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同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法快速测定血清25-羟维生素D2和25-羟维生素D3临床方法的建立
目的 建立同位素稀释超高效液相色谱串联质谱(ID-UPLC/MS/MS)方法测定血清25羟维生素D2[25(OH)D2]和25羟维生素D3 [25(OH) D3],以用于常规临床实验室评价维生素D含量.方法 方法学建立及评价.2013年5月至8月征集的500名北京健康志愿者,采集血清用于建立参考区间.以稳定同位素标记的25 (OH) D2-D3和25 (OH) D3-D3作内标,首先用硫酸锌溶液和甲醇溶液沉淀血清蛋白、正己烷震荡提取、离心后吸取上清液、氮气挥干,再用流动相重组,应用ID-UPLC/MS/MS技术分析;质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式,25(OH) D2和25(OH)D3定量离子通道选择质荷比(m/z)分别为413.3→395.3和401.4→383.4;内标25(OH) D2-D3和25 (OH) D3-D3离子通道m/z分别为416.3→398.3和404.4→386.4.以标准品制作标准曲线,结合稳定同位素内标法定量,建立ID-UPLC/MS/MS法快速测定25(OH)D2和25(OH)D3的方法.用含4个水平25(OH)D3的混合人血和3个水平25 (OH) D2和25(OH)D3的质控品进行3次重复分析,每次每种样本重复分析3份,以考察方法的精密度,同时评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率.初步建立北京人群血清25(OH)D参考范围,亚组间差异采用独立样本t检验.结果 用ID-UPLC/MS/MS法在本实验条件下可同时快速检测血清25(OH)D2和25(OH) D3,分析时间仅4.5min,特异性高,未见明显干扰因素.25(OH)D2[或25 (OH) D3]/内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数＞0.999,25(OH) D2批内和总变异分别为1.89％ ～4.19％和2.58％ ～ 7.90％,25(OH)D3批内和总变异分别为1.51％～2.86％和1.89％ ～ 3.26％.25(OH) D2和25 (OH) D3三次试验的加样回收率范围为98.12％ ～103.11％和98.00％ ～ 103.40％.25 (OH) D2和25 (OH) D3检测限(LOD)均为0.39 ng/ml,定量限(LOQ)分别为1.25 ng/ml和1 ng/ml,具有较高的灵敏度.结论 本研究成功建立了ID-UPLC/MS/MS同时测定血清25 (OH) D2和25(OH) D3的方法,该法可应用于常规临床实验室评价维生素D含量.
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老年男性血清25羟维生素D水平与左心室肥厚的相关性研究
目的 探讨老年男性血清25羟维生素D水平对于心脏左心室肥厚(LVH)的预测意义.方法 选取333例老年男性患者,根据是否合并LVH分为非LVH组208例,LVH组125例,2组行超声心动检查,采用ELISA法检测血清25羟维生素D,采用多因素多元逐步回归分析.结果 与非LVH组比较,LVH组血清肌酐水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05)；血清25羟维生素D明显降低[(35.5±14.8)nmol/L vs(30.7±10.8) nmol/L,P＜0.05],左心室重量指数(LVMI)明显增高(P＜0.01).体重指数和25羟维生素D与LVMI独立相关(β=0.216,-0.155,P＜0.01).结论 在老年男性患者中,较低的25羟维生素D水平可能是LVH的独立危险因素.
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脑梗死患者25-羟维生素D水平与颈动脉粥样斑块的相关性研究
目的 分析血清25羟维生素D[25-(OH)D]与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的相关性.方法 选取2013年11月至2015年9月在我院就诊的脑梗死患者194例,同期体检中心健康体检者121名作为对照组.所有受试者均行颈动脉超声检查,并检测血25-(OH)D及常规生化指标.根据脑梗死患者血清25-(OH)D水平分为缺乏组(A组)、不足组(B组)和充足组(C组),并对不同组之间临床指标及颈动脉超声结果进行比较,并对颈动脉硬化斑块的影响因素进行Logistic回归分析.结果 ①脑梗死患者吸烟比例、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血钙、25-(OH)D、颈动脉内膜-中层厚度(IMT)、体质量指数、收缩压、舒张压、同型半胱氨酸水平与健康人群组相比,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);②A组和B组颈动脉IMT、同型半胱氨酸、hs-CRP、收缩压、舒张压水平明显高于C组(均P<0.01);③A组和B组超声造影剂到达时间差(DAT)、超声造影剂到达各峰值的时间差(DTTP)、斑块增强强度(EI)、斑块增强密度(DE)水平,与C组之间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);④Logistic回归风险显示吸烟、同型半胱氨酸、高血压、颈动脉IMT、hs-CRP以及低水平25-(OH)D是颈动脉粥样硬化斑块的独立危险因素.结论 在脑梗死患者中,低水平25-(OH)D水平是颈动脉粥样硬化斑块的独立危险因素.
关键词： 脑梗死 25-羟维生素D2 颈总动脉内膜中层厚度 -
非酒精性脂肪性肝病患者血清25-羟基维生素D水平与相关因素的临床分析
目的 分析血清25-羟基维生素D与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的相关性,为NAFLD防治提供临床依据.方法 选择2014年3月-10月在新疆医科大学第一附属医院就诊的维吾尔族、汉族NAFLD患者各200例为NAFLD组,同期体检的维吾尔族、汉族健康者各200例为对照组;对所有研究对象进行问卷调查、体格检查、腹部超声检查以及血液生化指标检测,采用ELISA检测血清25-羟基维生素D水平;计数资料组间比较采用独立样本t检验,计数资料组间比较采用x2检验.同时采用Spearman相关分析以及多因素Logistic回归分析25-羟基维生素D与NAFLD的关系.结果 维吾尔族、汉族人群NAFLD组25-羟基维生素D水平低于对照组(P＜0.05),且血清25-羟基维生素D与NAFLD具有负相关性(r汉=-0.212,r维=-0.220,P值均＜0.01);多因素Logistic回归分析结果表明血清25-羟基维生素D水平升高是NAFLD的保护因素(OR汉=0.894,P汉=0.015;OR维=0.897,P维 =0.025).结论 维吾尔族、汉族人群中血清25-羟基维生素D水平与NAFLD密切相关.
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慢性自发性荨麻疹患者血清维生素D与基质金属蛋白酶9的检测
目的：探讨慢性自发性荨麻疹患者血清25羟维生素D[25（OH）D]与基质金属蛋白酶9（MMP?9）的水平及意义。方法用高效液相色谱?串联质谱法检测56例慢性自发性荨麻疹患者和25例健康对照血清25（OH）D水平，用酶联免疫吸附试验检测血清MMP?9水平。采用独立样本t检验或秩和检验分析两组间指标水平的差异，Spearman秩相关分析评估各检测指标之间的相关性及其与病情的关系。结果患者组中轻度19例，中度26例，重度11例。患者组血清25（OH）D水平为（21.74±6.04）μg/L，健康对照组为（30.17±2.21）μg/L；患者组MMP?9水平中位数（P25~P75）为291.55（166.18，594.46）μg/L，健康对照组为138.46（94.27，233.12）μg/L，两组间25（OH）D、MMP?9水平差异均有统计学意义（P<0.05）。患者组血清25（OH）D与MMP?9水平呈负相关（rs=-0.26，P<0.05），MMP?9水平与症状严重程度呈正相关（rs=0.27，P<0.05），25（OH）D水平与症状严重程度无明显相关关系（rs=-0.20，P>0.05）。结论维生素D、MMP?9在慢性自发性荨麻疹的发病过程中起一定作用。
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社区医院应用骨化三醇联合氯沙坦治疗糖尿病肾病的疗效研究
目的 观察口服补充维生素D类药物能否进一步降低糖尿病肾病患者尿蛋白,减缓肾功能的恶化,改善糖代谢.方法 选取本社区2型糖尿病、Ⅲ-Ⅳ期糖尿病肾病(CKD 1-3期)患者84例,将患者按随机数字表法分为观察组和对照组,两组在常规治疗基础上,对照组给予氯沙坦100 mg/d,观察组给予骨化三醇0.25μg/d+氯沙坦100 mg/d,干预12个月,比较两组治疗后6个月、12个月时的疗效.结果 治疗12个月后,观察组与对照组相比,血磷下降(P=0.019);与入组前比较,观察组舒张压、血清胱抑素C、血磷、尿微量清蛋白/尿肌酐下降(P=0.041、P<0.001、P=0.007、P=0.008),血清25(OH)D升高(P=0.037);与入组前比较,对照组血清25-(OH)D升高(P<0.001),血清胱抑素C下降(P<0.001).血清25-(OH)D与FIns呈正相关(r=0.26,P<0.001),与空腹血糖、糖化血红蛋白、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、血磷呈负相关(r=-0.30、-0.29、-0.34、-0.26、-0.22,P<0.001.结论 小剂量骨化三醇联合氯沙坦能够升高血清25-(OH)D浓度、改善糖尿病肾病患者钙磷代谢,并对肾脏提供一定的保护.
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陕西省神木市2016年秋冬季节儿童血清25羟维生素D水平分析
目的 了解陕西省神木市秋冬季节儿童血清25羟维生素D水平,为该地区佝偻病防治提供理论依据.方法 选取2016年6-12月神木市2016年秋冬季节儿童保健门诊体检儿童共277例.取清晨空空腹血,采用酶联免疫法检测其血清25羟维生素D水平.结果 277例中男性181例,女性96例;婴儿163例(58.8％),幼儿75例(27.1％),学龄前24例(8.7％)及学龄15例(5.4％),男181例,女96例.血清25羟维生素D的中位数(四分位数间距)为33.21(14.93)nmol/L;其中重度维生素D缺乏4.3％,中度维生素D缺乏15.9％,轻度维生素D缺乏57.0％,维生素D不足7.9％,维生素D适宜11.9％,维生素D过量2.9％.不同年龄组25羟维生素D水平差异无统计学意义(H=10.133,P＞0.05),各年龄组25羟维生素D水平男女性别差异无统计学意义(Z=0.712、1.094、0.476、0.000,均P＞0.05).秋季体检儿童的血清25羟维生素D水平高于冬季体检儿童(75.96％比90.75％,x2=11.27,P＜0.05).结论 神木市儿童血清25羟维生素D缺乏或不足普遍存在,冬季明显增多;应该加强户外活动,及时补充维生素D预防佝偻病的发生.
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维生素D实验室检测方法研究进展
维生素D(VD)是人体必需的营养素,人体自身不能合成,需通过日光照射或食物摄入获得.VD为脂溶性维生素,固醇类衍生物,共5种,其中VD2、VD3与健康关系密切,且均为VD原经紫外线照射后的衍生物[1].
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LIAISON全自动化学发光仪测定25-羟基维生素D分析性能评估
目的 对LIAISON全自动化学发光仪测定25-羟基维生素D的检测性能进行验证和评估,以确定是否满足临床检测要求.方法 依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP5-A2文件评价精密度,依据EP17-A文件验证分析灵敏度和功能灵敏度,依据EP6-A文件评估线性范围和临床可报告范围,依据C28-A2文件验证参考区间.结果 精密度实验结果表明批内精密度为5.23%,总精密度为6.57%,在厂家提供的数据(批内精密度5.50%、总精密度12.90%)范围内,可以接受.灵敏度实验证实化学发光法测定25-羟基维生素D的分析灵敏度为2.5 ng/mL,功能灵敏度为3.0 ng/mL,与厂家提供的数据(仅提供功能灵敏度4.0 ng/mL)比较,差异无统计学意义,可以满足临床需要.线性实验结果表明线性范围为6～131 ng/mL,临床可报告范围为3～262 ng/mL,涵盖了健康者和绝大多数患者,可以满足临床需要.结论 LIAISON全自动化学发光仪测定25-羟基维生素D在精密度、分析灵敏度、功能灵敏度、线性范围、临床可报告范围等性能参数上均符合要求,可以应用于临床检测.
