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NO体外对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响
目的:探讨一氧化氮(NO)对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响,以研究NO对肠黏膜屏障的作用机制.方法:将NO的供体Sin1与肠上皮细胞株Caco-2共培养24 h,采用MTT方法观察NO对肠上皮细胞的作用,并分别提取细胞蛋白和总RNA,采用免疫蛋白印迹(Western blot)蛋白半定量方法和实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)方法检测不同NO浓度对Caco-2细胞表达紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达的影响.结果:随着Sin1浓度升高(125,250,500和1000μmol/L)NO对细胞的杀伤作用产生并逐渐增大,Occludin蛋白表达量和mRNA的相对表达量与无Sin1刺激时蛋白及mRNA的表达量相比明显降低(蛋白:375±0.5,374±0.8,363±0.3,363±0.7 vs 398±0.7;mRNA:0.689±0.01,0.578±0.09,0.554±0.03,0.619±0.04 vs 1,均P＜0.01).结论:NO可直接损伤肠上皮细胞,同时以剂量依赖形式在蛋白和分子水平影响紧密连接蛋白Occludin的表达.
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低氧训练对大鼠小肠黏膜屏障功能的影响及其机制
目的:探讨低氧训练对大鼠小肠黏膜屏障功能的作用和机制.方法:5周龄雄性SD大鼠80只,随机分为常氧对照组(C组,n=20)、常氧训练组(E组,n=20)、低氧对照组(HC组,n=20)、低氧训练组(HE组,n=20),通过人工低氧和游泳训练模拟高原训练,分别观察2周、6周后大鼠小肠黏膜的组织结构和超微结构,检测血浆中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-La)以及肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)的含量和小肠黏膜中紧密连接蛋白occludin mRNA的表达量.结果:(1)实验6周后,透射电镜观察显示,与常氧对照组相比,常氧训练组大鼠小肠微绒毛较稀疏,且排列不整齐,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,线粒体数量明显减少,嵴模糊;低氧对照组小肠微绒毛长度显著缩短,排列较为紊乱,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,少量线粒体变性;低氧训练组小肠微绒毛数量明显减少,长度明显缩短,肠绒毛出现倒伏,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,细胞结构不清晰,线粒体变性,部分线粒体嵴模糊、甚至消失.(2)2周后,运动训练可显著减少小肠绒毛数量(P＜0.01),显著提高血浆DAO、D-La(P＜0.05)以及小肠组织中NF-κB含量(P＜0.01);而低氧暴露可显著降低小肠组织occludin mRNA表达(P＜0.01),显著提高血浆DAO、D-La(P＜0.05)以及小肠组织TNF-α(P＜0.05)、NF-κB(P＜0.01)含量;低氧暴露联合运动训练对进一步减少小肠绒毛数量、长度和occludin mRNA表达,升高血浆DAO、D-La以及小肠组织TNF-α、NF-κB含量均无显著的交互作用(P＞0.05).(3)6周后,运动训练及低氧暴露均显著降低小肠绒毛数量(P＜0.01),增加血浆DAO、D-La含量(P＜0.01)以及小肠组织中TNF-α(P＜0.01,P＜0.05)和NF-κB含量(P＜0.01),显著降低小肠组织中occludin mRNA的表达(P＜0.05);且低氧联合运动训练对进一步减少小肠绒毛数量、长度(P＜0.01,P＜0.05),增加血浆中DAO、D-La含量(P＜0.01)具有显著的交互作用.结论:(1)大强度运动训练以及低氧暴露均能导致肠道黏膜屏障功能受损,其损害程度与训练及低氧暴露时间有关.(2)低氧暴露以及大强度训练可能是通过增加小肠内TNF-α、NF-κB的含量从而降低紧密连接蛋白occludin的表达,终导致小肠通透性增加,肠道黏膜屏障功能受损.
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慢性乙醇摄取对急性肺损伤大鼠气道上皮细胞间连接蛋白occludin和E-cadherin及屏障功能的影响
目的 观察慢性乙醇摄取及内毒素处理对大鼠气道上皮屏障功能及紧密连接(TJ)特征性蛋白occludin和黏附连接(AJ)蛋白E-cadherin的影响.方法 将40只SD大鼠随机均分为对照组、慢性乙醇摄取组(乙醇组)、内毒素处理组(LPS组)、慢性乙醇摄取合并内毒素处理组(乙醇+LPS组).利用荧光示踪剂异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FD4)测定支气管肺泡上皮的通透性;免疫荧光共聚焦显微镜下观察大鼠气道上皮occludin和E-cadherin蛋白分布及表达;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织中occludin和E-cadherin的蛋白及mRNA表达;并观察肺组织病理学改变.结果 乙醇组及LPS组支气管肺泡上皮通透性均较对照组明显增高(P均＜0.05);乙醇+LPS组支气管肺泡上皮的通透性进一步增高(P＜0.01).occludin和E-cadherin蛋白在对照组大鼠气道上皮呈连续、均匀的胞膜及胞质中表达;在乙醇组、LPS组胞膜呈部分断裂、不连续的表达,且胞膜和胞质的表达下降;在乙醇+LPS组的表达显著下降,且胞膜表达呈明显的断裂甚至消失.Western blotting和RT-PCR显示,乙醇组和LPS组肺组织中occludin和E-cadherin的蛋白及mRNA表达均较对照组明显下降(P均＜0.05);乙醇+LPS组中蛋白及mRNA表达下降为明显,与其余各组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 慢性乙醇摄取通过降低TJ蛋白occludin和AJ蛋白E-cadherin的蛋白及mRNA表达水平,并干扰各蛋白在胞膜上的定位,终导致气道上皮屏障功能受损,加重内毒素诱导的急性肺损伤.
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子宫内膜样腺癌组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达及关联性
目的 检测子宫内膜样腺癌中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达特征,关注其临床意义.方法 观察组为69例子宫内膜样腺癌术后患者,对照组为28例子宫内膜复杂性增生伴不典型增生患者,正常对照组为28例子宫肌瘤行子宫全切后的增生期子宫内膜组织,3组中Occludin和ZO-1的表达均应用免疫组化方法检测.结果 3组中Occludin和ZO-1的表达差异有统计学意义(P<0.01).观察组中Occludin和ZO-1的表达与肿瘤的转移密切相关,Occludin的表达与肿瘤的浸润深度密切相关,二者均与患者的年龄、分化程度无相关性.相关分析显示观察组中Occludin和ZO-1的表达呈正相关.结论 子宫内膜样腺癌中存在着明显的Occludin和ZO-1的低表达,两种蛋白异常表达在肿瘤的形成和进展中有一定的作用,二者有明显正向协同作用.
关键词： 子宫内膜样腺癌 紧密连接蛋白Occludin ZO-1 -
小儿急性肠梗阻肠坏死A2B腺苷受体、紧密连接蛋白Occludin的表达及临床意义
目的 研究小儿急性肠梗阻A2B腺苷受体、紧密连接蛋白Occludin的表达及临床意义.方法 选择医院小儿科收治的30 例急性肠梗阻肠坏死患儿作为治疗组,30 例消化道畸形患儿作为对照组.两组患儿均行肠切除肠吻合术.检测方法:①免疫组化方式检测肠管黏膜上皮细胞中A2B腺苷受体( A2BAR)、紧密连接蛋白的表达;②蛋白印记(WB)检测两组患儿肠黏膜上皮细胞中p38丝裂原活化蛋白酶(p38MAPK)以及磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)的表达;③酶联免疫吸附测定法( ELIA)检测术前以及术后7 d 血清中的血清肿瘤坏死因子 α (TNF-α)含量.结果 治疗组患儿A2BAR灰度值(139.33 ±34.06)低于对照组(177.60 ±11.58,P＜0.01);治疗组患儿Occludin蛋白灰度值(198.63 ±14.23)高于对照组(175.64 ±18.17,P＜0.01);与对照组比较,治疗组患儿的p38MAPK表达比较差异未见统计学意义(P＞0.05),p-p38MAPK的表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05);术前治疗组患儿TNF-α浓度为(95.30 ±9.39)pg/ml,高于对照组的(70.57 ±5.84)pg/ml(P＜0.05);治疗后7 d治疗组患儿TNF-α浓度与对照组比较差异未见统计学意义(P＞0.05).结论 小儿急性肠梗阻肠坏死导致缺血缺氧,促进了细胞的凋亡及TNF-α释放,造成A2BAR表达量增多,紧密连接蛋白表达下降,这可能是导致肠道细菌移位的原因.
