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肝脏神经内分泌区室的研究进展
肝脏的祖细胞和肝脏星状细胞都具有神经内分泌的特征.祖细胞表达嗜铬粒蛋白-A、神经细胞黏附分子、甲状旁腺素相关肽、S-100蛋白、神经营养因子和其受体,肝脏星状细胞表达突触素、胶质纤维酸性蛋白、神经细胞黏附分子、nestin、神经营养因子和其受体.这种表型提示,这些细胞类型形成了可能受控于中枢神经系统的肝脏神经内分泌区室.我们证明了副交感神经系统促进了肝脏损伤后的祖细胞伸展,而去神经的移植肝脏和肝炎肝脏,其祖细胞数量都较原本的完全神经支配的肝脏为少,解释再生和瘢痕形成的神经控制机制是非常重要的.而且,对于再生机制的深入认识可能具有治疗学上的意义,甚至可能避免原位肝脏移植的必要.
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肝脏祖细胞的表型特征及生物学功能
肝脏祖细胞有双向分化潜能,在肝细胞严重受损和分裂增生受抑制时可向肝细胞和胆管上皮细胞分化.本文介绍了近年来肝脏祖细胞的表型特征和生物学功能研究进展,并对存在的问题进行讨论.
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乙型肝炎肝硬化患者肝组织中肝脏祖细胞激活特征的研究
目的 观察肝脏祖细胞(hepatic progenitor cells,HPCs)在乙型肝炎肝硬化患者肝组织中的激活特征,探讨HBV感染是否影响HPCs的激活.方法 以细胞角蛋白(CK7)为标记,对16例乙型肝炎肝硬化患者的肝组织做免疫组织化学染色,定量分析HPCs数目及胆管反应面积.HBsAg和HBcAg染色,观察两种病毒蛋白的表达与HPCs激活的关系.结果 乙型肝炎肝硬化患者肝组织中HPCs激活程度高,胆管反应明显.肝组织中HBsAg的表达与HPCs激活程度呈正相关.结论 在乙型肝炎肝硬化患者的肝组织中,HPCs被明显激活和扩增,HBV感染可能参与HPCs的激活.
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HGF／c-Met相关信号通路在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用
目的：探讨HGF/c-Met相关信号通路PI3K/AKT和STAT3在大鼠肝脏祖细胞增殖中的作用。方法选择 Wistar大鼠，以 CD90.1为标志物，通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞。对肝脏祖细胞进行体外培养，实验组培养液中加入 Su11274，通过 Western 印迹观察 PI3K/AKT和STAT3蛋白表达水平变化。结果实验组和对照组肝脏祖细胞PI3K、AKT蛋白表达无差异（P＝0.65，P＝0.73）。实验组p-PI3K蛋白第10、12、14天分别为1.36±0.14、1.28±0.15、1.14±0.14；p-AKT蛋白第10、12、14天分别为0.36±0.11、0.31±0.09、0.22±0.11，与对照组相比存在差异（P＝0.033，P＝0.014）。对照组和实验组肝脏祖细胞STAT3蛋白表达水平相似（P＝0.73）。对照组 p-STAT3蛋白第6、8、10、12、14天分别为0.22±0.11、0.18±0.06、0.13±0.05、0.13±0.07、0.13±0.05，实验组 p-STAT3第6、8、10、12、14天分别为0.22±0.08、0.17±0.05、0.15±0.05、0.11±0.07、0.06±0.02，都出现下调，但实验组更为明显（P＜0.001）。结论 PI3K/AKT、STAT3传导通路可能是肝脏祖细胞的增殖阶段 HGF/c-Met的相关下游信号。
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正常大鼠肝脏祖细胞的分离和培养
目的 探讨正常大鼠肝脏祖细胞的分离和体外培养方法.方法 选择正常Wistar大鼠,以CD90.1为标志物,通过免疫磁珠法分离正常肝脏内的祖细胞.对祖细胞进行体外培养,并诱导分化.结果 CD90.1阳性细胞占肝脏非实质细胞的(0.32±0.03)％,流式细胞仪分析显示CD90.1阳性细胞占分离细胞的(98.26±1.37)％.刚分离的CD90.1阳性细胞中,CK-19表达呈强阳性,HNF-4a表达呈阴性;培养8周后,CK-19表达呈阴性,HNF-4a表达呈阳性.结论 正常大鼠肝脏内存在祖细胞,可将其诱导分化为肝细胞.
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EP-CAM、N-CAM1及C-KIT与原发性肝癌分级、转移及患者预后的关系
目的 探讨上皮细胞黏附分子(epithelial cellular adhesion molecule,EP-CAM)、 神经细胞黏附分子1(neural cell adhesion molecule1,N-CAM1)及C-KIT与原发性肝癌分级、 转移及患者预后的关系.方法 收集2008年1月～2014年9月重庆三峡中心医院收治的80例原发性肝癌患者作为观察组,选择同期行手术治疗的50例肝硬化及乙型肝炎患者作为对照组,均收集患者病理组织标本,采用免疫组化法测定肝癌及对照组织EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达情况,并收集所有肝癌患者的临床及随访资料,分析EP-CAM、N-CAM1、C-KIT与原发性肝癌临床病理特点及患者预后的关系.结果 观察组EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性表达率均高于对照组(P<0.05);高AFP水平、 无包膜或包膜不完整、 低中分化肿瘤、 临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、 病理类型为胆管上皮癌、 混合型肝癌及出现肝内外转移的肝癌患者EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率较高(P<0.05);Pearson相关分析显示:肝癌患者肝组织EP-CAM与N-CAM1、C-KIT表达呈正相关(P<0.05),肝组织N-CAM1与C-KIT表达呈正相关(P<0.05);肝癌患者1、2、3年生存率分别为72.50％、53.75％、37.50％,随访3年存活患者,EP-CAM、N-CAM1、C-KIT阳性率低于1年及2年存活患者(P<0.05).结论 EP-CAM、N-CAM1、C-KIT表达水平与原发性肝癌患者AFP水平、 肿瘤包膜情况、 分化程度、 临床分期、 组织学类型及预后均有一定的关系,且参与肝癌侵袭、 转移过程.
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三氧化二砷对小鼠肝脏祖细胞生物学特性的影响
目的 观察三氧化二砷(As2O3)对小鼠肝脏祖细胞(AHPCs)增殖及代谢的影响.方法 应用改良Seglen二步法原位灌注结合机械离心获取AHPCs,体外培养并持续观察超过40 d.应用免疫荧光技术对AHPC及其形成的克隆进行白蛋白、甲胎蛋白(AFP)和细胞角蛋白19 (CK19)染色.取原代培养12d的细胞随机分为3组:对照组(不含As2O3)、低浓度组(含2μmol/L As2O3)和高浓度组(含4 μmol/L As2 O3).干预48 h后,采用免疫荧光法观察细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性细胞所占的比例,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Ki-67基因的表达,Western blot技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中尿素浓度的变化.结果 体外培养的AHPC可持续扩增超过40 d,培养第1天强阳性表达白蛋白,培养第5天细胞克隆开始表达AFP,第35天表达CK19.阴性对照组所含Ki-67阳性细胞的比例较高(25.1±2.8)％,而As2O3(2μmol/L)组[(18.8±1.0)％]和As2O3(4μmol/L)组[(11.8±2.0)％]的Ki-67阳性细胞比例逐渐降低.Ki-67 mRNA的表达量在As2 O3(2μmol/L)组(0.823 ±0.012)明显下降,并以As2O3(4μmol/L)组(0.309 ±0.002)降低为明显.随着As2O3浓度的增加,PCNA表达逐渐下降,并呈剂量-效应关系.阴性对照组细胞代谢产物尿素浓度较高[(0.586 ±0.056) mmol/L]随着As2O3浓度增加As2O3(2μmol/L)组[(0.506±0.058) mmol/L]与As2O3 (4 μmol/L)组[(0.410±0.045) mmol/L]尿素浓度逐渐下降.结论 成功建立AHPC体外培养模型.As2O3能抑制原代AHPC的增殖,并降低其代谢能力.
