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带血管蒂周围神经在联合移植修复脊髓损伤中的作用
目的：探讨带血管蒂周围神经促进胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤的能力。方法：成鼠胸段脊髓损伤后，分别移植带血管蒂正中神经(VPN组)、孕14天胚胎脊髓(FSC组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V+F组)。术后8周行组织学及电生理检查。结果：V+F组移植神经与脊髓连接紧密，有较多新生轴突长入，雪旺氏细胞大量存活和增殖，神经丝蛋白、100％饱和硫蛋白阳性反应均明显高于VPN组(P＜0.01)；胚胎移植物与受体融合佳，体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于FSC组(P＜0.01)，大部分细胞分化较好，突触较成熟；SEP检查示P1、N1波波伏期显著缩短(P＜0.01)。结论：带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，对FSC的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。
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脊髓损伤两种修复方法的比较研究
目的:比较脊髓损伤后两种修复方法的效果.方法:损伤成鼠胸髓左后柱,移植孕14d胚胎脊髓(F组),胚胎脊髓加自体带蒂正中神经(V+F组)及不移植(对照组),观察胚胎脊髓的生长、分化情况及对宿主的修复能力.结果:V+F组胚胎脊髓体积增长速度、神经纤维数量和神经元密度显著高于F组(P＜0.01),细胞分化较好,突触较成熟,界面区无明显的胶质增生.V+F组SEP的P1、N1波潜伏期显著缩短(P＜0.01).结论:联合移植比单纯胚胎脊髓移植更有利于脊髓损伤的修复.
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不同方法移植胚胎脊髓促进成鼠损伤脊髓功能恢复的研究
目的:研究提供血运的胚胎脊髓移植对成鼠损伤脊髓功能恢复的作用.方法:将成年Wistar大鼠作成脊髓半切洞损伤模型,应用单纯胚胎脊髓组织、胚胎脊髓+大网膜组织、胚胎脊髓+椎旁肌组织移植到半切洞损伤的脊髓中,手术后1、2、4、12周进行联合行为评分、感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查,并与正常组及单纯损伤组比较.结果:联合行为评分,单纯移植组和胚胎脊髓+大网膜组织移植组优于单纯损伤组,SEP和MEP潜峰时的恢复,移植各组均优于单纯损伤组,以胚胎脊髓+大网膜组织移植组效果好,单纯胚胎脊髓移植组优于胚胎脊髓+椎旁肌移植组.结论:提供血运的胚胎脊髓移植对成鼠损伤脊髓功能恢复有较好的促进作用.
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深低温保存大鼠胚胎脊髓组织:以细胞核质比例评价细胞形态和存活率的变化
目的:胚胎细胞脊髓内移植是判定冻存细胞直接的证据.通过计算机图像处理系统判定细胞核质比例,以观察经深低温保存后大鼠胚胎脊髓细胞形态和存活率的变化.方法:实验于2004-12/2005-03在承德医学院临床技能实验室完成.剖腹取胎龄14 d Wistar大鼠的胎鼠,分离胚胎脊髓,剪成1 mm3的小块.将DMEM细胞培养液70 mL、大鼠灭活血清20 mL、DMSO 10 mL混合制成冻存液.取冻存管,加入冻存液10mL,并将剪好的胚胎脊髓组织10～20块放入其中,封口.放于冰箱中逐步降温保存,后置于液氮中保存.胚胎脊髓在液氮中保存15 d后,取出冻存管,放入37℃恒温水浴槽中快速复温,待完全融化后,以3 000 r/min离心3min,弃去上清液,再加入等量DMEM细胞培养液,静置3 min,冲洗,并植入正常大鼠脊髓内.以台盼蓝拒染率测定深低温保存前和深低温保存后胚胎脊髓组织细胞存活率,着色的为死亡细胞、不着色的为存活细胞.算出细胞存活率和核质比例.4周后应用免疫组化法检测受体大鼠移植段脊髓.结果:①经低温保存的胚胎脊髓细胞存活率低于未经低温保存组[(64.78±6.14)%,(50.07±7.58)%,P＜0.01];两组的存活细胞形态和核质比无明显改变.②移植后4周,有1只大鼠因感染死亡.镜下观察移植大鼠脊髓组织均可见移植物存活,存活移植物与受体脊髓组织融合良好,移植区边缘均有少量宿主神经细胞空泡变性,2只因移植物与受体之间存在裂隙,只有部分融合,无明显胶质瘢痕,1只移植区外偶见局限淋巴细胞浸润.③免疫组化检测显示,在移植区内可见少量的5羟色胺及神经丝阳性细胞和纤维,在损伤腔边缘部可见大量来自宿主的5-羟色胺阳性纤维进入移植区,移植区周边的纤维较中央部位纤维粗大.结论:经过深低温保存大鼠胚胎脊髓组织保持了原有的细胞形态,并能够在异体脊髓内存活,并与宿主融合良好,保持了原有的活性.
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胚胎脊髓对损伤脊髓的修复作用研究
目的探讨不同条件下胚胎脊髓移值修复成鼠急性脊髓损伤 (SCI)的能力。方法成鼠胸髓损伤后分别移植孕 14d胚胎脊髓 (FSC组 )、游离正中神经加胚胎脊髓 (P＋ F组 )、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓 (V＋ F组 )，术后 8周行组织学检查。结果 V＋ F组胚胎脊髓与受体融合佳，体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于 P＋ F、 FSC组（P<0.01），细胞分化比较好，突触较成熟，界面区也无明显的胶质增生。结论带血管蒂周围胚胎脊髓联合移植，对FSC的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。
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胚胎脊髓移植联合神经生长因子对大鼠脊髓完全横断修复的作用
目的观察胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子(NGF)对大鼠脊髓完全横断损伤的修复能力.方法40只Wistar雌性大鼠脊髓横断后,随即分成单纯应用完整胚胎脊髓移植组(A组),完整胚胎移植联合应用NGF组(B组).术后观察大鼠行为学变化,术后8 w处死动物进行免疫组化检查.结果移植胎体脊髓组织在脊髓横断部位存活.结论完整胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子对大鼠脊髓完全横断损伤具有明显的治疗修复作用.
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人胚嗅鞘细胞与胚胎脊髓组织联合移植对大鼠脊髓损伤的治疗作用
目的 探讨人胚嗅鞘细胞(OECS)和大鼠胚胎脊髓组织(ESC)联合移植在促进大鼠横断脊髓轴索再生方面有无协同作用.方法 将体外培养纯化的OECS及新鲜获取的胎鼠脊髓组织用作治疗大鼠脊髓半切洞损伤模型的移植物,通过对动物定期进行行为学评定,结合病理学观察,并通过辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺(HRP-TMB)逆行示踪技术,评价OECS和ESC对神经元存活、纤维再生的影响.结果 OECS和ESC联合移植对损伤脊髓具有明显保护作用并能促进宿主脊髓轴突再生,ESC不能帮助再生轴索返回宿主组织;而OECS除能帮助再生轴索突破胶质屏障外更能使再生轴突髓鞘化,并具有一定的迁移能力.结论 OECS和ESC联合移植在促进大鼠脊髓功能恢复中起到了互补和协同的作用.
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胚胎脊髓移植兼用神经生长因子促进成年大鼠损伤脊髓功能恢复的研究
目的 研究胚胎脊髓(FSC)移植兼用神经生长因子(NGF)对损伤脊髓的修复作用.方法 用改良Allen打击法制作脊髓损伤动物模型.将实验动物分为4组:A组:单纯脊髓损伤组;B组:脊髓损伤+NGF组;C组:脊髓损伤+移植FSC组;D组:脊髓损伤+移植FSC+NGF组.手术后应用行为学、组织形态学观察损伤脊髓功能恢复情况;应用Nissl染色方法观察脊髓神经元的大小;采用计算机图像分析技术进行定量分析.结果 脊髓胚胎移植可以在宿主脊髓中存活、发育、生长、分化并形成神经连接,促进损伤脊髓功能恢复.神经生长因子可以防止成年大鼠脊髓轴突损伤引起的神经元萎缩.CBS评分、图像分析显示对脊髓损伤功能恢复的作用,B、C、D组好于A组,B、C组间无显著差异,D组效果好.FSC移植与运用外源性NGF对于促进成鼠损伤脊髓功能恢复具有协同效应.结论 胚胎脊髓移植兼用神经生长因子能维持神经元的细胞形态,对成年大鼠损伤脊髓功能恢复有促进作用.
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组织工程支架修复脊髓损伤的研究进展
脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是骨科领域致残率、死亡率高的创伤之一,人们不断努力探索神经元轴突再生机制,试图找到有效的治疗方法.目前,治疗SCI的主要策略有:挽救受损神经元,减少其发生迟发性损伤和凋亡;应用刺激神经生长的因子和/或阻断抑制轴突生长和延伸物质的作用,促进受损轴突的再生;组织或细胞(外周神经、胚胎脊髓、神经干细胞、神经胶质细胞等)移植诱导轴突再生和细胞分化.他们对修复SCI起到了很大作用,但尚无根本突破.近年来,运用组织工程支架修复SCI的新思路已日益受到人们重视.
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大鼠胚胎脊髓移植后增加损伤脊髓生长抑素mRNA的表达
[目的]研究大鼠胚胎脊髓移植后是否能够影响生长抑素(S0M)mRNA的表达.[方法]将动物分为单纯半切洞损伤组(A组)、胚胎脊髓移植组(B组).术后1、3、7、14、28 d,采用原位杂交方法观察SOM mRNA的表达,采用计算机图像分析技术,进行定量分析.[结果]胚胎脊髓移植组S0M mRNA蛋白表达明显多于单损伤组.[结论]作者的研究表明胚胎脊髓移植后可使损伤脊髓SOM mRNA表达增多.
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体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响
目的:探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子(AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响.方法 :将动物分为:大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组(A组),大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组(B组),脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组(C组)大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组(D组).手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测(TUNEL)以及Bcl-2蛋白表达的测定(免疫组化法).采用计算机图像分析技术,进行定量分析.结果:A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势.结论:大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡.
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胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的超微结构及电生理研究
目的:对胚胎脊髓移植修复周围神经缺损进行可行性研究.方法:手术造成双侧坐骨神经缺损,左侧选用胎兔脊髓桥接,右侧为自体神经桥接.术后1、2、3个月肌电图测双侧胫前肌运动神经传导速度(NCV)、运动神经末端潜伏期(Lat)及运动神经电位波幅(Amp);取移植段组织标本在电子显微镜下观察.结果:两侧的Ncv、Lat及Amp值无显著差异(P>0.05).三组的胚胎脊髓移植段均可见大量的正常神经纤维,其轴突直径、髓鞘厚度与对照侧无显著差异(P>0.05).结论:胚胎脊髓移植修复周围神经缺损是可行的.
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不同的组织移植到宿主脊髓组织病理学观察
目的:研究胚胎脊髓,肋间神经,大网膜,椎旁肌移植到宿主脊髓后发育过程中形态变化.方法:应用脊髓半切洞模型,移植后1,2,4,12周,进行HE、Nissl、嗜银染色和电镜检查,观察移植物存活、分化及其与宿主之间的关系.结果:胚胎脊髓移植到损伤的脊髓后,可在宿主脊髓内继续分化发育,与宿主脊髓形成部分纤维连接;肋间神经移植后,可能通过存活的雪旺氏细胞与宿主脊髓建立一定的结构联系;带蒂的大网膜移植后,可与宿主脊髓形成血管连接;带蒂的椎旁肌移植终形成瘢痕组织.结论:胚胎脊髓组织能较好地修复损伤的脊髓.
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自体和异体神经组织联合移植修复脊髓损伤的实验研究
目的:探讨神经组织联合移植对成鼠急性脊髓损伤的修复能力.方法:成年雌性Wistar鼠36只随机分为3组,损伤T1～3脊髓左后柱,移植孕14d胚胎脊髓(FSC 组15只)或带血管正中神经加胚胎脊髓(V+F 组15只),另6只做对照组.术后8周行体感诱发电位、光、电镜和免疫组化检查.结果:V+F组胚胎组织体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于FSC组(P＜0.01),细胞大多分化较好,有少数类似运动神经元,突触较成熟.界面区无明显胶质增生,SEP示P1、N1波潜伏期显著缩短(P＜0.01).结论:带血管周围神经与胚胎脊髓联合移植优于单一移植物,对胚胎脊髓的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有促进作用.
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胚胎脊髓不同移植方法对大鼠损伤脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体的影响
创伤后一个重要的继发性损伤是释放兴奋性氨基酸(EAA),随后作用于N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR).
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实验性大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓细胞凋亡的影响
目的探讨胚胎脊髓移植对脊髓损伤(SCI)后细胞凋亡的影响.方法将实验动物分为损伤对照组(A组),损伤后胚胎脊髓移植组(B组),移植后10周,对SCI区的脊髓切片组织进行细胞凋亡的检测(TUNEL)以及BCL-2蛋白阳性表达的测定(免疫组化法).结果两组中均发现凋亡细胞及BCL-2蛋白阳性表达,细胞凋亡率为A>B,BCL-2蛋白阳性表达A
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新生鼠和成年鼠脊髓损伤后胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓功能恢复的影响
目的研究新生鼠和成年鼠脊髓损伤后胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓功能恢复的影响.方法将新生鼠和成年鼠腰段脊髓半切洞损伤,取E14胚胎脊髓组织移植到损伤区,手术后4、8、12周,进行组织学检查,联合行为评分,感觉诱发电位,运动诱发电位检查.结果组织学检查发现移植的胚胎脊髓在宿主脊髓中存活.联合行为评分,感觉诱发电位,运动诱发电位潜峰时的恢复,新生鼠移植组均优于成鼠移植组(P<0.05).结论通过各种功能检查(CBS,SEP,MEP)表明胚胎脊髓移植能够促进脊髓损伤后新生鼠和成鼠运动功能的恢复.
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胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的超微结构研究
目的:探讨胚胎脊髓移植修复周围神经缺损的超微结构.方法:取家兔4只,手术造成双侧坐骨神经缺损,左侧选用胎兔脊髓桥接,右侧为自体神经桥接.分别于术后1,2,3个月取移植段组织标本在透射电子显微镜下观察.结果:3组的胚胎脊髓移植段均可见大量的正常神经纤维,其轴突直径、髓鞘厚度与对照侧无显著性差异(P＞0.05).结论:胚胎脊髓移植修复周围神经缺损是可行的.
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神经组织联合移植修复成鼠脊髓损伤模型的建立
目的 建立带血管周围神经与胚胎脊髓联合移植修复成鼠脊髓损伤模型。方法 成鼠胸髓左后柱损伤后，先用自体带血管正中神经转位移植，使神经与脊髓间形成一间隙，再植入胚胎脊髓，观察其生长、发育和分化情况。结果 术后8周，有60%的动物存活。胚胎脊髓存活率为100%，体积增长378%。结论 该模型操作简便，动物存活率较高，能充分保证胚胎脊髓的存活、生长和发育，在脊髓损伤修复研究方面有较好应用前景。
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胚胎脊髓提取液对神经干细胞分化发育的影响
目的 观察胚胎脊髓提取液(fetal spinal cord extracts,FE)对神经干细胞(neural stem cells,NSC)分化的影响并探讨其机制.方法 制备FE加入NSC培养体系中诱导分化,分别于分化后第3、7天进行免疫荧光细胞化学鉴定,观察分化细胞表型并计算神经元样细胞所占的比例.结果 两组均可观察到神经元,实验组所占比例较高,可达23.39%,明显多于对照组(P＜0.01).两组GFAP阳性星形胶质细胞分化已经比较成熟,也可检测出MBP阳性少突胶质细胞.结论 FE通过提供胚胎脊髓源性神经营养因子、各种细胞因子和细胞外基质,支持NSC成活并诱导其分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,且神经元的分化比例达到23.39%.
