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IL-24融合蛋白表达载体的构建及其对人小肠癌细胞的生长抑制作用
目的:构建人白细胞介素-24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.研究IL-24融合蛋白对人小肠癌细胞(HIC)的生长抑制作用.方法:用PCR从质粒TRAP-hIL-24中扩增人IL-24 cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Westem blot对表达产物进行鉴定.提取并纯化IL-24融合蛋白,以不同浓度与HIC细胞共培养72 h,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组、HIC细胞对照组及空白孔,采用MTT法检测各组人小肠癌细胞的体外增殖.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致,融合蛋白为Mr53000,GST蛋白为Mr29000.IL-24融合蛋白以浓度依赖性的关系抑制HIC细胞的生长,并且在20和40mg/L时的抑制率明显高于GST蛋白.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在EcoliBL21中表达.IL-24融合蛋白对HIC细胞生长有抑制作用.
关键词： IL-24 原核表达 GST-IL-24融合蛋白 小肠癌细胞系HIC -
白细胞介素-24基因重组表达载体的构建及原核表达
目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.GST-IL-24融合蛋白能够抑制THP-1细胞的生长.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在E.coli BL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL-24的功能奠定了基础.
关键词： 白细胞介素-24 原核表达 GST-IL-24融合蛋白
