线粒体中的锰酶(SOD2)、细胞内存在的铜锌酶(SOD1)或细胞外表面的铜锌酶(SOD3),其中SOD2为重要[1].超氧化物在体内是通过大量的路径形成的,包括正常细胞呼吸作用、内皮细胞和花生四烯酸的代谢等.在一些缺血器官再灌注后可见到超氧化物阴离子的过量释放并导致了组织损伤,包括肾脏,胃,肠,皮肤和心脏[2,3].
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异普复合静脉麻醉对IL-6,CD18,SOA的影响
目的:研究异丙酚或/和普鲁卡因对佛波酯(PMA)刺激下离体中性粒细胞(PMN)表面粘附分子CD18表达、超氧化物阴离子(SOA)释放及内毒素(LPS)刺激下全血中IL-6生成的影响.方法:提纯PMN并用磷酸盐缓冲液(PBS)制成悬液,样本随机分为5组:空白组(PMN+PBS) ,损伤组(PMN+PBS+ PMA 100ng/ml),异丙酚组(PMN+ PMA 100ng/ml + propofol 4μg/ml ),普鲁卡因组(PMN+PMA100ng/ml+procaine 15μg/ml)及异普复合组(PMN+ PMA 100 ng/ ml +2μg/ml propofol +8μg/ml procaine).另设相应浓度药物组.流式细胞仪检测CD18表达 , 细胞色素C还原法测定SOA释放,放免法测定全血中IL-6生成.结果:异丙酚、普鲁卡因单独或联合应用均可抑制中性粒细胞表面粘附分子CD18表达及SOA释放,异丙酚抑制效应强于普鲁卡因.异普复合组效应与异丙酚临床浓度组接近,强于普鲁卡因临床浓度组.异丙酚促进全血中IL-6的生成,普鲁卡因抑制全血中IL-6的生成,异普复合组作用接近普鲁卡因组.结论 :异丙酚普鲁卡因复合应用对抑制中性粒细胞粘附功能,减轻组织损伤作用具有明显的互补性,这为两种麻醉药物在临床实践中复合应用的合理性给予基础实验支持.
