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P2X3受体的上调参与大鼠吗啡耐受的发生
目的:观察鞘内注射吗啡对背根神经节(DRG)神经元中P2X3受体的激活和表达的影响,同时探讨合并应用P2X3受体特异性抑制剂A-317491对大鼠鞘内吗啡耐受的影响.方法:鞘内置管成功的SD大鼠随机分为六组,每组7只:M3组,吗啡3天,每天单次鞘内给15 μg/10 μl吗啡,继而用10 μl生理盐水冲管;M5组,吗啡5天(剂量及给药方式同前);M7组,吗啡7天(剂量及给药方式同前);M+A组,A-317491合并吗啡7天,每天单次鞘内注射抑制剂A-317491 (15μg/10 μl),30 min后给吗啡(15 μg/10μl),每次给药后用10μl生理盐水冲管;A组,A-317491 7天,每天单次鞘内给抑制剂A-317491(15 μg/10μl),继而用10μl生理盐水冲管,连续7天;S组,每天单次鞘内给20μl生理盐水.每次给药前及给药后30 min动态检测大鼠后肢50％缩爪阈值,以及热痛阈甩尾潜伏期,以评估吗啡耐受的发生.于给药后第8天测定痛阈后将大鼠处死,取L3～5节段背根神经节(DRG)进行蛋白印记和免疫荧光化学染色,观察DRG中P2X3的蛋白及免疫阳性细胞表达.结果:(1)鞘内给予P2X3受体特异性拮抗剂A-317491可明显延缓大鼠吗啡耐受的发展;(2)鞘内给予吗啡可致大鼠脊髓背根神经节中P2X3受体的表达呈时间依赖性的增加;3、慢性鞘内吗啡处理可激活DRG神经元中P2X3受体的表达,而给予A-317491后可以抑制这种表达的增加.结论:鞘内慢性吗啡处理可激活大鼠DRG神经元中的P2X3受体的表达,而选择性抑制P2X3受体可一定程度上抑制吗啡耐受的发生.
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电针合谷穴对实验性牙髓痛大鼠三叉神经节P2X2、P2X3受体的影响
目的：探讨电针合谷穴对实验性牙髓痛大鼠三叉神经节P2X2、P2X3受体表达的影响。方法将42只成年雄性SD大鼠随机分为正常组(N组)、对照组(C组)、牙髓痛组(M组)、拮抗剂组(A组)、电针组(E组)和拮抗剂+电针组(AE组),每组7只。N组不做任何处理；C组在钻好的牙髓腔内注入与M组等量的生理盐水,浸润5～6 min后用牙科填料将牙洞封闭；M组用小型电钻或手钻(钻头直径约1 mm)在上颌一侧第一和第二磨牙上钻孔,深入牙髓腔并暴露牙髓,用微量注射器注入浓度为5μg/μL的大肠杆菌内毒素(LPS)溶液(每孔注入1～3μL),浸润5～6 min后用牙科填料将牙洞封闭；A组造模方法同M组,在注射器注入LPS溶液时,将A-317491(0.5 mg/kg)同时注射进牙髓；E组电针双侧合谷穴,留针30 min,每日1次,共治疗3次；AE组按A组造模后按E组方法治疗。每日治疗后观察大鼠的行为学变化及体重变化30 min。第4天处死所有大鼠,运用RT-PCR方法检测大鼠三叉神经节P2X2、P2X3受体及β-actin的基因(mRNA)表达,比较各组P2X2、P2X3受体mRNA相对表达量。结果 M组、A组、E组和AE组行为学变化均显著高于C组和N组(P＜0.01)；A组、E组和AE组行为学变化均显著低于M组(P＜0.01)。C组体重显著低于N组(P＜0.01)；M组、A组、E组和AE组体重均显著低于C组和N组(P＜0.01)；E组、AE组体重均显著高于M组和A组(P＜0.01,P＜0.05)；A组体重稍高于M组(P＜0.05)；AE组体重显著高于E组(P＜0.01)。M组、A组、E组和AE组P2X2受体mRNA表达量均显著高于N组和C组(P＜0.01)；A组、E组和AE组P2X2受体mRNA表达量低于M组(P＜0.05)；A组P2X2受体mRNA表达量低于E组(P＜0.05)；E组P2X2受体mRNA表达量高于AE组(P＜0.05)。M组、A组和E组P2X3受体mRNA表达量均高于C组(P＜0.05),且显著高于N组(P＜0.01)；A组、E组和AE组P2X3受体mRNA表达量显著低于M组(P＜0.01)；AE组P2X3受体mRNA表达量明显低于E组(P＜0.01)。结论 LPS诱导大鼠牙髓痛时,三叉神经节P2X2、P2X3受体蛋白表达量增加。电针合谷穴和注射A-317491均可降低LPS诱导牙髓痛大鼠P2X2、P2X3受体mRNA表达,这可能是电针合谷穴镇痛的机制。
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颈上交感神经节细胞P2X3受体介导心肌痛伤害性信息作用的电生理研究
目的 观察心肌缺血致心肌痛伤害性剌激后颈上神经节(superior cervical ganglion, SCG)细胞P2X3受体在心肌痛伤害性信息传递中的作用.方法用全细胞膜片钳技术记录心肌缺血组和对照组大鼠新鲜分离的SCG神经元P2X受体激动剂激活电流及P2X3受体特异性拮抗剂A-317491对P2X受体激动剂激活电流的作用.结果 ①大部分受检细胞对ATP(1～1 000 μmol· L-1)敏感,ATP-激活电流(IATP)显示快失敏和慢失敏两种形式的内向电流,心肌缺血组IATP明显高于同一浓度时对照组的IATP.②在心肌缺血组SCG细胞,P2X3受体选择性激动剂α、β亚甲三磷酸腺苷(α,β-meATP)产生激活电流,而在对照组SCG细胞只有极少数细胞有此反应,且电流幅度小.③P2X3受体特异性拮抗剂A-317491(100 nmol·L-1)对心肌缺血组和对照组ATP(100 μmol·L-1)-激活电流均出现抑制作用,且同一浓度的A-317491对心肌缺血组IATP的抑制作用较对照组IATP的作用更为明显.A-317491(100 nmol·L-1)使心肌缺血组和对照组SCG细胞α,β-meATP(10 μmol·L-1)-激活电流减小,对心肌缺血组的抑制作用更明显.④心肌缺血组和对照组SCG细胞ATP(100 μmol·L-1)-激活电流的I-U曲线反转电位不变,均接近0 mV.结论 心肌缺血后P2X受体激动剂在SCG神经元激活电流增大,P2X3受体特异性拮抗剂A-317491可抑制P2X受体激动剂激活的电流.因此,颈上交感神经节细胞的P2X3受体可能参与心肌痛伤害性感受信息的传递.
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电针“内关”对实验性心肌痛大鼠脊髓背角P2X2和P2X3受体影响的研究
目的 探讨电针“内关”对实验性心肌痛大鼠脊髓背角P2X2和P2X3受体表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠42只,随机分为正常组(N组)、对照组(C组)、心肌痛组(M组)、电针组(E组)、激动剂组(B组)和拮抗剂组(A组),每组7只.N组不做任何处理;C组注射与M组等量的生理盐水;M组背部皮下注射异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO);E组电针双侧“内关”穴30min后注射ISO;B组脚底皮下注射激动剂α,β亚甲基ATP(α,β-MeATP)后注射ISO;A组腹腔注射拮抗剂A-317491后注射ISO.所有处理连续14天,观察大鼠体重和行为学变化,第15天处死大鼠,免疫印迹法分别检测大鼠脊髓背角P2X2和P2X3受体及β-actin蛋白表达,比较各组P2X2和P2X3受体蛋白相对表达量.结果 与N组和C组比较,M组和E组大鼠体重明显下降(均P＜0.05),30 min内大鼠身体和头部梳理、挖掘和探究、直立的次数和显著增加(均P ＜0.05),大鼠均出现竖发、跛足、行动迟缓等现象;与M组比较,E组大鼠体重明显上升(P＜0.05),30 min内大鼠身体和头部梳理、挖掘和探究、直立的次数和显著减少(P＜0.05),大鼠竖发、跛足、行动迟缓等现象的程度减轻.M组脊髓背角P2X2和P2X3受体蛋白表达量均显著高于N组、C组(均P＜0.05);E组和A组脊髓背角P2X2和P2X3受体蛋白表达量均显著低于M组(均P ＜0.05),其中A组与E组相比,无显著性差异(P＞0.05).B组脊髓背角P2X2和P2X3受体蛋白表达量均显著高于N组、C组和E组(均P＜0.05),B组脊髓背角P2X3受体蛋白表达量显著高于A组(P＜0.05).B组脊髓背角P2X2和P2X3受体蛋白表达量比M组低,B组脊髓背角P2X2受体蛋白表达量比A组高,但无显著差异(P＞0.05).结论 P2X2和P2X3受体参与了ISO注射诱发的心肌痛的产生与传导,电针“内关”能够降低ISO诱导心肌痛大鼠脊髓背角P2X2和P2X3受体蛋白的表达,这可能是电针“内关”镇痛的机制之一.
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A-317491对P2X3受体介导的三叉神经痛的作用研究
目的:探究P2X3受体特异性拮抗剂A-317491对三叉神经痛的作用影响.方法:慢性压迫性损伤大鼠眶下神经(CCI-ION)建立大鼠三叉神经痛动物模型,应用von Frey细丝法测试机械刺激反应阈值,观察A-317491对三叉神经痛(TN)大鼠机械刺激反应阈值的影响.结合免疫组织化学、原位杂交、蛋白印迹、PT-PCR等方法观察大鼠三叉神经节(TG)中P2X3受体的表达变化.结果:术后14d,Ⅲ组(TN模型组)和Ⅰ组(生理盐水对照组)、Ⅱ组(假手术组)、Ⅳ组(TN模型+A-317491干预组)相比较,大鼠手术侧眶下神经面部感觉区域机械痛敏阈值明显降低(P＜0.01),大鼠TG中P2X3受体表达明显升高(P＜0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组之间相比,大鼠手术侧眶下神经面部感觉区域机械痛敏阈值差异没有显著性;Ⅳ组TG中P2X3受体的表达较Ⅲ组低(P＜0.01).结论:P2X3受体涉及到三叉神经痛,P2X3受体特异性拮抗剂A-317491对P2X3受体介导的三叉神经痛有一定抑制作用.
