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体外诱导人羊水间充质干细胞向成骨细胞分化
目的:分离培养人羊水间充质干细胞(AF-MSCs)及向成骨细胞诱导分化.方法:采用两步培养法分离和培养人AF-MSCs,应用化学诱导法向成骨细胞诱导分化.结果:成功分离、培养和传代人AF-MSCs,部分人AF-MSCs表达Oct-4.两步培养法AF-MSCs集落形成率和Oct-4阳性细胞率均高于一步法.AF-MSCs经成骨诱导后von Kossa法测定可见钙结节呈黑色,碱性磷酸酶活性测定为阳性.结论:人羊水中存在MSCs,两步培养法是一种高效、简便实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法.AF-MSCs易诱导分化为成骨细胞,且增殖快,成骨能力强.
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放射线照射的肺成纤维细胞对人脐带间充质干细胞中经典 Wnt/β-catenin 通路的影响
目的:体外研究放射线照射后的人肺成纤维细胞( HLFs )对人脐带间充质干细胞(HUMSCs)中经典Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:实验细胞分为共培养组和单纯 HUMSCs 组,共培养组为5 Gy X 射线照射后的 HLFs 通过Transwell系统与HUMSCs共培养。细胞培养3d后,蛋白质印迹法检测HUMSCs中GSK-3β、p-GSK-3β、FRAT1和胞核内β-catenin蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中WISP-1蛋白表达。结果:共培养组HUMSCs 中p-GSK-3β/GSK-3β相对比值(0.15±0.05)和FRAT1表达水平(0.48±0.07)较单纯HUMSCs组(0.55±0.05和1.16±0.13)明显下降,共培养组 HUMSCs 胞核内β-catenin (0.50±0.07)也较单纯HUMSCs组(2.39±0.15)明显下降;共培养组HUMSCs培养上清液中 WISP-1蛋白表达[(602.23±161.47) ng/mL ]较单纯 HUMSCs 组[(977.77±110.56)ng/mL]明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:放射线照射后的HLFs对HUMSCs中经典Wnt/β-catenin通路具有抑制作用。
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大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的研究
目的 研究大鼠脂肪干细胞的基本生物学特性及其向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化潜能.方法 取6周龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,胶原酶消化法分离出脂肪干细胞,体外培养.取第3代细胞,免疫细胞化学测定其CD44、CD34抗原表达,分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞及成骨细胞分化.油红染色、碱性磷酸酶染色和yon Kossa染色鉴定其分化能力.结果 大鼠脂肪干细胞生长能力旺盛,表达CD44,而不表达CD34;定向诱导后,油红染色、碱性磷酸酶染色和von Kossa染色阳性.结论 大鼠脂肪组织可分离培养出脂肪干细胞,能向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,有可能成为组织工程理想的种子细胞来源之一.