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免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用
目的在胎山羊宫内移植人造血干细胞(hHSC)获得人/山羊嵌合体基础上,应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况.方法对7头经荧光激活的细胞分选(FACS)、荧光原位杂交(FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊,在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织,制作石蜡切片,然后采用免疫组织化学的EnVision系统,用特异性人增殖期细胞核抗原(PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原(HSA)单抗及人β-2微球蛋白(β-2M)单抗鉴定这些组织中的人源细胞.结果 7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞,肺和肾组织内有PCNA及β-2M抗体阳性染色细胞,正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色,而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞.结论胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活,并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞.免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符.此外,在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞.
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超声引导下宫内移植制备人/山羊干细胞嵌合体的方法建立
目的 建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法.方法 首先获得胎羊腹部横断面的超声图像,然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55 d的胎羊腹腔内,将外源干细胞注射入胎羊腹腔中,并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产情况以及出生后外源细胞的嵌合比例.结果 通过超声引导能准确安全地进行外源干细胞的宫内移植,在移植的49头胎羊中,有36头胎羊顺利出生,其余13头流产(流产率26.5%,13/49),与非移植组流产率相当,明显低与剖腹手术移植组(流产率6%).结论 超声引导下的干细胞宫内移植是一种简便和安全的方法,能有效避免剖腹手术方法带来的高流产率,非常适用于宫内移植嵌合体模型的制备,从而为研究干细胞在体内生物学特征和干细胞宫内移植的临床应用提供了技术手段.
