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低氧训练对大鼠小肠黏膜屏障功能的影响及其机制
目的:探讨低氧训练对大鼠小肠黏膜屏障功能的作用和机制.方法:5周龄雄性SD大鼠80只,随机分为常氧对照组(C组,n=20)、常氧训练组(E组,n=20)、低氧对照组(HC组,n=20)、低氧训练组(HE组,n=20),通过人工低氧和游泳训练模拟高原训练,分别观察2周、6周后大鼠小肠黏膜的组织结构和超微结构,检测血浆中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-La)以及肠组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)的含量和小肠黏膜中紧密连接蛋白occludin mRNA的表达量.结果:(1)实验6周后,透射电镜观察显示,与常氧对照组相比,常氧训练组大鼠小肠微绒毛较稀疏,且排列不整齐,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,线粒体数量明显减少,嵴模糊;低氧对照组小肠微绒毛长度显著缩短,排列较为紊乱,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,少量线粒体变性;低氧训练组小肠微绒毛数量明显减少,长度明显缩短,肠绒毛出现倒伏,黏膜上皮细胞之间的间隙变宽,细胞结构不清晰,线粒体变性,部分线粒体嵴模糊、甚至消失.(2)2周后,运动训练可显著减少小肠绒毛数量(P＜0.01),显著提高血浆DAO、D-La(P＜0.05)以及小肠组织中NF-κB含量(P＜0.01);而低氧暴露可显著降低小肠组织occludin mRNA表达(P＜0.01),显著提高血浆DAO、D-La(P＜0.05)以及小肠组织TNF-α(P＜0.05)、NF-κB(P＜0.01)含量;低氧暴露联合运动训练对进一步减少小肠绒毛数量、长度和occludin mRNA表达,升高血浆DAO、D-La以及小肠组织TNF-α、NF-κB含量均无显著的交互作用(P＞0.05).(3)6周后,运动训练及低氧暴露均显著降低小肠绒毛数量(P＜0.01),增加血浆DAO、D-La含量(P＜0.01)以及小肠组织中TNF-α(P＜0.01,P＜0.05)和NF-κB含量(P＜0.01),显著降低小肠组织中occludin mRNA的表达(P＜0.05);且低氧联合运动训练对进一步减少小肠绒毛数量、长度(P＜0.01,P＜0.05),增加血浆中DAO、D-La含量(P＜0.01)具有显著的交互作用.结论:(1)大强度运动训练以及低氧暴露均能导致肠道黏膜屏障功能受损,其损害程度与训练及低氧暴露时间有关.(2)低氧暴露以及大强度训练可能是通过增加小肠内TNF-α、NF-κB的含量从而降低紧密连接蛋白occludin的表达,终导致小肠通透性增加,肠道黏膜屏障功能受损.
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VC与VD3联合应用对结肠炎豚鼠肠粘膜保护作用
目的 探讨不同剂量维生素C(VC)联合维生素D3(VD3)对结肠炎豚鼠肠粘膜通透性的影响.方法 24只雄性Dunkin-Hartley豚鼠适应性喂养7d后,按体重随机分为4组,每组6只:对照组(100 mg/kg VC)、模型组(100 mg/kg VC)、低、高剂量VC组(10、200 mg/kg VC),采用改良豚鼠灌胃方法给予各组豚鼠剂量为200 IU/kg的VD3,同时按组别给予相应剂量VC,连续5周;模型组、低、高剂量VC组豚鼠自由饮用2％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液4d,对照组豚鼠自由饮用蒸馏水.采用放射免疫法检测血清中25-(OH)D3和1,25-(OH)2D3水平,酶联免疫法检测血清中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸和内毒素含量;取远端结肠组织,常规石蜡包埋,苏木素-伊红(HE)染色,显微镜下观察,进行组织病理学评分.结果 与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠结肠大体形态评分和组织病理学评分均明显升高(P＜ 0.05);与对照组比较,模型组、低、高剂量VC组豚鼠血清中DAO含量[分别为(252.02±1.74)、(253.06±2.54)(250.60±0.82)U/mL]均明显升高(P＜0.05),低、高剂量VC组豚鼠血清中内毒素水平[分别为(109.74±13.37)、(111.58±12.49)EU/mL]均明显降低(P＜0.05).结论 在一定剂量的维生素D3基础上,VC对结肠炎豚鼠肠粘膜屏障功能具有一定保护作用.
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参苓白术散对脾虚泄泻幼鼠肠粘膜屏障的修复作用
目的:研究参苓白术散对脾虚泄泻幼鼠肠粘膜屏障的影响.方法:采用大黄泄下法制造脾虚泄泻大鼠模型,以不同剂量的参苓白术散进行干预,观察大鼠小肠粘膜组织病理形态学改变、检测其血浆D-乳酸、二胺氧化酶的水平变化.结果:参苓白术散有显著的止泻作用,能明显改善脾虚泄泻大鼠的一般状态,降低血浆D-乳酸、二胺氧化酶水平,与空白对照组相比具有统计学差异;光镜下模型组大鼠小肠粘膜部分萎缩,可见绒毛脱落,上皮细胞坏死、脱落,粘膜内散在淋巴细胞浸润,参苓白术散各剂量组均有一定的改善.结论:参苓白术散能减轻模型大鼠肠粘膜损伤、降低肠粘膜通透性,对脾虚泄泻幼鼠肠粘膜屏障有一定的修复和保护作用.
关键词： 参苓白术散 脾虚泄泻 肠粘膜屏障 D-乳酸 二胺氧化酶(DAO) -
艾司洛尔对脓毒症大鼠肠道保护作用的实验研究
目的 研究短效β1受体阻滞剂艾司洛尔对脓毒症大鼠肠道损伤的保护作用.方法 72只SD雄性大鼠,随机分为三组(n=24),即假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、艾司洛尔组(ES组),各组随机抽取6只观察7d生存情况,剩余18只又随机分为6、12和24 h三个亚组,每个亚组6只.Sham组采用盲肠探查术,CLP、ES组均采用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立脓毒症模型.造模成功后均行左侧颈内静脉置管,Sham、CLP组持续微量泵泵入生理盐水1 mL/h,共计6h;ES组持续泵入艾司洛尔稀释液1 mL/h[15 mg/(kg·h)],共计6h.各亚组分别于术后6、12、24h处死大鼠,采用ELISA法测定血清儿茶酚胺、TNF-α,肠道组织DAO、i-FABP水平.光学显微镜下观察肠道组织病理变化.结果 ①术后6h,CLP、ES组血清儿茶酚胺水平与Sham组比较明显升高(P＜ 0.05),且ES组儿茶酚胺水平较Sham、CLP组明显升高(P＜0.05).术后12h,ES组儿茶酚胺水平与Sham组比较仍明显升高(P＜0.05);术后24 h,ES组儿茶酚胺水平与CLP组比较明显升高(P＜0.05).②术后6、12、24 h,CLP、ES组血清TNF-α水平与Sham组相比明显升高(P＜0.05),且各时间点ES组TNF-α水平也均比CLP组明显降低(P＜0.05).③术后6、12、24 h,CLP、ES组肠道组织DAO、i-FABP水平与Sham组相比明显降低(P＜0.05),且各时间点ES组DAO、i-FABP水平也均比CLP组明显升高(P＜0.05).④Sham组病理损伤轻,CLP组病理损伤程度重,ES组各时间点病理损伤均较CLP组明显减轻,较Sham组明显加重.⑤艾司洛尔能延长脓毒症大鼠生存时间,提高生存率.结论 艾司洛尔能促进儿茶酚胺分泌,抑制炎症因子释放,保护肠黏膜屏障,减轻肠组织损伤,且延长脓毒症大鼠生存时间.
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肠道耐受淤血-再灌注损伤的安全时限观察
目的 评估大鼠肠道淤血-再灌注损伤致肠黏膜屏障功能衰竭的安全时限,为临床提供实验依据.方法 将217只健康Wistar大鼠随机分为对照组、门静脉阻断20 min(PVO-20)、25 min(PVO-25)、30 min(PVO-30)、35 min(PVO-35)、40 min(PVO-40)组,进行门静脉血流持续阻断,造成肠道淤血;于再通后3 h、5 h、7 h、12 h、24 h、72 h分别观察动物存活情况、检测血D-乳酸、DAO;留取末段回肠,光镜下观察小肠组织病理形态学变化.结果 PVO-40组较PVO-35组大鼠死亡率明显增高(P<0.05);同一再灌注时间点,门静脉阻断时间越长,D-乳酸浓度与DAO含量升高越明显;再灌注后72 h,PVO-40组D-乳酸仍明显高于PVO-35组(P<0.05);再灌注后7 h、12 h、24 h,PVO-40组DAO均明显高于PVO-35组(P<0.01,P<0.05,P<0.05);再灌注后7 h、12 h、24 h、72 h,PVO-40组小肠组织损伤病理评分仍高于PVO-35组(P<0.05;P<0.01;P<0.01;P<0.01).结论 在本实验条件下,大鼠肠道耐受淤血-再灌注损伤的安全时限定为35 min.
关键词： 淤血-再灌注损伤 安全时限 D-乳酸 二胺氧化酶(DAO) -
脓毒症大鼠DAO与TNF-α变化研究
目的 研究TNF-α在脓毒症大鼠肠道损伤中的作用.方法 60只SD大鼠随机分成假手术组(n=30),脓毒症组(n=30).假手术组仅行盲肠探查术,脓毒症组采用CLP制作大鼠脓毒症模型.各组均于术后3、6、12、24与48 h时相点,经腹主动脉采血检测血清DAO、TNF-α水平.结果 血清DAO水平逐渐升高,于48 h时达到高值,高于假手术组(P<0.05);血清TNF-α水平在CLP术后即明显高于假手术组(P<0.05),在24 h达峰值,随后虽有下降,但仍显著高于假手术组(P<0.05).TNF-α与DAO具有正相关(r=0.897,P<0.05).结论 TNF-α的异常升高,可能在脓毒症大鼠肠道损伤中具重要作用.
关键词： 脓毒症 肠道损伤 二胺氧化酶(DAO) 肿瘤坏死因子-α -
急性胰腺炎患者血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平变化及意义
目的 观察急性胰腺炎(AP)患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、TOLL样受体(TLR)4、TLR9、二胺氧化酶(DAO)水平变化,并探讨其临床意义.方法 选择起病24h内AP患者59例,根据病情分为轻型AP(MAP)组26例、中度重症AP(MSAP)组17例、重症AP (SAP)组16例,同期选择健康体检者20例作为对照组.于入院24、48、72 h采用双抗体夹心免疫发光法测定血清HMGB1、TLR4、TLR9、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、DAO.结果 入院24、48 h,AP各组血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO、TNF-α、IL-6水平均高于对照组(P均＜0.05);入院72 h,MAP组血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平与对照组比较差异无统计学意义(P均＞0.05),但MSAP组、SAP组以上指标仍高于对照组(P均＜0.05).AP各组血清TNF-α、IL-6水平在入院24 h达峰值,血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平在入院48 h达峰值.SAP组各时间点血清HMGB1、TLR4、TLR9、TNF-α、IL-6、DAO水平均高于MSAP组与MAP组(P均＜0.05).AP患者血清HMGB1水平与DAO呈正相关(r=0.942,P＜0.05).结论 血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平可反映AP患者病情变化,HMGB1与DAO可能协同参与肠黏膜屏障损伤.
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颅脑火器伤对肠黏膜通透性的影响
目的:颅脑火器伤对肠黏膜通透性的影响.方法:选用40只成年健康雄性杂种犬,运用随机数字抽样法分成8组并造模:常温常湿正常血糖组(A组)、高温高湿高血糖组(B组)、常温常湿正常血糖颅脑火器伤组(C组)、常温常湿高血糖颅脑火器伤组(D组)、高温高湿正常血糖颅脑火器伤组(E组)、高温高湿高血糖颅脑火器伤组(F组)、常温常湿高血糖组(G组)、高温高湿正常血糖组(H组).标本采集:每组5只分别在剖腹后0h时、0.5h时、1.0h时、1.5h时、2.0h时五个时间点,切取距回盲部1～3 cm的末端回肠组织,快速将残端吻合并关腹,末端回肠组织制作成标本.采集每只实验犬开腹后0h时、0.5h时、1.0h时、1.5h时、2.0h时五个时间点的外周血标本.观察指标:采用ELISA方法定量检测每只实验犬上述五个时间点外周血中D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)的浓度.将末端回肠组织标本,用光学显微镜观察,进行肠黏膜损害指数评分,并进行肠黏膜损害指数与D-乳酸、DAO的浓度的相关性分析.用电子显微镜观察线粒体的受损程度,对线粒体进行评分,并进行线粒体的损伤指数与D-乳酸、DAO的浓度的相关性分析.结果:各组实验犬肠黏膜损害指数均随时间延长而递增,差异有统计学意义(P＜0.05);且肠黏膜损害指数与外周血中D-乳酸及DAO的浓度均呈现正相关.各组实验犬肠黏膜线粒体受损指数均随时间延长而递增,差异有统计学意义(P＜0.05);且线粒体受损指数与外周血中D-乳酸及DAO的浓度均呈现正相关.结论:颅脑火器伤可导致肠黏膜损害,且随时间延长而加重,引起肠黏膜通透性不断增加.
关键词： 颅脑火器伤 通透性 D-乳酸 二胺氧化酶(DAO) -
谷氨酰胺二肽对体外循环心脏手术患者肠粘膜屏障的保护作用
目的探讨体外循环(CPB)心脏手术对患者肠粘膜屏障的影响以及谷氨酰胺二肽(力太)对肠粘膜屏障的保护作用.方法 40例二尖瓣置换手术患者,随机分为对照组和力太组,力太组患者在手术当天和术后第1天给予力太,按体重0.5 mg/kg静脉输入.检测围术期患者血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、内毒素含量,进行统计学分析.结果 2组病例体外循环(CPB)开始后的上述指标均高于术前(P<0.05),力太组在CPB开始后的各时相点,上述指标均明显低于对照组(P<0.05).结论体外循环对心脏手术患者的肠粘膜屏障有损害,外源性丙氨酸-谷氨酰胺二肽(力太)对患者肠粘膜屏障有一定的保护作用.
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大黄素对急性胰腺炎大鼠相关炎性因子表达的影响
目的:观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型肠屏障功能保护作用机理.方法:雄性SD大鼠45只,随机(随机数字法)分为3组:假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP)、大黄素处理组(E组),每组15只.采用5％牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射制备大鼠SAP模型,E组在造模后30 min大黄素灌胃(20 mg·kg-),术后3、6、12 h分批剖杀大鼠,各时间点5只.检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、二胺氧化酶(DAO)水平,光镜观察胰腺组织病理变化,RT-PCR检测外周血单核细胞(PBMCs) Toll样受体4(TLR4) mRNA表达水平.多个样本均数比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验.结果:SAP组及E组均造模成功.SAP组、E组与SO组比较,胰腺组织病理学评分、单核细胞表面TLR4表达、血清TNF-d、IL-6、DAO水平均显著升高(P＜0.05);与SAP组比较,E组胰腺组织病理学评分、TLR4mRNA表达、TNF-α、IL-6、DAO水平均显著降低(P＜0.05).结论:大黄素治疗可通过下调TLR4mRNA表达,明显改善SAP肠屏障功能.
