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中国汉族血友病B家系五种新的FⅨ基因突变的研究
目的探讨中国汉族无关血友病B家系先证者的凝血因子Ⅸ基因的突变和发病的分子机制.方法对19例中国汉族无关血友病B家系先证者,静脉采集各家系先证者外周血,表型诊断确诊后,用PCR对FⅨ 8个外显子及其侧翼序列进行扩增,用末端标记双脱氧法检测核酸序列.结果 19例血友病B家系先证者均检测到相应的基因序列的改变.结论 19例中国汉族无亲缘关系的血友病B家系先证者FIX基因在编码外显子的核苷酸部位均发现有基因突变,其中发现五种新的突变,即6444T→A(Cys23Stop);10497G→C(Cys82Ser);31101G→T(Arg327Ile);31102 InsertT;30984T→G(Ile288Ser)为国际上首次报道.
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抗小鼠凝血因子IX的大鼠--小鼠杂交瘤细胞株的建立
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凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和主要血液学指标观测
为研究凝血因子IX基因剔除小鼠的生长繁育和血液学指标等生物学特性,对种群中38窝母鼠所生仔鼠进行生长发育指标的测定,测其5、10、15、21、30、40、50、60日龄的体重、体长和尾长;测定交配种鼠的繁殖性能及发病时间和临床症状;部分小鼠的血液生理、生化值.结果表明,5、21日龄平均体重分别为♂3.70 g,♀3.44 g和♂11.12 g,♀10.35 g;初配至生产平均30.24 d,产仔数5.39只,平均离乳率81.09%.小鼠发病时间30～90日龄不等,有出血症状;凝血因子IX基因剔除小鼠的血液成分指标与正常小鼠基本一致.
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pcDNA3.1F9质粒介导人凝血因子IX在肠上皮细胞中的表达
目的探索肠上皮细胞用于血友病B基因治疗的可能性.方法用已构建好的质粒载体pcDNA3.1F9,以脂质体介导法转染肠上皮细胞SW480,RT-PCR 检测mRNA的转录,ELISA、一期法检测蛋白表达及凝血活性.结果转染后的细胞中有人凝血因子IX(human coagulation factor IX, hFIX) mRNA的转录;ELISA法测得转染后24h细胞上清中的hFIX蛋白量为(11.72±0.24)ng·106cell-1·24h-1,转染后48h hFIX蛋白量为(381.34±16.16 )ng·106cell-1·24h-1.一期法结果示细胞上清中的hFIX有凝血活性,转染后48h达(45±0.85)%·106cell-1.结论肠上皮细胞SW480转染pcDNA3.1F9质粒后可表达有凝血活性的hFIX,肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞.
