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Hedgehog信号传导通路在肝癌发生中的作用
目的 研究Hedgehog 信号传导通路在肝癌发生中的作用,以及抑制该通路对肿瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组织化学的方法研究了14 例肝癌组织切片;使用RT-PCR 和Western blot 方法分别研究了9 例新鲜肝癌组织标本、4 个肝癌细胞系和正常肝二倍体细胞中Hedgehog 信号传导通路成员的转录和表达情况.结果 免疫组织化学染色显示14 例肝癌组织切片中,Hedgehog 信号传导通路成员Gli 阳性6 例(42.9%),Ptch 阳性10 例(71.4%),Ihh 阳性10 例(71.4%),Smo 阳性12 例(85.7%).RT-PCR 和Western blot 的结果显示,在肝癌组织和肝癌细胞系中,Ihh 、Ptch 、Smo 、Gli 、Hip 基因的转录和蛋白表达可检测到差异.环耙明(KAAD-cyclopamine)可使Hedgehog 信号传导通路各成员的表达出现不同程度的降低.结论 原发性肝癌中Hedgehog 信号传导通路是活化的,环耙明有阻断Hedgehog 信号传导通路的作用.
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Hedgehog信号传导通路相关基因在肝癌组织中的表达研究
目的 研究Hedgehog信号传导通路相关基因在肝癌组织中的表达,及其抑制剂对肿瘤细胞生长的影响.方法 免疫组化法检测14例肝癌组织切片、4个肝癌细胞系和正常肝细胞中Hedgehog信号传导通路成员Ihh、Ptch、Smo、Gli的蛋白表达;Western blot检测9例新鲜肝癌组织标本、6例正常肝组织标本和肝癌细胞系中Ihh、Ptch、Smo、Gh的蛋白表达;RT-PCR检测3肝癌组织标本和肝癌细胞系中Ihh、Ptch、Smo、Gli、Hip mRNA表达.结果 14例肝癌组织中免疫组化染色阳性的Gli 6例(42.9%),Ptch 10例(71.4%),Ihh 10例(71.4%),Smo 12例(85.7%).Western blot和RT-PCR检测显示,肿瘤组织中Gli基因的mRNA和蛋白表达均高于正常肝脏细胞,Hip基因的mRNA表达低于正常肝细胞.肝癌细胞系HepG2,Bel-7402和QGY-7701免疫细胞化学染色Pteh和Gli同时为阳性,证明为Hedgehog通路活化的细胞系.在环耙明(KAAD-cyclopamine)作用后,3个细胞系Ptch及Gli基因的mRNA表达下调(Ptch基因tHepG2=3.78,tBel-7402=9.03,tQGY-7701=5.63,Gli基因tHepG2=9.61,tBel-7402=4.15,tQGY-7701=20.30,均P＜0.05);QGY-7701组Hip基因RNA表达上调(t=4.70,P＜0.05).环耙明抑制肝癌细胞系QGY-7701的作用明显.结论 原发性肝癌组织中Hedgehog信号传导通路有多种基因表达,环耙明有抑制肝癌细胞生长的作用.
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环耙明对M1型巨噬细胞分泌iNOS的影响
目的 研究环耙明在巨噬细胞极化过程中的作用.方法 用100 ng/ml脂多糖(LPS)和20 ng/ml干扰素γ(IFN-γ)处理RAW264.7 24 h刺激成M1型巨噬细胞,用20ng/ml白介素-4(IL-4)处理RAW264.7 24 h刺激成M2型巨噬细胞,用荧光定量PCR(QPCR)法检测各分型中一氧化氮合成酶(iNOS)、CD86、精氨酸酶-1(Arg-1)、CD206、GLi1、ptch1 mRNA水平的表达;用QPCR法、Western blot法、免疫荧光法检测加入环耙明后对M1型巨噬细胞分泌iNOS的影响.结果 M1型巨噬细胞高分泌iNOS、CD86、M2型巨噬细胞高分泌Arg-1、CD206(P＜0.01);40 nmol/L环耙明刺激后,M1型巨噬细胞中ptch1 mRNA水平的表达明显增强且在100 nmol/L时达到大值(P＜0.01);经环耙明1 000nmol/L刺激后有效降低了iNOS的mRNA和蛋白水平,可能提示环耙明会促进巨噬细胞向M2型巨噬细胞分化.结论 环耙明能够明显地降低M1型巨噬细胞中iNOS的分泌.
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Hedgehog信号通路及其在肝癌中的研究进展
Hedgehog(Hh)信号通路是一种对动物胚胎发育和细胞增殖过程中具有重要作用的信号通路.目前已发现该通路的异常激活在多种肿瘤发生中有重要作用,近来亦发现Hedgehog信号通路在肝脏肿瘤中被激活.现简要介绍该通路及其在肝癌中的研究进展.
关键词： 肝脏肿瘤 Hedgehog信号通路 基因表达 环耙明 -
Hedgehog-Gli 1信号通路对肝星状细胞增殖和凋亡的调控作用
目的 研究肝星状细胞(HSC)中hedgehog(Hh)信号通路成员Shh、patched、smoothened(Smo)和Gli-1的表达,及Hh通路抑制剂环耙明对HSC-T6细胞株增殖、凋亡及其激活的影响.方法 体外培养HSC株,提取细胞总RNA,用RT-PCR扩增Shh、patched、Smo、Gli-1基因;用环耙明作用HSC-T6后采用四甲基偶氮唑盐法检测其在体外对HSC-T6的抑制情况,流式细胞仪检测其对HSC-T6细胞周期的影响,碘化丙啶和膜联蛋白-Ⅴ双染荧光标记法及提取细胞DNA检测HSC-T6细胞凋亡,荧光定量聚合酶链反应检测Gli-1,转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2 mRNA的表达水平.结果 HSC-T6中表达有Hh通路家族成员.环耙明在50、100、150、200,250 μmol/L作用下,A值分别为1.55±0.07、1.19 ±0.05,0.78±0.06、0.48±0.03、0.38±0.04,正常对照组为1.74±0.03,环耙明组与正常对照组相比,F=636.81,P<0.01,差异有统计学意义.流式细胞术测出干预后环耙明G0/G1期细胞所占比例为65.08%±1.50%,正常对照组为55.41%±2.54%,两组比较,t=-8.05,P<0.01.药物干预后提取DNA及碘化丙啶和膜联蛋白-Ⅴ双染荧光标记均检测出HSC-T6细胞凋亡.荧光定量结果表明,经环耙明干预后,HSC-T6细胞中Gli-1、转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、Bcl-2 mRNA的目的基因相对表达量分别0.28±0.05、0.13±0.04、0.07±0.04、0.17±0.02,正常对照组为1,各基因表达量较正常对照组均明显降低,t值分别为23.09、31.34、43.87和59.10,P值均<0.01,差异有统计学意义.结论 HSC-T6中存在Hh信号通路,环耙明能抑制HSC增殖及增殖周期,促进活化的HSC凋亡,其抑制HSC活化可能是通过抑制Hh-Gli-1信号通路的结果.
