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NF-κB在Caski细胞DEK基因沉默中的作用研究
目的 研究NF-κB在宫颈癌DEK基因沉默中作用.方法 实验分转染psiRNA-hHDEK组、转染psiRNA-hH1neo组及未转染组,采用免疫细胞化学染色和western blot方法,观察三组细胞NF-κB的表达情况.结果 psiRNA-hHDEK 转染组CaSki细胞NF-κB 蛋白表达明显增加;经显微图像分析测定转染psiRNA-hHDEK组阳性细胞百分率明显高于未转染组[(74.2±8.1)%vs(11.7±2.6)%]和转染psiRNA-hH1neo组[(74.2±8.1)% vs (21.6±3.9)%].结论 DEK基因沉默后CaSki细胞内NF-κB表达上调,DEK负性调控宫颈癌细胞中NF-κB表达,从而发挥其衰老抑制基因及凋亡抑制基因的作用.
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P53、P16、PTEN基因在宫颈癌中的作用
对P53、P16、PTEN基因在宫颈癌中的作用综述如下.1 PTEN基因PTEN基因亦称MMACI基因,是近年来新发现的一种肿瘤抑制基因,也是第1个具有双特异性磷酸酶活性产物的抑癌基因,在细胞生长、凋亡、黏附、迁移、浸润等方面有重要作用,该基因的突变失活与人类多数恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关.大量研究报道在许多不同类型的原发肿瘤和肿瘤细胞系中均发现PTEN的基因改变,并且与组织学类型、病理分级和临床分期有关.
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子宫颈鳞状细胞癌VEGF表达和MVD测定的临床病理意义研究
目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达和微血管密度(microvessel density,MVD)在子宫颈鳞状细胞癌中的临床病理意义.方法:应用EnVision二步法检测92例子宫颈鳞状细胞癌VEGF的表达和MVD.结果:正常子宫颈鳞状细胞有2/10表达VEGF,92例子宫颈鳞状细胞癌中VEGF表达率为71.7%(66/92),宫颈原位鳞状细胞癌、高、中、低分化鳞状细胞癌VEGF表达分别为6/10、65.0%(13/20)、75.0(15/20)、80.0%(34/42).且VEGF表达在正常子宫颈鳞状细胞和宫颈原位鳞状细胞癌间差异有统计学意义,P=0.0057.宫颈原位鳞状细胞癌、高、中、低分化鳞状细胞癌MVD值分别为22.4±7.9,27.9±9.1,30.7±11.8,34.6±14.3,VEGF表达和MVD皆与宫颈鳞状细胞癌的病理分级和临床分期密切相关,P<0.05.结论:检测VEGF的表达对宫颈早期鳞状细胞癌的判断可能是有用的指标,且对宫颈鳞状细胞癌的病理分级和临床分期具有一定指导意义.
关键词： 癌 鳞状细胞/遗传学 宫颈肿瘤/遗传学 内皮生长因子/生物合成 -
SEMA3B和SEMA3F基因在宫颈癌中的表达及其临床意义
目的:探讨新型候选抑癌基因SEMA3B和SEMA3F在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌发生、发展的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测40例宫颈癌组织、10例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织及10例正常宫颈组织中SEMA3B和SEMA3F基因产物的表达水平.结果:宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中SEMA3B的表达缺失率分别为65.0%、20.0%和0,P＜0.05;SEMA3F的表达缺失率分别为37.5%、20.0%和0,P＞0.05.晚期(Ⅲ～Ⅳ期)宫颈癌组织中SEMA3B的表达缺失率(85.0%)明显高于其在早期(Ⅰ～Ⅱ期)宫颈癌组织中的表达缺失率(45.0%),χ2=7.03,P=0.008;SEMA3F与宫颈癌的临床分期无明显关系,χ2=0.10,P=0.744;SEMA3F在宫颈鳞癌中的表达缺失率(52.0%)明显高于其在宫颈腺癌中的表达缺失率(13.3%),χ2=5.98,P=0.014;而SEMA3B的表达异常与宫颈癌的组织类型无关,χ2=3.55,P=0.06.两者与组织学分级均无明显关系,P＞0.05.结论:SEMA3B表达异常可能在宫颈癌发生、发展及预后中起重要作用.
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宫颈癌染色体杂合性丢失及HPV感染状态的研究
目的:研究宫颈癌组织染色体3p和10q位点的杂合性丢失(LOH)与人乳头瘤病毒(HPV)感染状态及临床病理参数之间的关系.方法:选择3p和10q 6个微卫星位点,对52例宫颈浸润癌、33例不典型增生和12例正常宫颈进行LOH及HPV感染状态分析.结果:浸润癌中LOH阳性的比例明显高于CIN组及正常宫颈组,P＜0.01;3p的LOH阳性率明显高于10q,P＜0.05;Ⅲ和Ⅳ期明显大于Ⅰ和Ⅱ期,P＜0.05;LOH阳性率在3p鳞癌高于腺癌,在10q腺癌高于鳞癌,但与组织学类型无关.浸润癌中HPV感染阳性率明显高于CIN组及正常宫颈组,P＜0.05;3p的LOH阳性率在HPV感染阳性组明显高于阴性组,P＜0.05.结论:宫颈癌染色体3p和10q的LOH高频区可能存在宫颈癌相关抑癌基因,HPV感染与3p的LOH共同作用在宫颈癌发展过程中更有意义.
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FHIT基因微卫星变异及人乳头瘤病毒感染与宫颈癌关系的研究
目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因微卫星变异及人乳头瘤病毒感染与宫颈癌的关系.方法:选取FHIT基因的两个微卫星多态标记,采用聚合酶链反应(PCR)法对50例宫颈癌及40例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织进行杂合性丢失(LOH)、微卫星不稳定性(MI)及HPV16感染的检测.结果:在D3S1234位点上宫颈癌和CIN的LOH发生率分别为46%(23/50)和40%(16/40),差异无统计学意义,P=0.361;宫颈癌和CIN的MI发生率分别为18%(9/50)和12.5%(5/40),差异无统计学意义,P=0.339.在D3S4103位点上宫颈癌和CIN的LOH发生率分别为40%(20/50)和37.5%(15/40),差异无统计学意义,P=0.491;宫颈癌和CIN的MI发生率分别为14%(7/50)和7.5%(3/40),差异无统计学意义,P=0.265.但宫颈癌在两位点上LOH和MI发生频率均高于CIN且高级别CIN发生率高于低级别CIN.在50例宫颈癌组织中HPV16感染阳性组的LOH和MI发生率分别为79.5%(35/44)和31.8%(14/44),阴性组LOH发生2例,MI发生1例,两组间LOH的差异有统计学意义,P=0.003,MI的差异无统计学意义,P=0.645.在40例CIN中HPV16感染阳性组的LOH和MI发生率分别为82.4%(14/17)和35.3%(6/17),在HPV16感染阴性组中LOH和MI的发生率分别为52.2%(12/23)和17.4(4/23);LOH的差异有统计学意义,P=0.048,MI的差异无统计学意义,P=0.274.结论:FHIT基因的变异可能发生在宫颈癌变的晚期.
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HCCR-1及Bax在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
[目的]探讨人宫颈癌基因-1(HCCR-1)及凋亡相关基因Bax在乳腺癌中的表达及临床意义.[方法]应用免疫组化技术检测80例乳腺癌及癌旁正常组织中HCCR-1、Bax表达情况,并分析其与各项临床指标的关系.[结果]乳腺癌癌组织中HCCR-1的阳性表达率为71.25％(57/80),高于癌旁正常组织的38.75％(31/80),Bax阳性表达率为43.75％(35/80),低于癌旁正常组织的77.50％(62/80),且两者比较差异均有显著性(P＜0.01).HCCR-1表达与年龄、肿瘤大小、孕激素受体(PR)无关(P＞0.05),与TNM分期、组织学分级、雌激素受体(ER)、淋巴结转移有关(P＜0.05);Bax表达与年龄、肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、ER、PR无关(P＞0.05),与淋巴结转移有关(P＜0.05);Spearman相关分析显示乳腺癌中HCCR-1阳性表达与Bax阳性表达呈负相关关系(P＜0.05).[结论]在乳腺癌组织中HCCR-1呈高表达,Bax呈低表达,两者呈负相关关系,且均与淋巴结转移有关.
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全外显子测序在筛选宫颈癌相关突变基因中的应用
[目的]应用高通量测序技术对3例宫颈癌组织及癌旁组织标本进行全外显子测序,筛选与宫颈癌发生相关的突变基因.[方法]选取3例癌组织及癌旁组织标本三对6个进行全外显子高通量测序,测序结果与UCSC的数据库、dbSNP数据库、千人基因组计划数据库、外显子组测序计划数据库以及AVSIFT数据库等进行比对,筛选出与宫颈癌相关的突变基因.[结果]3例宫颈癌组织及癌旁组织的全外显子测序中,发现120个非同义突变,4个无义突变,75个同义突变,7个未知变异,共涉及包括IL-10在内的31条信号通路.与COSMIC数据库中所记录的突变基因相比,发现泛素特异性蛋白酶10 (USP10) (COSM3787244)、抽搐相关类似基因6(SEZ6L) (COSM76394)和去整合素和金属蛋白酶家族29(ADAM29) (COSM5656204)三个位点在2个宫颈癌标本中存在.[结论]USP10(COSM3787244)、SEZ6L(COSM76394)和ADAM29 (COSM5656204)三个位点在宫颈癌组织中存在,其可能与宫颈癌的发生相关.
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利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库
目的 利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库,为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础.方法 采用Super SMART和SSH技术,以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester,地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver,分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段;连接T载体,转化宿主菌,构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库.结果 经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆,以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆,结果显示其中288个克隆有插入片段,阳性率为96%,大小分布在0.2～1.0 kb间.结论 本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库,为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础.
