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补肾祛痰化瘀法对载脂蛋白E基因敲除小鼠氧化应激水平的影响研究
目的：评估不同周龄载脂蛋白E( Apolipoprotein E,ApoE)基因敲除小鼠的氧化应激水平,并探讨补肾祛痰化瘀法对ApoE基因敲除小鼠氧化应激水平的影响。方法将成年组及老年组ApoE基因敲除小鼠共32只随机分为中药组及对照组,并取相同遗传背景的C57BL/6J小鼠共16只随机分成成年正常组及老年正常组,连续给予补肾祛痰化瘀法组方灌胃12周,成年组至28周龄、老年组至44周龄时予检测脑组织超氧化物歧化酶( superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,及丙二醛( malondialdehyde, MDA)水平；并进行甲苯胺蓝染色观察海马CA1区神经细胞分布情况及尼氏体数量,免疫组化法检测8-羟基脱氧鸟苷(Oxo-2’-deox-yguanosine ,8-OHDG)表达情况。结果氧化应激水平均符合正态分布,故采用单因素方差分析进行数据统计。 ApoE基因敲除小鼠及C57小鼠28周龄时脑内氧化应激水平无明显差异；随着小鼠的周龄的增加,至44周时,老年ApoE基因敲除小鼠对照组其脑内MDA及8-OHDG表达水平明显增高,而SOD及GSH-Px表达水平明显降低,与老年正常组C57小鼠的脑内氧化应激水平具有明显差异(P<0．05)；而老年中药组与老年正常组相比,无明显差异。结论老年ApoE基因敲除小鼠氧化应激水平较高,而补肾祛痰化瘀法具有一定的抗氧化作用,可抵抗部分机体氧化作用,并控制机体氧化应激水平。
关键词： 补肾祛痰化瘀法 载脂蛋白E基因敲除小鼠 氧化应激 -
艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除小鼠学习记忆功能与海马β淀粉样蛋白沉淀的影响
目的：观察艾烟与香烟对载脂蛋白E基因敲除( apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠学习记忆能力与海马β淀粉样蛋白(β-Amyloid)沉淀的影响。方法将13只8周龄C57BL/6小鼠作为空白对照组,27只同龄ApoE-/-小鼠随机分为ApoE-/-模型组、艾烟组、香烟组。香烟与艾烟组小鼠分别暴露于5~15 mg/m3的香烟与艾烟环境。各组小鼠每天干预20分钟,每周6天,共干预12周。于第13周进行行为学测试,之后处死动物、取材,对其脑组织海马中Aβ沉淀进行刚果红染色。结果与模型组对比,空白对照组、艾烟组、香烟组小鼠均表现出学习潜伏期缩短,记忆潜伏期增长,记忆错误次数减少,差别有统计学意义( P<0．05)。模型组小鼠在视野范围内有明显的粉红色弥散样Aβ沉淀,空白对照组明显少于模型组(P<0．05)。艾烟组与香烟组在相同海马区域CA3中淀粉样蛋白沉淀均有不同程度的减少,艾烟组中Aβ沉淀较模型组显著降低(P<0．05),较香烟组亦有减少(P<0．05)。结论艾烟能够发挥ApoE-/-小鼠的海马CA3区保护作用,减少Aβ沉淀进而改善ApoE-/-小鼠学习记忆能力。
关键词： 艾烟 香烟 载脂蛋白E基因敲除小鼠 淀粉样蛋白 学习记忆 -
化瘀祛痰方药对动脉粥样硬化模型小鼠肝脏胆固醇代谢相关基因表达调控的影响
目的:观察化瘀祛痰方药对ApoE基因敲除(ApoE-/-)动脉粥样硬化(AS)模型小鼠肝脏胆固醇合成、摄取和转化相关基因的影响,探讨化瘀祛痰方药抗AS作用及可能的机制.方法:20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰组(20g·kg-1·d-1),10只C57BL/6/J小鼠作为空白对照.ELISA法检测小鼠血清载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B100(ApoB100)含量,全自动生化分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,HE染色观察小鼠主动脉及肝脏结构变化,油红O染色观察主动脉及肝脏脂质沉积,real-time RT-PCR和Western blotting法检测肝脏低密度脂蛋白受体(LDL-R)、胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、B类Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)基因mRNA和蛋白水平.结果:与空白对照组相比,模型组小鼠血清ApoB100、TC、TG、LDL-C水平显著升高,ApoA、HDL-C水平显著降低,主动脉管腔见较大粥样斑块,管壁和肝细胞中见大量脂质沉积,肝脏LDL-R、CYP7A1、SR-B Ⅰ、HMGCR基因表达显著下调.与模型组相比,化瘀祛痰组小鼠ApoB100、TC、TG、LDL-C显著下降,ApoA、HDL-C显著升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和管壁脂质沉积量明显减少,肝脏LDL-R、CYP7A1、SR-B Ⅰ基因表达显著上调,HMGCR基因表达未见明显变化.结论:化瘀祛痰方药可抑制ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控肝脏胆固醇摄取和转化相关基因表达有关.
关键词： 化瘀祛痰方药 动脉粥样硬化 载脂蛋白E基因敲除小鼠 胆固醇 -
红景天甙对低压低氧诱导的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块及MMP-2、MMP-9和TIMP-2表达的影响
目的:观察红景天甙对低压低氧诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响.方法:30只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为常压常氧组、低压低氧组、红景天甙组,后两组每天处于低压低氧状态,红景天甙组每天灌服红景天甙30mg/kg.12周后测空腹血糖及血脂,取小鼠主动脉根部的主动脉,masson 染色观察AS斑块的大小及斑块内胶原含量,Western blot及血清检测MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白表达.结果:3组空腹血糖和血脂无统计学差异;与常压常氧组比较,低压低氧组AS斑块面积明显增加(P＜0.01),胶原含量明显减少(P＜0.01);与低压低氧组比较,红景天甙组斑块面积及MMP-2,MMP-9蛋白明显降低(P＜0.01),而斑块胶原含量及TIMP-2蛋白明显增加(P＜0.01).结论:红景天甙能抑制低压低氧诱导的AS斑块形成,并提高斑块稳定性,其机制可能与红景天甙增加斑块内胶原含量和降低MMP-2、MMP-9,提高TIMP-2蛋白表达有关.
关键词： 红景天甙 低压低氧 载脂蛋白E基因敲除小鼠 动脉粥样硬化 斑块稳定性 -
解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清超敏C反应蛋白的影响
目的 观察解毒活血配伍方药对载脂蛋白E基因敲除[apolipoprotein E gene knock-out,ApoE (-/-) mice],J、鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响.方法 13周龄110只ApoE(-/-)小鼠分为高脂饲料组(98只,给予高脂饲料),普通饲料组(12只,给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠作为正常对照组(12只,给予普通饲料).19周后随机抽取高脂饲料ApoE(-/-)小鼠2只确认易损斑块形成后,剩余96只随机分为8组(模型组、解毒组、活血组、解毒活血配伍高、中、低剂量组、洛伐他汀组和血脂康组),每组12只.造模成功后每天给予药物干预,解毒组予虎杖提取物26.6 mg/kg;活血组予芎芍胶囊110 mg/kg;配伍高剂量组予虎杖提取物53.2 mg/kg,芎芍胶囊220 mg/kg;配伍中剂量组给予虎杖提取物26.6 mg/kg,芎芍胶囊110 mg/kg;配伍低剂量组给予虎杖提取物13.3 mg/kg,芎芍胶囊55 mg/kg;洛伐他汀组给予洛伐他汀3.3 mg/kg;血脂康组给予血脂康0.2 g/kg;以上药物根据剂量蒸馏水溶解,混匀后灌胃,每次0.4 mL.模型组、普通饲料组、C57BL/6J小鼠对照组均灌服生理盐水0.4 mL.用药17周后,下腔静脉取血,全自动酶标仪检测血清hs-CRP浓度.结果 模型组血清hs-CRP水平显著高于正常对照组和普饲组(P＜0.05,P＜0.01);各给药组中,洛伐他汀组、解毒组和配伍高剂量组hs-CRP水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);配伍高剂量组hs-CRP水平低于洛伐他汀组、血脂康组、单纯解毒或活血组及配伍中、低剂量组;解毒组hs-CRP水平低于活血组(P＜0.01).结论 解毒活血配伍方药可降低ApoE(-/-)小鼠血清hs-CRP水平.
关键词： 解毒活血配伍方药 载脂蛋白E基因敲除小鼠 超敏C反应蛋白 动脉粥样硬化 易损斑块 -
解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉 NF-кB与MMP-9表达的调控作用
目的 观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice,ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-кB(NF-кB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用.方法 13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料).19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26.6 mg/(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg/(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53.2 mg/(kg·d),芎芍胶囊220 mg/(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26.6 mg/(kg·d),芎芍胶囊110 mg/(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13.3 mg/(kg·d),芎芍胶囊55 mg/(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3.3 mg/(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水).17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-кB和MMP-9表达的程度.结果 模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-кB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-кB和MMP-9表达(P＜0.01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效好(P＜0.01).结论 解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-кB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组.
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运动对Apo E基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子和NF-κB的调控作用
目的:探讨长期中等负荷耐力运动对载脂蛋白E(Apo E)基因敲除小鼠冠状动脉粥样硬化的影响和对冠状动脉超氧化物阴离子、CD40L的调控作用.方法:40只6周龄Apo E基因敲除小鼠随机分为运动干预组和对照组.运动干预组给予长期中等负荷耐力跑台运动干预32周；一般对照组未予以特殊干预.实验结束后评估两组小鼠冠状动脉主干的动脉粥样硬化病理形态学改变程度,采用荧光免疫组化法测定冠状动脉主干的超氧化物阴离子、CD40L的表达、实时PCR的方法测定NF-κB、MCP-1mRNA的表达.结果:一般对照组冠状动脉粥样硬化进展显著；长期中等负荷耐力运动组冠状动脉粥样硬化程度显著下降、冠状动脉主干狭窄率较对照组显著下降(33.3±5.66％vs 48.3±5.91％,P＜0.01)、冠状动脉主干超氧化物阴离子显著低于对照组(2.17±0.69 vs 3.70±0.51,P＜0.01),CD40L的表达均显著低于对照组(1.97±0.41 vs 2.47±0.35,P＜0.01),并且NF-κB、ICAM-1、MCP-1 mRNA的表达也显著低于对照组.结论:长期中等负荷耐力运动可显著下调Apo E基因敲除小鼠冠状动脉超氧化物阴离子与CD40L的表达,减轻炎症浸润并延缓冠状动脉粥样硬化的进展.
关键词： 耐力运动 载脂蛋白E基因敲除小鼠 动脉粥样硬化 超氧化物阴离子 核因子-κB -
生长素对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块与炎症因子的影响
目的 观察生长素对载脂蛋白E基因敲除(ApoE/-)小鼠血浆白细胞介素8(IL-8)、单核细胞趋化因子1(MCP 1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和血管壁核转录因子κBp65(NFκBp65)表达及动脉粥样斑块的影响.方法 8周龄雄性ApoE 小鼠12只饲以西方类型膳食12周建立动脉粥样硬化模型,遗传背景相同的6只8周龄雄性C57BL/6J小鼠饲以同类型膳食作对照.第8周时模型组分为腹腔内注射生长素(100 μg/kg)组(n=6)和注射生理盐水(0.1 mL)组(n=6),C57BL/6J小鼠亦给予生理盐水(0.1 mi)腹腔内注射.第12周时眼眶取血,分离血浆,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL 8、MCP-1、TNF-α水平.取小鼠主动脉进行苏丹Ⅳ染色,观察主动脉粥样硬化病变面积占主动脉内膜面积的比例,行主动脉窦HE及油红O染色,观察主动脉窦动脉粥样斑块面积占管腔总面积的比例,行主动脉免疫组化染色,观察NFκBp65的表达.结果 与C57BL/6J小鼠比较,ApoE 小鼠和ApoE +生长素小鼠总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇高[(6.7±0.5),(7.6±2.0)比(5.5±0.2)mmol/L,(5.6±0.3),(6.0±0.5)比(2.2±0.1)mmol/L,均P＜0.05],ApoE--/-+生长素小鼠高密度脂蛋白胆固醇比ApoE-/-组高[(0.5±0.1)比(0.3±0.1) mmol/L,P＜0.05].与C57BL/6J小鼠比较,ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化病变面积占主动脉内膜面积比例增加[(15.1±1.7)％比0],ApoE +生长素小鼠主动脉粥样病变面积占主动脉内膜面积比例较ApoE-/-小鼠降低[(10.1±0.5)％比(15.1±1.7)％,P＜0.05];C56BL/6J小鼠主动脉窦无动脉斑块形成(0％),ApoE-/-组和ApoE-+生长素组均有动脉斑块形成,但ApoE +生长素组小鼠主动脉窦斑块面积占管腔总面积的比例较ApoE-组低[(22.6±2.2)％比(32.4±3.2)％,P＜0.01].ApoE-/-小鼠TNF α、IL8和MCP-1水平较C57BL/6J小鼠增高[分别为(24.5±1.7)比(10.1±0.5)ng/L,(33.5±16.7)比(16.8±8.8)ng/L,(78.0±5.6)比(13.5±1.8)ng/L;均P＜0.05],ApoE +生长素组TNF-α、IL-8和MCP-1水平较ApoE-/-组降低[分别为(15.5±1.0)比(24.5±1.7)ng/L,(22.0±1.2)比(33.5±16.7)ng/L,(45.5±4.5)比(78.0±5.6) ng/L;均P＜0.05].ApoE-/-小鼠血管壁NF-κBp65表达较C57BL/6J增高,ApoE 小鼠+生长素组血管壁NF-κBp65表达较ApoE 小鼠组降低(P＜0.05).结论 生长素通过抑制炎症反应减少ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块形成.
关键词： 生长素 动脉粥样硬化斑块 炎症因子 载脂蛋白E基因敲除小鼠 -
肾脏局部肾素血管紧张素系统激活在载脂蛋白E基因敲除小鼠脂质肾损伤中的作用
目的 探讨肾脏局部肾素血管紧张素系统(RAS)激活在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠高脂介导的肾损伤中的作用.方法 将16只8周龄雄性ApoE-/-小鼠适应性喂养1周后随机分为高脂饮食组(n=8)和普通饮食对照组(n=8),8周后处死小鼠收集血浆标本及肾脏组织标本,放射免疫法检测血浆前肾素、肾素、血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,临床生化试剂盒检测血浆脂质谱,HE和Masson染色评估肾脏炎症细胞浸润及胞外基质堆积,免疫组化及Western blot法检测肾脏组织内RAS成分、上皮细胞间充质转分化(EMT)标记蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并评估高血脂症、肾脏局部RAS水平与肾脏损伤的相关性.结果 与对照组比较,高脂饮食组小鼠血脂水平明显升高[三酰甘油(7.5±2.0)比(3.1±0.6)mmol/L;总胆固醇(27.8±4.0)比(13.7±2.7)mol/L；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) (11.6±3.0)比(5.8±1.5) mmol/L,均P＜0.05],伴有肾小管间质胞外基质堆积增多.血浆肾素、Ang Ⅰ及AngⅡ水平两组间差异无统计学意义,但高脂饮食组血浆前肾素水平明显低于对照组[(1108.6±55.2)比(1881.3±180.4) μg/(L·h),P＜0.05].免疫组化及Western blot检测均示肾脏局部RAS成分表达升高.局部AngⅡ水平与血浆总胆固醇、三酰甘油和LDL-C水平呈正相关(分别r=0.709、0.758、0.806,均P＜0.05),血管紧张素原、AngⅡ、肾素、AngⅡ1型受体(AT1 R)和AngⅡ2型受体(AT2 R)水平与E-cadherin表达呈负相关(分别r=-0.723、-0.772、-0.754、-0.821、-0.851,均P＜0.05),并与α-SMA呈正相关(分别r=0.636、0.842、0.600、0.842、0.770,均P＜0.05).结论 高血脂症可诱导EMT、肾小管间质纤维化和促进肾损伤进展,并与肾脏局部RAS激活有关.
关键词： 高血脂症 肾素血管紧张素系统 肾损伤 载脂蛋白E基因敲除小鼠 -
抗血小板药物与阻断CD40信号对动脉粥样硬化的影响
目的:探讨抗血小板药物、抗CD40L(CD40配体)抗体及合用对动脉粥样硬化的影响.方法:雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型对照组(n=10)、抗血小板药物组(n=10,阿司匹林+氯吡格雷)、抗CD40L抗体组(n=8,抗CD40L抗体)、合用组(n=9,阿司匹林+氯吡格雷+抗CD40L抗体).并取与载脂蛋白E基因敲除小鼠有相同遗传背景的健康雄性近交系C57BL/6小鼠6只作为正常对照组.测血脂、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)浓度.观察主动脉组织病理形态学改变,免疫组织化学法测定斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞百分率.Western杂交分析测定基质金属蛋白酶-9的蛋白表达.结果:抗血小板药物及抗CD40L抗体治疗可明显降低sVCAM-1和sICAM-1浓度(P＜0.01),减轻动脉粥样硬化病变,减少斑块部位巨噬细胞,增加平滑肌细胞数量(P＜0.01),对血脂无影响(P＞0.05),合用则作用增强(P＜0.05).抗CD40L抗体可降低基质金属蛋白酶-9的表达(P＜0.01),抗血小板治疗无此作用.结论:抗血小板治疗及阻断CD40信号可抑制炎症反应,减轻动脉粥样硬化病变,稳定斑块,对血脂无影响,联合治疗有协同作用.
关键词： 动脉粥样硬化 CD40-CD40配体 阿司匹林 氯吡格雷 载脂蛋白E基因敲除小鼠 -
耐力训练对动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠主动脉NF-κB和MMP-9表达的影响
目的:探讨耐力训练对动脉粥样硬化(AS)载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉核因子-κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及其在抗AS中的作用.方法:36只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为14周AS模型组(H组)、26周AS模型组(HH组)、14周造模+12周运动干预组(HE组),每组12只,均饲以高脂膳食饲料.HE组小鼠经14周高脂饲养形成AS后,开始在活动跑台上进行12周耐力训练(13 m/min,60min/次,每周5次).另选取12只8周龄C57BL/6J小鼠作为对照组(N组),饲以标准饲料.制备主动脉根部冰冻切片,行HE染色观察主动脉病理变化,行原位杂交法测定主动脉NF-κB mRNA表达,行免疫组化法测定主动脉NF-κBp65及MMP-9蛋白表达,其表达量用阳性细胞%表示.结果:①14周高脂膳食后H组小鼠发生AS:HH组较H组病变加重,而HE组较HH组病变减轻.②HH组小鼠主动脉NF-κB mRNA及NF-κBp65阳性细胞%均显著高于N组,而HE组显著低于HH组(P<0.01).③HH组小鼠主动脉MMP-9阳性细胞%显著高于N组,而HE组显著低于HH组(P<0.01).结论:耐力训练降低AS小鼠主动脉NF-κB表达和MMP-9表达,发挥抗AS作用,可能是运动防治AS的机制之一.
关键词： 动脉粥样硬化 耐力训练 载脂蛋白E基因敲除小鼠 核因子-κB 基质金属蛋白酶-9 -
MicroRNA-29b在动脉粥样硬化血管中的表达
目的 应用荧光定量PCR技术分析MicroRNA-29b(miR-29b)在Apo-E基因敲除小鼠的动脉粥样硬化(atherosclerosis)模型斑块血管中的表达情况,探讨miR-29b在动脉粥样硬化发生、发展过程中的作用.方法 8只5周龄、雄性SPF级载脂蛋白E基因敲除小鼠(C57BL/6J-ApoE-/-,apolipoprotein E-deficient mice)为实验组(FS组).8只雄性、SPF级、相同周龄的C57BL/6J小鼠为对照组(NS组).高脂(1%胆固醇+15%猪油)喂食15、20周龄取材检测.结果 FS组和NS组体重 [(29.10±2.53)g和(33.20±5.18)g] 无明显差异(P ＞ 0.05);FS组较NS组血清总胆固醇[(13.52±1.58)mmol/L和(2.12±0.35)mmol/L]显著增高(P ＜ 0.01);FS组主动脉出现典型的无动脉粥样硬化斑块;NS组主动脉管壁正常,无动脉粥样硬化斑块;FS组主动脉弓miR-29b的表达较NS组[平均吸光度值:(2.10±0.27)和(17.56±1.07)]明显降低(P < 0.01).结论 在高脂喂食的载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中,miR-29低表达可能与动脉粥样硬化斑块的形成有关.
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大黄素对ApoE基因敲除小鼠脂肪棕色化的影响
目的 观察大黄素(emodin)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠脂肪棕色化的影响,从而探讨其改善高脂血等血瘀状态的作用机制.方法 雄性8周龄ApoE-/-小鼠高脂饮食12周后,随机分为3组,模型组、辛伐他汀5.7 mg/kg组、大黄素80 mg/kg组;同周龄雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组,给予基础饲料喂养.各组小鼠按剂量分别灌胃相应药物或者饮用水干预18周.检测指标包括体重(body weight,BW)、腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue,iWAT)重量、棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)重量、血脂、心功能、iWAT病理特征,以及解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的iWAT原位表达.结果 大黄素可显著降低小鼠体重(P<0.05)、iWAT重量/体重比值(P<0.05)及血清中TC、TG含量(P<0.05),增加BAT重量/体重比值(P<0.05)及心脏的射血分数(ejection fraction,EF)、短轴缩短率(fractional shortening,FS)(P<0.01);HE染色结果显示,iWAT细胞出现多室,细胞变小、变圆,组织更加致密;免疫组化结果显示,iWAT中UCP1蛋白阳性表达的平均光密度(average optical density,AOD)显著增加(P<0.01).结论 大黄素能促进ApoE-/-小鼠腹股沟白色脂肪组织棕色化及减少白色脂肪堆积改善高脂血症状,可能与其逐瘀作用有关.
关键词： 大黄素 载脂蛋白E基因敲除小鼠 白色脂肪 棕色脂肪 -
基质金属蛋白酶3在小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达
目的:研究基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)在小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达,分析其与动脉粥样硬化斑块的关系.方法:21只28周龄载脂蛋白E基因(apolipoprotein E,ApoE)敲除小鼠随机分成对照组(7只),阿托伐他汀钙组(7只),麝香保心丸组(7只),均给予高脂饮食,喂养12周后检测血清MMP-3,并分离各组小鼠颈动脉,通过免疫组化分析斑块内MMP-3的表达.结果:与对照组比较,阿托伐他汀钙组血清MMP-3降低(P＜0.01),麝香保心丸组血清MMP-3降低不明显.两组均能降低斑块内MMP-3的表达,且有统计学意义(P＜0.05).结论:动脉粥样硬化发展过程中,MMP-3起到重要作用,阿托伐他汀钙和麝香保心丸的治疗可减少斑块内胞外基质的降解,具有稳定斑块的作用.
关键词： 颈动脉粥样硬化 基质金属蛋白酶3 载脂蛋白E基因敲除小鼠 -
奥美沙坦酯对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响
目的 探讨奥美沙坦酯对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化病变的抑制作用及可能机制.方法 16只6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为动脉粥样硬化模型组和干预组,干预组在高脂饲料喂养同时予以奥美沙坦酯(10 mg·kg-1·day-1)灌胃治疗.8只C57BL/6小鼠为对照组,给予普通饲料.12周后行血压、血脂测定;主动脉油红“O”染色、苏木素-伊红(HE)染色、Elastica van Gieson's (EVG)染色、苦味酸-天狼猩红(PSR)染色分别观察斑块面积、斑块形态、弹性纤维及胶原蛋白含量;免疫组织化学方法检测斑块内组织蛋白酶S (CatS)、a平滑肌肌动蛋白(ASMA)、巨噬细胞表面分子-3(Mac-3)表达.结果 模型组总胆固醇、低密度脂蛋白水平均高于对照组[(15.08±1.64)比(2.06 ±0.15) mmol/L、(15.60±1.05)比(0.00±0.00) mmol/L](均P＜0.01),三酰甘油水平与对照组相比差异无统计学意义.模型组主动脉组织内可见明显动脉粥样硬化斑块形成,Cat S、ASMA及Mac-3表达均高于对照组.干预组血压、血脂水平与模型组相比差异无统计学意义,但主动脉粥样斑块面积明显减少(P＜0.05),Cat S、Mac-3的表达低于模型组[(2.4±1.2)％比(8.8±3.2)％、(2.2±1.2)％比(7.2±2.8)％](均P＜0.01),而胶原蛋白、弹性纤维含量及ASMA的表达均多于模型组(P＜0.05).结论 奥美沙坦酯可以抑制动脉粥样硬化病变形成,其机制可能与抑制斑块中Cat S的表达和炎症反应,增加其弹性纤维和胶原蛋白含量有关.
关键词： 奥美沙坦酯 载脂蛋白E基因敲除小鼠 斑块 组织蛋白酶S -
丹酚酸B对ApoE小鼠糖尿病动脉粥样硬化治疗作用
[目的] 观察丹酚酸B对ApoE小鼠糖尿病动脉粥样硬化的治疗作用.[方法]将8周龄ApoE小鼠腹腔注射链脲佐菌素200 mg/kg并高脂喂养12周,糖尿病动脉粥样硬化模型成功后,随机分为模型组、丹酚酸B组与洛伐他汀组.丹酚酸B组灌服丹酚酸B160 mg/kg,洛伐他汀组灌以洛伐他汀2.3 mg/kg,模型组灌服等量生理盐水.连续灌胃8周后.处死,取主动脉做形态学观察及图像分析.[结果]模型组动脉粥样硬化病变显著,多为粥样硬化期病灶,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变,也可见由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶.丹酚酸B组与洛伐他汀组动脉粥样硬化病变较模型组明显减轻,多为早期粥样硬化,斑块面积显著小于模型组(P＜0.05).[结论]提示丹酚酸B有减轻ApoE小鼠糖尿病动脉粥样硬化作用.
关键词： 丹酚酸B 载脂蛋白E基因敲除小鼠 糖尿病动脉粥样硬化 -
软脉降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的实验研究
目的观察软脉降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE)高脂血症及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响.方法6周龄ApoE小鼠,随机分为高脂血症组与软脉降脂胶囊大、中、小剂量组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠作为正常对照组.软脉降脂胶囊组灌服其生药,高脂血症组、正常对照组均灌服生理盐水.连续灌胃24周后,下腔静脉取血测血脂;取主动脉做形态学观察及图像分析.结果高脂血症组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)明显高于正常对照组(P＜0.05),软脉降脂胶囊组明显低于高脂血症组(P＜0.05);图像分析测量结果显示高脂血症组AS病变显著,与正常对照组比较斑块总面积明显增加(P＜0.01);软脉降脂胶囊组AS病变较高脂血症纽明显减轻,斑块总面积明显减小(P＜0.01).结论软脉降脂胶囊可降低ApoE小鼠血清TC、TG、LDL-C含量,有对抗动脉粥样硬化斑块形成的作用.
关键词： 载脂蛋白E基因敲除小鼠 软脉降脂胶囊 高脂血症 动脉粥样硬化 图像分析 -
构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察
背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近，是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。
目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程，探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。
方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠，随机分为2组，分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8，12，16，20，24周。
结果与结论：血清学指标检测显示，不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示，高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性，此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P <0.05)，小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明，实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠，此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 -
丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路变化研究
目的:通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/血清核因子-κB (NF-κB)/视黄醇结合蛋白(RBP4)信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制.方法:将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A(30 mg/kg),空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4％多聚甲醛和-80℃冰箱.Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κB、RBP4基因表达情况.结果:与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.05),HDL-C水平显著降低(P＜0.05);主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κB、RBP4基因mRNA水平显著升高(P＜0.05).与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05),HDL-C水平显著升高(P＜0.05);主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κB、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κB、RBP4基因mRNA水平显著降低(P＜0.05).结论:丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κB/RBP4信号通路调控有关.
关键词： 丹参酮Ⅱ A 动脉粥样硬化 炎症反应 载脂蛋白E基因敲除小鼠 -
MMP-9在ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块的表达及高脂饮食影响
目的 研究基质金属蛋白酶9(MMP-9)在载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除C57BL/6J小鼠[ApoE(-/-)]主动脉粥样硬化斑块中的表达及高脂饮食对其影响,分析其与动脉粥样硬化不稳定斑块的关系.方法 16只30周龄APE(-/-)小鼠,随机分成高脂饮食组[Ch-ApoE(-/-)]和普通饮食组[ApoE(-/-)],8只正常C57BL/6J小鼠为对照组予高脂饮食,喂养4个月后分离主动脉.HE、Masson三色法染色观察小鼠主动脉粥样斑块,免疫组织化学分析斑块内MMP-9及巨噬细胞的表达.结果 两组ApoE(-/-)均有明显的动脉粥样硬化,为不稳定斑块,斑块内巨噬细胞表达过量,且MMP-9表达增强.Ch-ApoE(-/-)组动脉硬化及MMP-9表达强于ApoE(-/-)组,两者有统计学意义.结论 动脉粥样硬化不稳定斑块与MMP-9的表达密切相关,高脂饮食可加重不稳定斑块.
关键词： 动脉粥样硬化 基质金属蛋白酶9 载脂蛋白E基因敲除小鼠 高脂饮食
