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脱细胞神经基质材料在周围神经修复中的研究进展
脱细胞神经基质是天然的神经支架结构，即采用适当方法去除同种异体(或异种)神经中的细胞及髓鞘成分，保留各层神经膜性结构支架。脱细胞基质构建的人工神经具有以下特性：可接纳神经轴突长入，对轴突再生起机械引导作用，残留部分生物活性因子。各种物理方法尽管取得一定的效果，但均无法清除细胞和髓鞘崩解产物，也即无法根本上降低移植物的抗原性，从而制约了这些方法的应用。应用三硝基甲苯X -100和脱氧胆酸钠溶液脱细胞较为彻底。既往研究表明，脱细胞神经进行宿主再细胞化后进行异体神经移植修复大鼠周围神经较短缺损，效果与不进行宿主再细胞化的脱细胞神经无显著性差异。在修复较短缺损(<3 cm)时，可能再细胞化意义不大，修复较长缺损(>3 cm)时，再细胞化可能会弥补宿主细胞迁移能力的不足。建立标准化、可普遍接受的动物实验研究模式非常必要。选择大动物为实验对象，力求尽可能接近人体生理功能；建立对损伤和修复效果的评估标准，获得大量有效、可靠的实验数据，将使实验研究成果更具实际意义和临床应用价值。
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冷冻异体神经移植中宿主局部应用转化生长因子β1质粒的研究
背景:异体神经移植修复神经缺损,降低免疫排斥反应是关键问题之一,目前主要手段是降低移植神经段的抗原性和全身使用免疫抑制剂.目的:观察经反复冻融处理的冷藏异体神经移植,局部使用转化生长因子β1质粒处理的效果.设计:随机对照动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科.材料:实验于2003-01/2004-12在华中科技大学同济医学院完成,选择健康成年不同窝的Wistar大鼠40只,随机分为实验组和对照组,每组各20只.方法:制备转化生长因子β1质粒及冷冻的异体坐骨神经.实验组和对照组大鼠将坐骨神经在梨状肌孔下0.5 cm处,切除2.0 cm,神经缺损用预制冷冻的异体神经2.0 cm移植修复,实验组局部肌肉及神经两断端注射转化生长因子β1质粒,对照组注射等量的生理盐水.分别于6,12周各组10只大鼠取材、切片、染色并进行轴索计数和统计学分析.结果:在实验过程中无动物死亡,均进入结果分析.6周时对照组神经移植段轴索间有轻度水肿,实验组轴索间基本无水肿,再生神经数量接近正常;12周时,实验组整个神经移植段基本被再生轴突充满,有髓纤维排列整齐,轴突和髓鞘发育良好,实验组再生轴突数显著高于对照组,差别具有极显著性[(98.6±4.8),(75.8±5.1)个/μm2,t=2.962,P＜0.01].结论:反复冻融冷藏保存可降低异体神经的抗原性,具有修复神经缺损的可能性.局部使用转化生长因子β1质粒,可在局部发挥免疫抑制作用,降低宿主的免疫排斥反应.
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放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响
目的探索放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响.方法将18只SD大白鼠随机均分为三组:自体对照组、异体对照组、辐照处理组.应用放射辐照方法处理异体神经后进行移植.术后12周移植神经和胫前肌HE染色,移植神经S-100蛋白及波形蛋白免疫组化和甲苯胺蓝染色,观察其组织学变化和计数单位面积内阳性轴突数和再生的有髓神经纤维数量.结果放射辐照处理后的移植神经,纤维组织增生和炎性细胞浸润较少,胫前肌生长良好,再生有髓神经纤维增多(与异体对照组比较,P＜0.05),单位面积内的阳性轴突数明显增多(P＜0.05).结论放射辐照处理可降低异体神经的抗原性.
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周围神经缺损的基本概念与治疗原则
周围神经缺损的治疗是个古老而又热门的话题,本期发表有关论文5篇,从临床病例的选择与应用、腓肠神经的切取、人工神经的制作及异体神经的移植,多角度地进行了分析与讨论.借此机会,就周围神经的基本概念与存在的问题,提出一些不全面的看法提供大家讨论与修正.
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桡神经浅支移植修复桡神经缺损
目前,研究异体神经和人工神经者较多,而自体神经仍是修复神经缺损理想的移植材料;但供切取移植的皮神经与修复的神经结构功能存在差异,影响了轴束对合、再生和功能的恢复[1].1990年1月～ 2000年2月,我院选用桡神经浅支作移植神经修复上肢桡神经缺损18例,取得了满意的疗效.
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放射辐照对异体神经移植影响的实验研究
目的探索放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响.方法将18只SD大鼠随机均分为三组:自体对照组、异体对照组、辐照处理组.应用放射辐照方法处理异体神经后进行移植.术后12周移植神经和胫前肌HE染色,移植神经S-100蛋白及波形蛋白免疫组化和甲苯胺蓝染色,观察其组织学变化和计数单位面积内阳性轴突数和再生的有髓神经纤维数量.结果放射辐照处理后的移植神经,纤维组织增生和炎性细胞浸润较少,胫前肌生长良好,再生有髓神经纤维增多(与异体对照组比较,P＜0.05),单位面积内的阳性轴突数明显增多(P＜0.05).结论放射辐照处理降低异体神经的抗原性.
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周围神经缺损修复研究进展
周围神经损伤并形成缺损临床上较常见,治疗仍然是临床面临的一个巨大挑战.由于周围神经解剖和功能上的特殊性,其损伤修复是一个复杂的过程,精细的显微外科技术可以较好地恢复神经的连续性,但神经功能的恢复仍不令人满意.近年来,国内外学者始终还在为此进行着不懈的努力,在许多方面取得成就,尤其是异体神经移植已应用于临床.
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异体神经移植的研究进展
在神经移植中,由于自体神经及其替代物均具有不同程度的缺陷,目前在周围神经移植领域,同种异体神经移植是该领域的研究热点.
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甘油处理的同种异体神经在临床的应用
目的寻找一种制作简便,保存方便同时又无明显抗原性,具备完整神经内膜结构,并能长期保留的神经移植物.方法将无菌条件下取得的同种异体神经在37℃条件下,依次在50%、70%、85%的甘油中各浸泡3 h,再分装在盛有85%甘油容器中密封,置于5℃保存6周后备用.结果 10例患者,行甘油处理后的同种异体神经移植14条,长度为2.5～18 cm,术后经过5～42个月的随访观察,获得满意效果.结论同种异体神经通过甘油处理贮存6周后,用于桥接周围神经缺损,有明显效果,是一种值得进一步研究应用的神经移植材料.
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化学脱细胞异体神经对大鼠坐骨神经缺损的修复
目的 观察化学脱细胞异体神经对大鼠坐骨神经缺损的修复效果.方法 成年雄性SD大鼠23只,其中5只取其双侧坐骨神经用于制备脱细胞异体神经,剩余18只随机分为自体神经移植组(A组)和脱细胞异体神经移植组(B组).所有实验动物均建立左侧坐骨神经1 cm缺损模型,暴露右侧坐骨神经作为正常对照.术后分4、8、12周3个时间点分批进行大体观察,检测坐骨神经功能指数(SFI)；术后12周,行肌电图,苏木素-伊红(HE)染色,神经丝蛋白200免疫组织化学和免疫荧光检测.结果 术后两组大鼠伤口愈合良好,移植神经的吻合口光滑且无膨大；各时间点的SFI检测结果(A组-83.7、-63.25、-48.6;B组-86.58、-70.69、-57.43),A组均优于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05)；术后12周,A组小腿三头肌湿重恢复率[A组(66.16±19.58)％,B组(45.20±17.17)％]和峰-峰波幅[A组(8.10±2.74) mV,B组5.34±2.67)mV]大于B组,且差异有统计学意义(P＜0.05)；术后12周,潜伏期[A组(1.80±0.35) ms,B组1.95 ±0.44)ms]和神经传导速度[A组(27.76±9.84)m/s,B组(22.12±5.98) m/s],A组结果均高于B组,但差异无统计学意义(P＞0.05)；苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学观察B组新生的神经纤维与A组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 化学脱细异体神经与自体神经比较,对坐骨神经缺损的修复效果接近.
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含川芎嗪UW液保存不同时间对异体神经再生的影响
目的 探讨在4℃条件下用含川芎嗪的UW液保存不同时间后大鼠异体神经再生的影响,阐明川芎嗪在短期内能促进异体神经再生.方法 取3月龄雄性清洁级成年健康Wistar大鼠56只(受体),体质量200～ 250 g,随机数字表法分为A、A'、B、B'、C、C'、D组,每组8只.取3月龄雄性清洁级成年SD大鼠24只(供体),体质量200～250 g,切取双侧坐骨神经干约15 mm,共取48条神经,经生理盐水冲洗后随机放入24根冻存管中(每根冻存管含2条供体神经),随机分为6组,于4℃条件下,任选3组分别经含川芎嗪的UW液分别保存4、6、12周后,作为实验A、B、C组神经修复供体,剩余3组用不含川芎嗪的UW液分别保存4、6、12周后,作为对照A'、B'、C'组神经修复供体.D组为新鲜自体神经移植组.术后4、8、12周行大体观察,术后12周行电生理检测,光镜、电镜观察神经再生情况.结果 术后12周检测腓肠肌湿质量、电生理情况,A、D两组优于其他组,但D组优于A组,组间有统计学差异(P＜0.05).术后12周移植神经段行HE染色光镜观察结果显示,C组及C'组炎症反应重且空泡变性为明显,D组炎症反应轻,镜下见A、D两组神经纤维排列较规则.术后12周行透射电镜检测结果显示,A、D两组再生的有髓神经纤维较多,并可见少许无髓神经纤维,髓鞘完整,呈同心圆排列,细胞器丰富；B组镜下情况差于A组,C、C'组再生的有髓神经纤维较少,并见结缔组织结构.结论 在4周内保存异体神经,川芎嗪可改善其神经再生效果.
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不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响
目的：观察超深低温（-196℃）条件下不同冷冻时间对异体神经移植后生理特性的影响。方法将80只雌性Wis tar大鼠随机分为取材组（20只），对照组（A组：新鲜自体神经移植组；B组：新鲜异体神经移植组，每组10只）和实验组（按取材神经冷冻保存3、6、9、12周后移植分为C、D、E、F组，每组10只）。术后做大体、光镜、电镜观察，神经电生理测试。结果移植9周后，大体、光镜、电镜结果显示：B组生理特性影响大，A组小，C、D、E、F组次之；电生理结果显示：A与B、A与E、A与F之间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论异体神经移植后的生理特性和冷冻时间存在依从关系。
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冷冻异体神经移植应用转化生长因子β1质粒的研究
目的探讨对经反复冻融处理的冷藏异体神经移植,局部使用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)质粒的效果. 方法健康成年不同窝Wistar大鼠40只随机分为两组,每组20只,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm处切除2.0 cm,神经缺损用预制反复冻融于-196℃冷冻的异体神经2.0 cm移植修复.实验组在局部肌肉及神经两断端注射TGF-β1质粒,对照组注射等量生理盐水.分别于6周和12周对每组10只大鼠取材,切片、染色并进行轴索计数和统计学分析. 结果 6周时实验组轴索间基本无水肿,再生神经数量接近正常;对照组神经移植段轴索间有轻度水肿,再生神经较少.12周时实验组整个神经移植段基本被再生轴突充满,有髓纤维排列整齐,轴突和髓鞘发育良好,再生轴突数为98.6±4.8/μm2;对照组神经纤维排列整齐,轴突和髓鞘发育较实验组差,轴突数为75.8± 5.1/μm2,差异有统计学意义(P<0.01). 结论反复冻融冷藏保存的异体神经其抗原性降低,具有修复神经缺损的可能性.局部使用TGF-β1质粒可发挥免疫抑制作用,降低宿主的免疫排斥反应.
