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肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究
目的 调查武汉大学人民医院分离的肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS基因的现状、基因型以及qnr基因阳性菌株所携带的广谱B内酰胺酶基因型.方法 PCR法对179株肠杆菌科细菌(129株大肠埃希菌、37株肺炎克雷伯菌和13株阴沟肠杆菌)进行qnrA、qnrB、qneS基因检测.KB纸片法检测对15种抗菌药的体外抗菌活性.琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的MIC值.质粒接合试验分析qnrA、qnrB、qnrS基因的水平转移能力.对qnr阳性株,检测Ⅰ类整合酶基因及SHV-1、TEM-1、CTX-M、OXA-Ⅰ、OXA-Ⅱ、OXA-Ⅲ、DHA、EBC型β内酰胺酶基因.结果 179株肠杆菌科细菌中,共检测出含qnr基因阳性菌株25株(13.97%),包括6株(3.35%)含有qnrA基因,9株(5.02%)含有qnrB基因,10株(5.59%)含有qnrS基因.阳性株菌均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和4株qnrB阳性菌株对喹诺酮类药物敏感.2株qnrA阳性菌株和4株qnrB及qnrS阳性菌株质粒接合成功.23株qnr阳性株Ⅰ类整合酶基因阳性,1株qnrB及qnrS阳性菌株Ⅰ类整合酶基因阴性,14株菌携带TEM-1型广谱β内酰胺酶基因、6株菌携带OXA-Ⅲ型广谱β内酰胺酶基因、7株菌携带EBC型AmpC酶.结论 湖北地区肠杆菌科细菌中存在qnrA、qnrB、qnrS基因的流行,qnr阳性菌株呈多重耐药,且喹诺酮类敏感菌株中有qnr基因的存在.qnr阳性菌株可携带多种广谱p内酰胺酶基因.
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变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究
目的 探讨湖南省CTX-M型超广谱B内酰胺酶(ESBLs)基因型分布情况和变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测CTX-M型ESBLs基因型的准确性.方法 用多重PCR扩增标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株blaCTX-M基因,扩增产物经DHPLC分析得到标准菌株和临床菌株色谱峰图,通过比对标准色谱峰图对临床菌株进行基因分型,同时采用单纯随机抽样法选择25株多重PCR扩增阳性菌株进行特异PCR扩增,其产物冉进行基因测序来评估DHPLC法的准确性.结果 142株产ESBLs的肠杆菌科细菌经多重PCR扩增证实109株携带blaCTX-M基因,检出率为76.8%(109/142).109株扩增阳性的菌株经DHPLC分析后检出4种不同的blaCTX-M基因型:33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14.25株基因测序结果与DHPLC基因分型结果作比较显示:24株DHPLC的基因分型结果与基因测序结果完全吻合,但有1株DHPLC基因分型为CTX-M-15,而测序为CTX-M-82.结论 DHPLC可对耐药进行基因快速基因分型,具有准确、快速和经济等优点.
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广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究
目的 研究广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征.方法 收集2007-2008年广州地区9家医院临床分离产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌,通过PCR检测ESBLs分子表型;通过接合试验、质粒图谱、PCR分析CTX-M-15型ESBLs的基因环境,肠杆菌科基因间重复序列引物PCR(ERIC-PCR)分析产CTX-M-15型ESBLs菌株的分子同源性.结果 67.3%(243/361)的ESBLs产生株为CTX-M表型,其中CTX-M-1群和CTX-M-9群各占46.9%(114/243)和53.1%(129/243),未发现其他CTX-M亚群.CTX-M-14和CTXM-15是常见的ESBLs基因型,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别35.4%(64/181)和28.3%(51/180),CTX-M-15在这两种菌的检出率分别为21.5%(39/181)和26.1%(47/180),此外还检出对头孢他啶有水解活性的CTX-M-55、CTX-M-19和CTX-M-27.采用ERIC-PER分析CTX-M-15产生株的同源性,39株大肠埃希菌被分为28个基因型,47株肺炎克雷伯菌被分为30个基因型.67.6%(25/37)和32.4%(12/37)bla_(CTX-M-15)分别位于65 000 bp和90 000 bp的可接合质粒上,65 000 bp质粒除bla_(CTX-M-15)阳性外,未检到bla_(TEM-1)、qnrB、bla_(DHA-1)、bla_(OXA-1),aac(6′)-I6-cr等耐药基因.1株接合菌90 000 bp质粒还存在bla_(OXA-1)和bla_(TEM-1)耐药基因,其余7个90 000 bp质粒所携耐药基因同65 000 bp质粒.所有bla_(CTX-M-15)都位于ISEcp1-like插入序列下游,ISEep1-like末端与blaCTX-M-15间距均为48 bp.结论 广州地区ESBLs主要分子表型为CTX-M型主要流行为CTX-M-14型.以CTX-M-15为代表能水解头孢他啶的CTX-M型ESBLs在本地区检出增多值得关注.
