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内皮素B受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D3受体的异常调节
目的 探讨内皮素B(ETB)受体对肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D3受体表达的影响,以及其与高血压(EH)发生之间的关系.方法 以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)株为研究对象,观察刺激ETB受体后D3受体蛋白表达的变化,D3受体的蛋白表达采用免疫印迹测定,ETB/D3受体之间的连接采用免疫沉淀测定.结果 ETB受体激动剂BQ3020可增加WKY大鼠RPT细胞D3受体的蛋白表达,该作用呈现出时间依赖性和剂量依赖性关系,而且BQ3020对D3受体蛋白表达的刺激作用可以被D3受体拮抗剂BQ788所抑制.在SHR细胞,ETB受体激动剂BQ3020并不能增加RPT细胞D3受体的蛋白表达,并且基础状态下D3受体的蛋白表达在SHR细胞明显低于WKY细胞.免疫共沉淀显示在ETB/D3受体之间存在同连接,刺激ETB受体可增加ETB/D3受体之间的连接程度,然而,在SHR细胞,不仅基础状态下ETB/D3受体之间的连接程度低,而且,刺激ETB受体对ETB/D3受体之间的连接程度无影响.结论 ETB受体具有对D3受体蛋白表达的调节作用, ETB/D3受体之间的异常调节可能参与了EH发生的发病机制.
关键词： D3受体 内皮素B受体 肾脏近曲小管上皮细胞 高血压 -
多巴胺D3受体对肾脏近曲小管上皮细胞D5受体的影响在高血压发生中的作用
目的 观察多巴胺D3受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞上多巴胺D5受体表达和功能的影响. 方法 以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠与自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,利用免疫印迹法观察D3受体对D5受体蛋白表达的影响;并采用Na+-K+-ATP酶活性测定方法在转染D5受体的人胚肾293细胞(HEK293-D5)上观察D3受体对D5受体影响的病理生理学意义. 结果 刺激D3受体可增强D5受体的蛋白表达,该作用呈浓度和时间依赖性;同时能被D3受体特异性阻断剂所阻断;在高血压状态下,这种作用受损.刺激D5受体可抑制Na+-K+-ATP酶的活性,在预先刺激D3受体的情况下可使D5受体对Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用进一步增强. 结论 D3受体对肾脏近曲小管上皮细胞上D5受体的表达和功能具有促进作用,这种作用的受损可能在原发性高血压的发生发展中具有一定影响.
关键词： 多巴胺受体 肾脏近曲小管上皮细胞 高血压 肾脏 -
高血压发生中多巴胺D4受体对肾脏近曲小管细胞血管紧张素Ⅱ1型受体的异常调控
目的 研究多巴胺D4受体对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞上血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)表达的异常调控在原发性高血压(EH)发生中的作用.方法 以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠的RPT细胞株作为研究对象,采用免疫印迹法测定刺激D4受体后AT1R的表达变化,并观察其作用机制及信号途径.结果 D4受体激动剂PD168077(10-64mol/L,24 h)刺激D4受体可明显抑制WKY大鼠RPT细胞AT1R的表达,该作用呈现浓度和时间依赖性关系;PD168077对AT1R表达的抑制作用可被D4受体特异性阻断剂L745870(10-6mol/L)所阻断;相反,在EH状态下这种作用受损,PD168077反而增加AT1R的表达.在钙通道拮抗剂尼卡地平存在的情况下D4受体对WKY细胞AT1R的抑制作用被阻断,提示D4受体对AT1R的下调作用可能通过钙通道途径发生影响.结论 D4受体对AT1R蛋白表达具有抑制作用,该作用受损可能在高血压的发生、发展过程中发挥一定作用.
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多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管上皮细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影响
目的 研究多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影响及其机制.方法 以WKY大鼠的RPT细胞株作为研究对象,测定多巴胺D_4受体激动剂PD168077对RPT细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影响,硝酸还原酶法检测一氧化氮含量.结果 PD168077能明显降低RPT细胞Na~+-K~+-ATP酶的活性,该作用呈浓度和时间依赖性.多巴胺D_4受体拮抗剂L745870(10~(-6) mol/L)可阻断PD168077对RPT细胞Na~+-K~+-ATP酶活性的抑制.与对照组比较,PD168077刺激RPT细胞15 min后,一氧化氮的合成含量明显升高;一氧化氮合成酶抑制剂可以阻断多巴胺D_4受体对Na~+-K~+-ATP酶的抑制效应,提示一氧化氮途径可能参与了多巴胺D_4受体对RPT细胞Na~+-K~+-ATP酶的抑制作用.结论 多巴胺D_4受体能够抑制WKY大鼠RPT细胞Na~+-K~+-ATP酶的活性,该作用可能与一氧化氮途径有关.
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多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管上皮细胞胰岛素受体表达和功能的影响
目的 研究多巴胺D_4受体对肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞胰岛素受体表达和功能的影响.方法 以RPT细胞株为研究对象,采用免疫印迹法测定D_4受体激动剂PD168077刺激D_4受体后胰岛素受体的表达变化,并探讨其作用机制.结果 D_4受体激动剂PD168077(10~(-7)mol/L,24 h)可明显抑制WKY大鼠RPT细胞胰岛素受体的表达,该作用呈现浓度和时间依赖性关系.PD168077对胰岛素受体表达的抑制作用可被D_4受体特异性拮抗剂L745870(10~(-6)mol/L)所阻断.与单用胰岛素相比,在PD168077(10~(-7) mol/L,24 h)预先刺激的情况下,胰岛素对Na~+-K~+-ATP酶活性的刺激作用降低了39%(P＜0.05).钙离子通道阻断剂尼卡地平(10~(-7)mol/L)可以阻断PD168077对RPT细胞胰岛素受体的抑制作用.结论 D_4受体对胰岛素受体蛋白表达和功能具有抑制作用,此作用可能通过钙离子通道发挥影响.
关键词： D_4多巴胺受体 胰岛素受体 肾脏近曲小管上皮细胞 血压 -
多巴胺D3受体对SHR大鼠肾脏内皮素B受体的异常调节在高血压发生中的作用
目的 探讨多巴胺D3受体对肾脏内皮素B(ETB)受体表达及功能的调节与高血压(EH)发生的关系.方法 分别以D3多巴胺受体基因敲除(D3-/-)小鼠和肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)株为研究对象,观察刺激D3受体后ETB受体蛋白表达和功能的变化,D3受体的蛋白表达采用免疫印迹测定,ETB受体的功能采用Na+-K+-ATP酶活性表示.结果 D3-/-小鼠肾脏皮质ETB受体的蛋白表达(0.8±0.2)DU明显低于对照小鼠[(1.2±0.1)DU,P＜0.05,n=5];D3受体兴奋剂PD128907(10-7 mol/L·24 h)刺激D3受体可增加Wistar-Kyoto(WKY)大鼠RPT细胞ETB受体的表达,却抑制自发性高血压(SHR)大鼠ETB受体的表达[WKY:(对照1.0±0.1比PD128907:1.5±0.1)DU;SHR:(对照:1.0±0.1比PD128907:0.7±0.2)DU;n=9,P＜0.05].用ETB受体激动剂BQ3020(10-8 mol/L·15 min)刺激ETB受体可明显降低WKY大鼠RPT细胞的Na+-K+-ATP酶的活性,但在SHR的RPT细胞,这种抑制作用却丧失;基础状态下SHR的Na+-K+-ATP酶活性明显高于WKY大鼠.预先刺激D3受体均可使ETB受体对Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用进一步加强,但这种作用在WKY的RPT细胞明显强于SHR的RPT细胞(下降幅度SHR:9.1%比WKY:16.9%).结论 D3受体通过对ETB受体蛋白表达的调节作用,从而调控ETB受体的功能,D3/ETB受体之间的异常调节参与了EH发生的发病机制.
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内皮素B受体对肾近曲小管上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响
目的 探讨内皮素B(ETB)受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响和机制.方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠RPT细胞为研究对象,Na+-K+-ATP酶活性采用哇巴因法进行测定.结果 ETB受体激动剂BQ3020能明显降低Na+-K+-ATP酶的活性,这一抑制作用呈浓度和时间依赖性,BQ3020 10-8 mol/L刺激15 min达大效应,下降幅度达36.1%;用细胞膜钙通道阻断剂尼卡地平预先刺激细胞后,能够阻断ETB受体对Na+-K+-ATP酶的抑制效应;在无钙状态下,ETB受体激动剂BQ3020对Na+-K+-ATP酶的抑制效应丧失.结论 ETB受体在RPT处通过降低Na+-K+-ATP酶活性调节离子转运;细胞外钙内流参与了ETB受体对Na+-K+-ATP酶活性抑制作用的信号途径.
关键词： 内皮素B受体 肾脏近曲小管上皮细胞 Na+-K+-ATP酶 -
多巴胺D3受体对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D4受体表达和功能的影响
目的:观察多巴胺D3受体(D3受体)对大鼠肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞多巴胺D4受体(D4受体)表达和功能的影响.方法:以Wistar-Kyoto(WKY)大鼠RPT上皮细胞为研究对象,利用免疫印迹法观察D3受体激动剂PD128907刺激D3受体后D4受体表达的变化;采用哇巴因法测定Na+-K+-ATP酶(ATP为三磷酸腺苷)活性,观察D3受体激动剂PDl28907(10-7mol/L,24 h)预先作用后,D4受体激动剂PD168077(10-7 mol/L,15 min)对Na+-K+-ATP酶活性的影响.同时,探讨D3受体激动剂PDl28907影响D4受体表达的作用机制.结果:D3受体激动剂PDl28907刺激可明显增强RPT上皮细胞中的D4受体蛋白表达,该作用呈时间与浓度依赖性关系.D3受体激动剂PDl28907对D4受体蛋白表达的增强作用可被D3受体特异性抑制剂U99194A(10-6 mol/L)所阻断.磷脂酶C抑制剂U73122存在的情况下,D3受体激动剂PD128907刺激D3受体后对D4受体的促进表达效应受到显著抑制.与单用D4受体激动剂PD168077相比,在PDl28907(10-7 mol/L,24 h)预先刺激的情况下,D4受体激动剂PD168077对Na+-K+-ATP酶活性的抑制作用有所增强.结论:D3受体对大鼠RPT上皮细胞上D4受体表达和功能具有增强作用,此作用可能通过磷脂酶C信号途径发挥影响.
关键词： 多巴胺D3受体 多巴胺D4受体 肾脏近曲小管上皮细胞 -
AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响
目的 研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响.方法 以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42t12(10-9～10-7mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7mol/L)作用不同时间(8、16、24h),应用Western blotting和RT-PCR法检测AT1受体蛋白和mRNA表达的改变.采用CGP42112(10- 7mol/L)预先作用24h,观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下Na+-K+ -ATP酶活性的影响；比较CGP42112(10-7mol/L)作用30min与作用24h后洗脱2h,Na+ -K+ -ATP酶活性的差异.结果 CGP42112作用于AT2受体后可明显抑制RPT细胞AT1受体蛋白的表达,且呈现一定的浓度与时间依赖性.CGP42112(10-7mol/L)能够抑制AT1受体mRNA的表达水平.与AngⅡ单独作用比较,CGP42112(10 7mol/L)预处理24h可使AngⅡ(10-11mol/L)增强Na+ -K+- ATP酶活性的效应明显降低.CGP42112(10 7mol/L)作用30min后,Na+ -K+ -ATP酶活性显著降低；但作用24h洗脱后2h,Na+-K+ -ATP酶活性与对照组比较无明显差异.结论 AT2受体能够抑制SHR大鼠RPT细胞AT1受体的表达及其介导的Na+ -K+ -ATP酶活性增强的效应.
关键词： AT2受体 AT1受体 自发性高血压大鼠 肾脏近曲小管上皮细胞 -
乙酰唑胺对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞作用的差异蛋白分析及其与AQP1抑制的关系
目的研究乙酰唑胺抑制大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水孔蛋白1(aquaporin-1,AQP1)表达的内源性机制.方法将原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞分为两组,一组给予1×10-5 mol*L-1乙酰唑胺,另一组为阴性对照.待细胞长至亚融合状态时裂解细胞,用等电聚焦电泳对裂解物进行差异蛋白筛选,并对差异蛋白作肽质量指纹谱鉴定.结果给乙酰唑胺后细胞中出现两个差异蛋白,其中等电点(pI)为3.8的蛋白给药后的表达减少,数据库检索发现其氨基酸序列与来源于大鼠肝脏和睾丸的刷状缘肌球蛋白有21.4%的相似性;而与来源于大鼠脑的糖原磷酸化酶有27%相似性.另外一条pI为5.5的蛋白被诱导增多,它与来源于大鼠肺脏的α亚型磷脂酰肌醇转移蛋白的相似性为20%.结论乙酰唑胺可能通过影响pI 3.8蛋白或pI 5.5蛋白的表达来抑制AQP1的基因表达.
关键词： 乙酰唑胺 水孔蛋白 肾脏近曲小管上皮细胞 肽质量指纹谱 -
钠依赖的葡萄糖转运蛋白2及其抑制剂在糖尿病治疗中的研究进展
肾脏近曲小管上皮细胞管腔侧钠依赖的葡萄糖转运蛋白2(Na~+-glucose cotransporter 2,SGTL2)在调节人体血糖水平稳定的过程中起重要作用.
