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体外诱导人羊水间充质干细胞向成骨细胞分化
目的:分离培养人羊水间充质干细胞(AF-MSCs)及向成骨细胞诱导分化.方法:采用两步培养法分离和培养人AF-MSCs,应用化学诱导法向成骨细胞诱导分化.结果:成功分离、培养和传代人AF-MSCs,部分人AF-MSCs表达Oct-4.两步培养法AF-MSCs集落形成率和Oct-4阳性细胞率均高于一步法.AF-MSCs经成骨诱导后von Kossa法测定可见钙结节呈黑色,碱性磷酸酶活性测定为阳性.结论:人羊水中存在MSCs,两步培养法是一种高效、简便实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法.AF-MSCs易诱导分化为成骨细胞,且增殖快,成骨能力强.
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人羊水细胞染色体制备成败的影响因素
染色体结构或数目异常所致疾病为染色体病.大部分染色体病的致病基因在受精后就有表达,在胚胎发育中被淘汰,但仍有部分染色体异常儿不会被淘汰,需要我们去筛查、诊断.
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脂质体介导SV40LT基因转染构建羊水染色体核型分析质控细胞系研究
目的:研究羊水染色体核型分析质控细胞系的构建方法.方法:以T4 DNA连接经BamHⅠ单酶切的SV40LTag-pcDNA和pcDNA3.1(-)DNA,重组SV40 LTag-pcDNA3.1(-)克隆,以脂质体介导法将重组克隆转染至染色体结构异常的羊水细胞,以G418筛选阳性克隆,观察细胞系的传代生长特性及其作为染色体核型分析质量评估的可行性.结果:构建了染色体核型为46,XY,t(8;19)(q24.3;q13.1)的羊水细胞系,传至第15代的细胞系经染色体核型分析,其核型与原代细胞一致.结论:染色体结构异常的羊水细胞转染SV40 LT基因后可转化为无限扩增且染色体核型稳定的细胞系,从而制成羊水细胞染色体核型分析的质控细胞系.