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柯萨奇病毒B3(CVB3)文献资料
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化学合成siRNA体外对柯萨奇B3病毒的影响
目的RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具.本研究是在培养HELA细胞中,体外化学合成siRNA(small interfering RNA)对柯萨奇B3病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)的影响,探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景.方法根据siRNA靶序列设计原则,设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA,并在体外通过化学合成形成siRNA.同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA.用CVB3感染培养HELA细胞,将其分为3组,即siRNA组(n＝8),阴性siRNA组(n＝8),病毒对照组(n＝8),分别观察转染后第1天到第5天的细胞病变,并与未感染CVB3的空白对照组进行比较;采用RT-PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断,观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值;用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达.结果 RT-PCR检测各组CVB3病毒5'端非编码区(5'UTR)RNA,siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化(p>0.05);免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异;细胞病理效应(cytophatic effects,CPE)各组间未见明显差异.结论本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制.
关键词： 柯萨奇病毒B3(CVB3) RNA干扰 siRNA
