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蛋白多糖在脱细胞猪肺动脉带瓣管道中抗钙化的作用
目的:证实去除细胞外基质蛋白多糖对提高脱细胞猪肺动脉带瓣管道抗钙化性能的作用,为研制组织工程化肺动脉带瓣管道做准备.方法:实验分为3组,即A组:为新鲜猪肺动脉带瓣管道组织,B组:用胰蛋白酶+Triton X-100处理的脱细胞猪肺动脉带瓣管道组织和C组:在B组处理的基础上再经透明质酸酶消化,去除细胞外蛋白多糖基质成分的猪肺动脉带瓣管道组织,每组4份(n=4).方法:实验室:将3组样本分别进行HE染色后,用光镜和扫描电镜观察肺动脉管壁及瓣膜组织的变化.采用盐酸胍抽提结合阿利新蓝染色法测定蛋白多糖的含量.同时将3组样本包埋于大鼠皮下,于6周后取出标本进行Van Kosaa银染色法(钙盐染色)和原子吸收分光光度计法分别定性、定量分析组织的钙化程度.结果:光镜和电镜检查结果显示,猪肺动脉管壁和瓣膜组织的细胞可以较完整的去除,纤维网架结构可以完整保持.蛋白多糖含量的测定显示,与A、B组相比,C组细胞外基质蛋白多糖的含量显著下降(P<0.05).大鼠皮下包埋实验显示,与A、B两组相比,C组的钙化反应更少,管壁组织钙的含量显著下降(P<0.05).结论:采用胰蛋白酶+ Triton X-100脱细胞方法可以达到去除细胞的目的.通过大鼠皮下包埋实验证明,采用透明质酸酶消化减少细胞外基质蛋白多糖的含量可以进一步减少脱细胞组织的钙化反应,为组织工程肺动脉带瓣管道的构建提供较为理想的脱细胞基质材料.
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脱细胞肌腱制备的实验研究
目的:探索脱细胞肌腱的制作方法.方法:将人肌腱置于0.5%Trypsin溶液37℃下消化6h,再用0.5%Triton X-100在37℃浸泡并持续震荡60h.在Trypsin消化后6h、Triton X-100处理后24h、36h、48h及60h分别进行大体观察,并留取标本作组织学检查.结果:脱细胞肌腱呈瓷白色,腱膜完整、柔软、韧性好.Trypsin消化6h后,可见胶原纤维排列疏松,腱细胞尚存;Triton X-100处理24h及36h后,可见腱细胞数量较前减少,腱膜及腱束间疏松结缔组织内细胞大部分消失;Triton X-100处理48h和60h后,肌腱内细胞消失,胶原纤维间残留较多空隙.结论:采用Trypsin消化6h及Triton X-100处理48h的方法可制备脱细胞肌腱.
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脱细胞猪真皮与自体微粒皮复合移植大面积烧伤的护理
大面积深度烧伤治疗的大难题是自体皮源不足,微粒皮的应用基本解决了自体皮源不足的问题,但因其覆盖物(同种异体皮)价格昂贵,影响了微粒皮移植的广泛开展和应用[1].临床中应用脱细胞猪真皮与自体皮片复合移植治疗烧伤创面的方法较多见,但应用脱细胞猪真皮与自体微粒皮复合移植治疗大面积烧伤报道较少.我院自2009年5月~2011年2月应用该方法治疗大面积烧伤5例,取得满意疗效,出院后1年随访,移植创面平坦,瘢痕表浅,皮肤弹性、肢体功能正常.现将复合移植治疗的护理体会报道如下.
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脱细胞异体真皮加自体刃厚皮片修复皮瓣供区创面
目的:研究应用脱细胞异体真皮与自体表皮复合移植修复皮瓣供区的临床效果.方法:回顾分析12例皮瓣供区的脱细胞异体真加自体刃厚皮片复合移植手术效果.结果:复合皮成活良好,成活率95%以上,外观及功能接近正常皮肤,取得良好效果.结论:在供瓣区修复过程中,脱细胞异体真皮与自体刃厚皮片复合移植可有效保证移植部位外观及功能,减少供皮区瘢痕.
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脱细胞骨基质材料的特性及生物安全性观察
目的对脱细胞骨基质(aceller bone matrix,ACBM)的特性及生物安全性进行评价,为进一步研究构建组织工程骨提供新型材料. 方法以新鲜猪肋骨为原料制备ACBM,对材料行组织学、形态学及超微结构观察;用X线衍射及能量散射方法行成分分析并对其蛋白含量进行测定;以新鲜骨为对照,观察制备方法对ACBM生物力学的影响.按GB/T16886 的有关标准制备材料浸提液,对ACBM进行生物安全性评价. 结果 ACBM呈乳白色,质硬,松质骨部呈蜂窝状.超微结构观察显示骨小梁结构完整,骨陷窝内无细胞及碎片残留,孔隙率、孔径大小符合要求,而且微孔之间相通.X线衍射结果显示主要成分为羟基磷灰石,钙/磷为1.66,接近人骨组织.其压缩强度、压缩极限及扭转力矩等与新鲜骨组织比较差异无统计学意义,弹性模量显著增加.急性和亚急性毒理试验、热源试验、溶血试验及肌肉埋植实验均符合GB/T16886标准. 结论 ACBM作为一种新型骨缺损充填物或骨组织工程基质材料,具有良好的生物安全性.
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脱细胞猪皮与自体微粒皮联合移植治疗大面积烧伤27例
1 临床资料本组患者27例,其中男19例、女8例,年龄1岁2个月~57岁[(34±15)岁],烧伤总面积25%~94%TBSA[(69±21)%TBSA],其中Ⅲ度创面10%~94%TBSA[(53±22)%TBSA].
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改良皮锉磨痂后覆盖脱细胞异种皮治疗深Ⅱ度烧伤39例
对于深Ⅱ度烧伤创面,可采取保守治疗或行切、削痂自体皮移植术,但这些方法尚存在一些弊端,如愈合时间较长、换药次数多、瘢痕增生明显等.2006年8月-2008年3月,我科运用改良皮锉磨痂,结合脱细胞异种皮覆盖治疗深Ⅱ度烧伤创面,效果较好.
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脱细胞异体(种)真皮基质与自体微粒皮混合移植16例
临床资料:本组患者16例,其中男12例,女4例,年龄(28.70±9.82)岁,烧伤总面积(57.23±16.31)%,其中Ⅲ度(31.28±8.23)%TBSA,观察部位27处.大腿、小腿以冷冻异体皮覆盖8例13处.上臂、前臂以甘油异体皮覆盖2例2处.前臂以戊二醛猪皮覆盖5例10处,新鲜猪皮覆盖1例2处.
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烧伤合并真菌感染一例
患者男,56岁,体质量62 kg.因煤气爆炸致颜面、颈、躯干、四肢烧伤,伤后1.5 h入院.诊断:烧伤总面积45%,其中浅Ⅱ度35%、深Ⅱ度7%、Ⅲ度3%TBSA,伴有中度吸入性损伤.入院后给予补液抗休克、雾化吸入、静脉推注40 mg奥美拉唑(商品名洛赛克,1次/12 h)预防应激性溃疡等治疗.因患者对青霉素过敏,联合使用克林霉素、奈替米星行抗感染治疗.创面清创后用脱细胞异种皮(启东市东方医学研究所有限公司)覆盖包扎,双上肢Ⅲ度创面采用磺胺嘧啶银粉剂(南京正大天晴药业股份有限公司)护痂.
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肝素化脱细胞羊皮敷料对豚鼠深Ⅱ度烫伤创面早期微循环的影响
深Ⅱ度烧伤间生态组织的保护是烧伤研究的热点问题.笔者采用肝素化脱细胞羊皮敷料覆盖豚鼠深Ⅱ度烫伤创面.并观察其对烧伤创面早期微循环的影响,以期为临床应用提供实验室依据.
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细胞外基质成分及空间形态结构对成纤维细胞生物学行为的影响
成纤维细胞(Fb)是烧(创)伤创面愈合中的主要修复细胞,它通过迁移、增殖、分化、分泌胶原等细胞外基质(ECM)成分,与多种细胞因子及细胞共同起修复作用.Yannas[1] 的研究结果表明,脱细胞真皮再生模板植入真皮缺损创面,创面收缩受到强烈抑制,皮肤经历一种再生型的愈合;推测其机制可能是脱细胞真皮再生模板植入创面后,真皮基质可诱导Fb的长入,合成和分泌具有正常结构的胶原纤维,减少Fb向肌成纤维细胞(MFb)分化.Livesey等[2]证实,真皮基质可以作为真皮重建的模板,为Fb的浸润以及胶原纤维排列提供支架,进而利于真皮组织的再生,减少瘢痕形成.是真皮的成分或空间结构还是两者均对Fb的生物学行为产生影响,其机制目前尚未完全阐明.
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脱细胞同种异体神经移植的进展
自1870年Philipeaux和Vulpain首次利用游离神经移植术修复舌下神经缺损以来,自体神经移植被认为是周围神经损伤的修复佳选择,但自体神经材料存在来源有限,取材将给病人带来新的创伤,取材后可有供区麻木、瘢痕、神经瘤等并发症.
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脱细胞真皮基质的研究进展
真皮为皮肤提供机械性保护和外观特征,在创伤愈合、生长和抗菌、防御外伤等方面发挥主要作用.在成年哺乳动物,真皮缺失后不能自发地再生,因此对于深度烧伤或其他原因导致皮肤全层缺损的创面,如何提供有效的真皮支持是烧伤整形领域的一个重要前沿课题.Heck等[1]早应用异体真皮作为自体表皮移植的载体,复合移植于动物和临床烧伤病人切痂创面,取得满意效果.但含异体真皮细胞(如附件上皮细胞、朗汉斯细胞和血管内皮细胞等)的所谓“活真皮”具有较大的免疫原性,终将被受体排斥[2],且容易引发变态反应性疾病,由此推动了真皮无细胞化的研究.Wainwright[3]首先报道了无细胞真皮与网状自体薄厚皮复合移植的研究.本文就脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)的研究和应用进展作一综述.