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胎儿胰腺来源的单克隆SP细胞具有间充质的表型特征
目的:探索一种新的人胰腺干细胞分离纯化体系,并对经这一体系所获细胞的特性进行研究.方法:首先从胎儿胰腺中分离得到胰岛样细胞簇(ICCs),进而从ICCs中得到单层上皮样细胞,并传代培养,第6代细胞通过荧光激活细胞分选(FACS)技术分选出sidepopulation(SP)细胞和非SP细胞后进行单克隆细胞培养.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和FACS分析,研究单克隆SP细胞的体外增殖特性和表面标志.结果:SP细胞占全部细胞的0.22%,SP细胞的克隆形成率为2.7%,而非SP细胞没有克隆形成.SP克隆能够在体外传15代以上.RT-PCR显示单克隆SP细胞可表达ATp结合盒转运子G2(ABCG2)和转录因子OCT4.FACS分析显示CD44,CD147均为阳性,而CD34,CD38,CD45,CD71,CD133及HLA-DR均为阴性.结论:胎儿胰腺来源的单克隆SP细胞在体外具有高度的增殖潜能,并具有与骨髓间充质干细胞相同的表型特征.
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脐带血造血干/祖细胞罗丹明123荧光染色及其意义
目的 探讨人脐带血造血干,祖细胞(UCB-HSPC)罗丹明123(Rh0123)荧光染色特点及其应用价值.方法 采用密度梯度离心法获取脐带血单个核细胞(UCB-MNC),用含终浓度为0.1 μg/ml Rh0123的2%胎牛血清-PBS液、37℃下孵育UCB-MNC细胞(细胞浓度为106/ml)20 min,之后用Lin抗体(PE标记的CD19、CD13、CD2、CD8、CD3)及造血干,祖细胞(HSPC)标志抗体CD34-PerCP和CD38-APC标记UCB-MNC细胞,流式细胞仪分析HSPC亚群及其Rh0123染色特点.结果 流式细胞术检测结果表明,UCB-Lin-MNC中的HSPC比例高于MNC中约6倍;UCB-CD34+CD38+造血祖细胞(HPC)的Rh0123染色平均荧光强度值为23.55±2.40,是UCB-CD34+CD38-造血干细胞(HSC)值10.2±21.03的2倍多(P<0.01).结论 UCB-Lin-MNC中富含HSPC;UCB-HSC的Rho123染料聚集能力明显低于UCB-HPC,提示Rh0123拒染法可作为进一步纯化人UCB-HSC的新手段.
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利用荧光激活细胞分选技术获取荧光蛋白标记肾小球足细胞
目的:本实验旨在以双荧光蛋白标记的转基因小鼠为动物模型,建立适用于小鼠荧光标记足细胞的分选方法. 方法:对现有的常规实验方法加以优化,在使用报告基因小鼠的前提下辅以更有效的磁珠灌注法提取肾小球,进一步制备单细胞悬液进行荧光激活细胞分选(FACS),获得绿色荧光蛋白标记足细胞.利用荧光显微镜及荧光定量PCR分析证实分选所得足细胞基因表达特性. 结果:通过本实验方法可更有效制备肾小球单细胞悬液和高纯度的足细胞,每只小鼠可提取超过3×105的足细胞,占细胞总量的14.93％,质量可满足后续转录谱和蛋白组学等相关研究. 结论:应用FACS技术可有效地从荧光标记小鼠中提取高纯度足细胞,为足细胞基因组学、蛋白组学水平的研究奠定基础.
