首页 > 文献资料
-
脱细胞异种(猪)真皮基质临床应用与研究进展
创面处理贯穿烧伤治疗的全过程,皮肤移植是覆盖烧伤创面的重要手段,但严重烧伤常致自体皮源不足.寻找永久的真皮替代品成为研究的热点.1995年Wainwright研制出无细胞真皮基质(ADM)充当永久性真皮替代物并成功应用临床[1].近年来脱细胞异种(猪)真皮在临床开始广泛应用并取得一定成效.本文将就脱细胞异种(猪)真皮基质的临床应用与研究进展作一综述.
-
组织再生 海奥引领:国内首款保留天然胶原成分骨修复材料面世
"既保留了完整的I型胶原蛋白,又保持了骨的天然结构,还能伴随骨改建同步降解,独有的脱细胞、脱脂工艺,利于吸附内源性生长因子,与自体新生骨融合更佳."这款独特的产品是什么?它的面世具有什么样的意义?
-
猪小肠黏膜下层脱细胞支架的制备及组织学评价
目的 评价不同浓度的十二烷基磺酸钠(SDS)处理猪小肠黏膜下层(SIS)的脱细胞效果,筛选佳脱细胞浓度,为组织工程化角膜上皮的制备提供支架材料.方法 配制0.1％、0.2％、0.3％、0.5％ SDS随机分成A、B、C、D4组,分别脱细胞处理SIS 15min、30min、lh、2h(n =20),同时观察SIS的大体形态变化,HE和4,6一二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察脱细胞前后SIS的生物学特性,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析(n=5).结果 脱细胞SIS肉眼观察呈乳白色、半透明的膜状物,具有一定的弹性、韧性及透光性;HE和DAPI染色光学显微镜观察结果显示,A组及B组处理30min时SIS生物支架无细胞及DNA残留,组织结构保留完整,胶原纤维间孔隙率增加;A组及B组处理30min脱细胞率可达90％以上.结论 0.1％及0.2％ SDS处理30min条件下脱细胞效果较好,能更好地降低SIS的免疫原性,是SDS脱细胞处理SIS比较理想的浓度时间条件,为组织工程化角膜上皮的构建奠定理论基础.
-
灌注法制备离体大鼠心脏脱细胞基质
目的 探索制备离体大鼠心脏脱细胞生物支架材料的新方法,为心脏组织工程研究提供三维立体天然支架.方法 取30只成年SD大鼠心脏,运用冻融加化学萃取的组织工程学方法 (胰蛋白酶、十二烷基硫酸钠和曲拉通X-100)处理离体大鼠心脏,同时观察心脏大体形态及颜色变化,并对脱细胞支架进行基因组DNA分析;HE染色,免疫荧光法,扫描和透射电镜进一步检测鉴定脱细胞支架的生物学特征.结果 心脏脱细胞支架外观透明,包膜完整,维持心脏三维立体结构,肉眼可见心脏内脉管系统;脱细胞支架DNA残留量不及对照组的3%;HE染色、扫描和透射电镜结果 显示,心脏脱细胞生物支架去细胞彻底,细胞外基质网状结构保留完整;免疫荧光结果 表明,胶原、弹性蛋白等细胞外支架成分保留较完整,未见明显细胞核成分残留.结论 运用冻融加化学萃取法所制备的离体心脏脱细胞生物支架去细胞彻底,细胞外基质保留较完整,是较为理想的心脏三维立体生物支架材料.
-
猪胆总管脱细胞支架的制备及组织学评价
目的 用不同的脱细胞方法对猪胆总管进行处理,比较脱细胞前后的组织学变化,筛选适宜的脱细胞方法,为组织工程胆管支架材料的应用提供理论依据.方法 30例猪胆总管随机分为5组:对照组(A组):0.05％胰蛋白酶+核酸酶(B组):0.1％十二烷基硫酸钠(SDS)+核酸酶(C组):1.0％ Triton X-100+核酸酶(D组):1.0％ Triton X-100 +0.1％ SDS+核酸酶(E组).通过HE染色光学显微镜下观察脱细胞基质的组织结构和细胞残留情况;用紫外分光光度法检测脱细胞基质的DNA含量,计算脱细胞率.结果 脱细胞B组有少量细胞残留,纤维有损伤;脱细胞C组、D组、E组的细胞均被去除,纤维无明显损伤.A组的DNA含量为(71.24±2.56)μg/100 mg.B、C、D、E4个脱细胞组的DNA含量与A组的差异有统计学意义(F =15.29,P＜0.01),均有明显的脱细胞效果(P＜0.01).B组的脱细胞率为77.03％,比C组、D组、E组的脱细胞效果稍差(P＜0.05),E组的脱细胞率高达99.03％.结论 应用1.0％ Triton X-100 +0.1％ SDS+核酸酶的脱细胞效果好,能更好地降低胆总管的免疫原性,是一种比较理想的猪胆总管脱细胞方法.
-
动物血管脱细胞方法及细胞外基质材料评价研究
采用独立设计的反复冻融方法,去除兔颈总动脉中的血管细胞,对所获得的细胞外基质进行组织、生化、力学等分析.在分离兔颈总动脉后,首先用低渗缓冲液处理,然后经低温反复冻融,后用非离子型去污剂处理.所得的支架行组织染色和扫描电镜分析,显示基质的微观结构;荧光染色和基因组DNA PCR分析,检测细胞DNA残留;分别行羟脯氨酸定量分析和轴向拉伸强度分析,检测胶原蛋白和血管生物力学性能的变化;支架没有明显的细胞毒性,溶血率低于医用材料的标准;支架随时间缓慢降解.种植兔的骨髓干细胞,研究细胞在支架上的粘附生长能力.应用本方法能彻底去除血管细胞,没有细胞碎片和DNA的残留,并保留了较完整的细胞外基质和力学性能,具有开放的大孔径结构,细胞生物相容性好,是一种理想的组织工程血管支架材料.
-
提高关节软骨脱细胞支架孔隙率及细胞渗透性方法的研究进展
关节软骨损伤后的再生与修复一直是临床上的难题.由于外科治疗手段具有较大的局限性,近年来,软骨组织工程领域不断发展并备受关注.在软骨组织工程中,具有软骨诱导特性的软骨基质,是一种很有前景的生物材料.这种天然的生物材料能够作为支架,为软骨组织再生提供结构框架和生物信号分子.脱细胞处理能够有效去除软骨组织中的细胞成分,获得天然的细胞外基质支架.然而,由于软骨组织具有缺乏血管、结构致密、细胞成分较少的特性,因此,经脱细胞的软骨组织能否获得足够的孔隙率,为再植的软骨细胞或干细胞提供有效的渗透途径,逐渐成为研究者关注的焦点.重点关注关于提高细胞渗透性的实验研究,总结提高支架孔隙率以及促进细胞迁移的实验方法,主要包括脱细胞处理、浓度调控、取向性冻干技术、人为制备孔道,以及激光刻蚀等.通过文献检索,对不同方法技术的原理与优势进行总结、分析,进一步强调孔隙结构在支架性能中的重要性,并阐明支架性能与调控方法之间的关系.
-
脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响
目的探讨脱细胞半月板细胞外基质（dMECM）对传代半月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。
方法用 CCK-8法检测 dMECM 对半月板细胞增殖的影响；将 P3代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在 dMECM修饰盖玻片上，以未修饰盖玻片为对照，体外培养7、14 d后进行细胞活性检测，糖胺多糖、胶原分泌含量测定并用RT-PCR 检测半月板细胞特异性基因 mRNA 表达变化。
结果 CCK-8结果证实，与对照组比较，生长在 dMECM修饰盖玻片上的 P3代兔半月板纤维软骨细胞具有更好的细胞增殖特性（P<0.05）；细胞死/活染色结果证实 dMECM组可维持更好的细胞活性；糖胺多糖和胶原定量检测结果证实 dMECM 组在第7、14天时，比对照组分泌更多的糖胺多糖和胶原（P<0.05）。RT-PCR 的检测结果证实体外培养7、14 d 时，dMECM 组 II 型胶原 mRNA 表达显著上调（P<0.05）。
结论 dMECM 可以很好地促进半月板纤维软骨细胞的增殖、分化以及细胞活性的维持，可能是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料之一。 -
复合表面活性剂处理生物源性骨组织作为骨移植材料的生物安全性研究
目的 应用新型的表面活性剂处理生物源性骨组织,对其进行脱细胞效果及生物安全性评价,以期得到一种更安全、可靠的骨植入材料.方法 2种阴离子表面活性剂ABS(十二烷基苯磺酸钠)和AES(脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠)以及蒸馏水以重量比13:7:80的比例配制复合表面活性剂.以新鲜的牛松质骨为原料,复合表面活性剂脱脂脱细胞的两步法工艺,制备新型生物源性骨植入材料.对其进行组织学和表面超微结构观察,同时对表面活性剂处理的生物源性骨植入材料进行急性全身毒性试验、溶血试验、细胞毒性试验的生物安全性评价.通过骨长期植入试验观察表面活性剂生物源性骨的生物相容性和生物降解性.采用吸光度测量法界定骨材料中表面活性剂的残留量.结果 复合表面活性剂生物源性骨颜色呈乳白色,无肉眼可见杂质,组织学及超微结构观察可见骨陷窝内细胞结构消失,骨小管空虚,胶原纤维排列整齐.生物安全性实验表明:按GB/T16886.11-1997急性全身毒性试验合格,溶血试验<5%,细胞毒性试验0级.复合表面活性剂生物源性骨组织中表面活性剂的残留量低于0.1 g/L.骨长期植入实验表明:4周时可见骨组织周围纤维组织生成,骨小梁内有细胞爬入,植入材料与宿主骨融合良好.8周时植入材料部分被机体吸收,24周后被机体完全吸收.结论 复合表面活性剂处理的生物源性骨移植材料具有良好的生物相容性和生物降解性,是一种安全、可靠的骨植入材料.
-
新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究
目的探索新型脱细胞半月板细胞外基质（dMECM）的制备方法，并对其细胞相容性进行研究。方法无菌条件下收集新鲜的猪半月板组织，切碎，采用湿法粉碎、差速离心的方法制备 dMECM生物材料。通过天狼猩红、甲苯胺蓝染色方法分别比较天然半月板与 dMECM中胶原以及糖胺聚糖含量的区别；采用 Hoechst 33258荧光染色法观察脱细胞后 dMECM中 DNA残留情况。将 P3代的兔内侧半月板细胞种植在铺有 dMECM的盖玻片上，体外培养7 d后行扫描电镜检测其细胞相容性。结果本实验制备的 dMECM天狼猩红、甲苯胺蓝染色均呈阳性，并且与天然半月板染色类似；dMECM行 Hoechst 33258染色呈阴性；扫描电镜结果显示种植于 dMECM表面上的半月板细胞黏附紧密，可见大量细胞 ECM的分泌。结论本实验制备的 dMECM可以很好地保留天然半月板 ECM成分，有效地去除 DNA物质，并且具有良好的生物相容性，是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料。
-
颈动脉脱细胞血管异体移植的彩色多普勒超声实验研究
目的 颈动脉脱细胞血管异体移植血流动力学变化.方法 研究用兔5只,应用彩色多普勒对颈动脉脱细胞异体移植血管的血流参数进行15次检测,并与对照侧血流参数进行统计学比较和分析.结果 异体移植2个月吻合口处血流峰值速度(PVS),舒张末期血流速度(EDV)高于对照侧.结论 本实验脱细胞方法制备兔颈动脉基质,异体移植2个月,移植血管血流均通畅.
-
小口径组织工程血管脱细胞生物支架材料的研究
目的 探索利用生物酶类联合消化法制备猪颈总动脉脱细胞基质材料的方法,为小口径组织工程血管提供理想的生物支架材料.方法 利用胰酶和核酸酶连续消化法脱除成年猪颈总动脉的细胞成分;通过组织学染色和定量DNA分析,检测细胞及细胞碎片的去除情况;利用扫描电镜观察脱细胞支架材料的空间结构和细胞去除情况.结果 组织学染色结果显示,制备的猪颈总动脉脱细胞支架材料不含有细胞成分,细胞外基质成分没有明显的改变,保留了脱细胞前动脉的空间结构;DNA定量分析结果显示,支架材料的DNA含量小于0.1%;扫描电镜结果显示,支架材料的内表面完全去除了内皮细胞成分,显示出良好的三维空间结构. 结论 利用胰酶和核酸酶连续生物酶消化法制备的猪颈总动脉细胞外基质支架材料中细胞成分去除完全,细胞外基质的空间结构保持良好,制备的支架材料符合小口径组织工程血管对生物支架材料的基本要求.
-
脱细胞神经基质的制备及成分分析
目的：：制备脱细胞神经基质,通过测定细胞核和DNA残留评价脱细胞程度,并对所制备的脱细胞神经基质进行成分分析,为开发新型神经修复生物材料提供研究基础。方法：①依次采用0.5%胰蛋白酶-3%曲拉通X-100-0.1%SDS-PBS溶液-水振荡漂洗的方法对异种动物的外周神经进行脱细胞处理。②冰冻切片并经苏木素-伊红染色观察细胞核残留。③微量样品DNA提取试剂盒提取脱细胞神经基质的DNA,超微量蛋白核酸分析仪检测其残留DNA含量。④免疫组织化学法分析脱细胞神经基质成分。结果：经脱细胞处理制备的神经基质呈乳白色；脱细胞神经基质经冰冻切片和苏木素-伊红染色后观察,未见有完整细胞核残留；脱细胞神经基质的DNA残留为6.6 ng/mg；经免疫组织化学染色分析,脱细胞神经基质的主要成分为Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和层粘连蛋白。结论：采用本法制备的脱细胞神经基质,有效去除了神经组织中的细胞成分,保留了神经组织细胞外基质的主要成分,可以作为神经修复的新型生物材料。
-
脱细胞血管基质的制备方法研究
目的：：通过不同脱细胞方法制备脱细胞血管基质材料,比较筛选出较为理想的血管脱细胞方法,为临床血管修复提供良好的组织工程生物材料。方法：①采用不同浓度的胰蛋白酶、Triton X-100、SDS组合,对牛血管进行脱细胞处理,制备脱细胞牛血管基质。②苏木素-伊红染色,观察细胞核残留情况,以比较脱细胞效果。③利用微量样品基因组DNA提取试剂盒提取脱细胞血管基质的DNA,超微量蛋白核酸分析仪检测DNA含量。结果：大体观察：各组血管经过不同脱细胞方法处理后,所得脱细胞血管基质呈乳白色。苏木素-伊红染色观察：光镜下观察,可见各组均有不同程度的细胞核残留,其中1%胰蛋白酶+3%Tri-tonX-100+1%SDS组和0.1%胰蛋白酶TritonX-100+0.5%SDS所制备的脱细胞血管基质细胞核残余少,每高倍视野中细胞核残留不大于3。 DNA提取检测：所提取DNA的含量显示,0.1%胰蛋白酶+3%TritonX-100+1%SDS和0.1%胰蛋白酶+3%Triton X-100+0.5%SDS的脱细胞效果较好, DNA残留量分别为0.22μg/mg和0.231μg/mg。结论：应用0.1%胰蛋白酶+3%Triton X-100+1%SDS 和0.1%胰蛋白酶+3%Triton X-100+0.5%SDS的方法来制备脱细胞基质的效果较好。
-
异种血管组织的脱细胞研究
目前,临床上涉及小口径动脉闭塞的血管疾患呈增多的趋势,然而可供选择的移植物却并不多,虽然聚四氟乙烯等材料用于大口径动脉的移植取得了较好效果,但用于小口径动脉移植的远期通畅率却不尽如人意.作为金标准的大隐静脉或自体动脉移植又受到来源、额外手术创伤与经济负担的困扰.组织工程血管的出现有望解决这个难题.以脱细胞的异种血管作为构建组织工程血管用支架目前研究的较为广泛.本文对目前常用的各种脱细胞方法及其相关的问题做一简要综述.
-
疝修补材料学进展
目前在世界上使用的疝修补材料可分为4大类:(1)不可吸收的聚酯补片、聚丙烯补片、膨化聚四氟乙烯补片;(2)可吸收的聚羟基乙酸补片、聚乳酸羟基乙酸补片;(3)复合补片;(4)脱细胞的细胞外基质补片(AEM).
-
构建韧带组织工程脱细胞支架的可行性研究
背景:十二烷基磺酸钠脱细胞在脱细胞的同时对支架结构存在一定的损伤,降低了支架的生物学性能;胰酶等脱细胞方法较为温和,虽大程度保留支架结构与生物学性能,但脱细胞效果并不彻底.目的:制备并分析脱细胞牛肌腱作为组织工程韧带支架的可行性.方法:取新鲜小牛跟腱,通过物理法去除肌腱表面腱膜、滑膜及软组织,制备50个跟腱,随机分为两组,均行冻干处理.实验组以Triton X-1 00行脱细胞处理,对照组不予脱细胞处理.两组均以PBS冲洗后室温干燥备用.行组织学、DNA含量、细胞增殖、生物力学(大应力、弹性模量以及刚度)检测,比较两组的差异.结果:对照组和实验组的DNA残留量分别为(0.34±0.15)μg/mg和(0.7±0.03)μg/mg,实验组显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组与对照组支架DNA含量对比显示,支架脱细胞效果彻底,无显著的免疫原性.两组在组织形态结构上无明显差异.细胞增殖显示脱细胞支架对细胞增殖无明显影响.实验组的大应力小于对照组,弹性模量无统计学差异,刚度试验显示两组无明显差异.结论:脱细胞支架在保留天然支架生物学性能的基础上可作为组织工程支架的选择.
-
脱细胞基质材料生物补片治愈无张力疝修补术后感染一例
目前,无张力疝修补术已经成为腹股沟疝的主要治疗方式[1].随着材料学的发展,修补材料的组织相容性越来越好[2].与传统手术比较,伤口感染率差异无统计学意义,然而一旦发生术后感染,处理方法相对于传统手术复杂、棘手[3].我院使用脱细胞基质材料生物补片治愈无张力疝修补术术后感染1例,现报告如下.
-
组织和器官脱细胞方法的研究进展
用组织或器官脱细胞制成的生物支架已成功的应用于各种组织工程和再生医学.选用的组织不同,所用的脱细胞方法也不尽相同.细胞从组织中去除的效率取决于选择的脱细胞组织和所采用的脱细胞方法.每一种处理方法都会对支架的生物学组成、组织的超微结构、机械性能产生影响.本文对主要组织和器官常用的脱细胞方法进行描述,并考虑处理方法对生物支架材料的影响.
-
脱细胞异种(猪)皮与自体微粒皮混合移植术修复大面积深度烧伤的治疗体会
目的 探讨采用脱细胞异种(猪)皮作为微粒皮移植术覆盖物的临床疗效,并对操作要领进行总结,用以指导临床.方法 采用脱细胞异种(猪)皮作为覆盖物,对15例大面积深度烧伤患者进行微粒皮移植术,分别就其手术方法、操作要领以及术后注意事项等进行总结,观察修复效果,总结治疗体会.结果 本组15例患者38个移植部位,其中Ⅰ类愈合部位29个,占全部移植部位的76.32%;Ⅱ类愈合部位7个,占18.42%;Ⅲ类愈合部位2个,占5.26%.未完全愈合者经术后换药或残余创面再次手术修复,终15例患者均痊愈.结论 应用脱细胞异种(猪)皮作为自体微粒皮移植术的覆盖物,可起到较好的保护作用,微粒皮扩展、融合效果较好,能够有效封闭创面,从而起到稳定病情的作用.
