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IL-21受体在溃疡性结肠炎中的表达及对促炎症细胞因子分泌的诱导作用
目的:探讨IL-21对UC患者外周血和肠黏膜固有层组织内淋巴细胞的免疫病理调节.方法:收集28例UC患者和22例健康成人外周血标本和肠黏膜活检标本, 分离外周血单个核淋巴细胞(PBMC)和肠黏膜固有层单个核淋巴细胞(LPMC), 利用流式细胞仪检测IL-21R在CD4+、CD8+ T细胞、B细胞和NK细胞表面表达. 培养PBMC和LPMC, 使用IL-21和抗CD3单抗体外刺激, 48 h后收集上清液,使用ELISA检测促炎症细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2)分泌, 分析IL-21在疾病发展过程中的免疫病理作用.结果:UC患者外周血和肠黏膜固有层组织内CD4+、CD8+ T细胞、CD20+ B细胞和CD56+NK细胞表达IL-21R水平比健康者显著升高(PBMC:8.42±2.14 vs 3.46±0.54, 10.35±2.17vs 5.28±2.2, 7.27±1.15 vs 2.35±0.41, 12.55±3.12 vs 5.45±1.06; LPMC:22.44±3.46 vs6.26±1.15, 24.48±4.57 vs 6.87±1.02, 16.24±3.10 vs 5.56±1.44, 23.54±4.12 vs 8.45±1.68, 均P<0.05). 体外培养PBMC或LPMC, 使用IL-21刺激, 发现IL-21可显著诱导UC患者的PBMC和LPMC激活, 并分泌高水平的TNF-α和IFN-γ(346±72 vs 120±27, 3048±426 vs1182±242; 625±113 vs 154±35, 3827±418vs 1520±304, 均P<0.05).结论:IL-21R参与肠黏膜炎症损伤, 阻断IL-21生物学效应可能治疗UC的发生.
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相对定量检测HIV/AIDS病人PBMCs中TIGIT mRNA表达水平的方法建立
目的 建立检测人外周血单个核淋巴细胞(PBMCs)中T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)信使核糖核酸(mRNA)表达水平的相对定量方法,并探讨TIGIT在艾滋病病毒(HIV)感染者/艾滋病(AIDS)病人(简称HIV/AIDS病人)临床监测中的意义.方法 设计基因TIGIT引物3对,并利用超声波-煮沸法提取人PBMCs总RNA,选用管家基因GAPDH作为内参,然后用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行反转录及扩增TIGIT基因.利用软件测定电泳条带的灰度值(IOD),计算TIGIT mRNA的相对表达量.结果 超声波-煮沸法提取的RNA纯度(A260/A280=1.71±0.056)优于超声波法(A260/A280=1.51±0.023)和煮沸法(A260/A280=1.375±0.078);筛选出扩增条带清晰且单一的TIGIT引物;相对定量结果表明,TIGIT mRNA在HIV/AIDS病人中的相对表达量均数(0.520 4±0.067)显著低于健康人群(1.383±0.093),差异有统计学意义(t=7.206,P=0.0167).结论 所建立的相对定量RT-PCR检测方法具有成本低、简单易行的优点,可应用于检测HIV/AIDS病人外周血中TIGIT mRNA的表达差异.
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糖尿病合并甲状腺功能减退患者糖皮质激素受体变化的意义
目的:探讨糖尿病合并甲状腺功能减退患者外周血淋巴细胞糖皮质激素受体(GR)改变的临床意义.方法:糖尿病合并甲状腺功能减退13例,男8例,病程 (6.7±10)年,年龄(36±20)岁;女5例,病程(8.8±9.6)年,平均年龄(36±22)岁.应用放射配体结合法(一点法)检测其外周血单个核淋巴细胞(MNL)GR的含量,选择年龄相匹配的13名健康人作为对照组,用放免法测其血浆皮质醇含量.结果:患者组皮质醇浓度为 (0.46±0.18) μmol/L,与对照组的(0.43±0.09) μmol/L无显著差异.患者MNL GR为(3 538±1 284)sites/cell,显著低于对照组的 (5 442±1 170)sites/cell(P<0.05).结论:推测糖尿病合并甲状腺功能减退患者GR减少可能与该病发生发展有一定关联.
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IL-21诱导类风湿关节炎外周血单个核淋巴细胞促炎症细胞因子分泌研究
[目的]IL-21受体在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核淋巴细胞(PBMC)表面表达升高,本文分析IL-21对RA患者PBMC的免疫调节作用,并探讨其在疾病发生过程中的免疫病理作用.[方法]收集24例RA患者和20例健康成人对照组的外周血标本,分离PBMC,体外细胞培养,使用抗CD3+单克隆抗体和人重组IL-21刺激.48 h后收集培养上清液,使用ELISA检测促炎症细胞因子的分泌,并探讨IL-21在疾病发展过程中的作用.[结果]体外培养48 h后,检测上清液中促炎症细胞因子水平,主要包括TNF-α、IFN-γ和IL-2,结果发现RA患者外周血PBMC分泌TNF-α、IFN-γ和IL-2水平比健康者比较显著升高(P<0.005).RA患者接受有效药物治疗后,发现PBMC分分泌上述促炎症细胞因子水平显著下降(P<0.05).[结论]IL-21可显著诱导RA患者PBMC激活,并分泌大量促炎症细 胞因子,提示IL-21在关节炎症病变过程中起着重要作用,阻断体内IL-21的生物学活性可以用于治疗RA的发生.
关键词： 类风湿关节炎 外周血单个核淋巴细胞 白细胞介素-21 促炎症细胞因子 -
类风湿关节炎患者外周血单个核淋巴细胞IL-21受体表达及意义
[目的]检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体(IL-21R)表达,探讨其在疾病发生过程中的免疫病理作用. [方法]收集26例RA患者和18例健康成人对照外周血标本,分离外周血单个核淋巴细胞,利用流式细胞仪检测IL-21R在外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表面表达,分析它们在疾病发展过程中的作用. [结果]RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞和NK细胞表达IL-21R水平比健康者比较显著升高(P<0.05).RA患者接受有效的药物治疗,待症状控制后,分析发现RA患者外周血CD4+、CD8+T细胞、B细胞、NK细胞IL-21R水平呈明显下降(P<0.05). [结论]RA患者外周血单个核淋巴细胞表达IL-21R水平明显升高,提示IL-21R在关节炎症病变过程中起着重要作用,可能诱导关节滑模炎症病变,参与关节滑膜组织及全身免疫病理损伤.
关键词： 类风湿关节炎 外周血单个核淋巴细胞 白细胞介素-21 受体 -
慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞不同洗涤方法对HBV DNA检测的影响
目的:慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞(Peipberal blood mononuclear cells,PBMC)不同洗涤方法对HBVDNA检测的影响.方法:淋巴细胞分离液常规密度梯度法分离1例血清HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者PBMC后,分别采用常规洗涤法和改良洗涤法(后者即在常规洗涤法的基础上第2、4次洗涤前不重悬细胞,直接加入洗液后离心),计算细胞收获得率和细胞存活率,荧光定量PCR法检测1、3、5次洗液样本和细胞样本的HBVDNA,重复实验3次.结果:常规法第1、3、5次洗液样本HBVDNA均阳性,改良法洗涤5次后洗液样本HBVDNA均阴性;改良法洗涤的细胞得率和细胞存活率分别为95%和98%,常规法洗涤的细胞得率和细胞存活率分别为71%和83%;不论常规洗涤法和改良洗涤法收获的PBMC均可检出HBVDNA.结论:慢性乙型肝炎患者PBMC改良洗涤法优于常规洗涤法,适用于PBMC中HBVDNA荧光定量PCR检测.
关键词： HBVDNA 外周血单个核淋巴细胞 PCR
