首页 > 文献资料
-
JAZF1基因过表达对ApoE-/-小鼠脂代谢及动脉粥样硬化的影响
目的 探讨JAZF1基因过表达对ApoE/-小鼠脂代谢及动脉粥样硬化(AS)的影响. 方法 将48只雄性ApoE-/-小鼠随机分为:高脂+空载(GF组)及高脂+JAZF1质粒组(JAZF1组)、高脂+生理盐水组(HF组).检测各组血脂、生化指标、组织脂质含量、粪便胆汁酸及主动脉内膜粥样硬化病变.采用[1-14C]醋酸盐腹腔注射,免疫荧光观察JAZF1基因过表达对ApoE-/-小鼠肝脏TC合成代谢及斑块巨噬细胞聚集的影响. 结果 JAZF1组肝脏JAZF1表达以及HDL-C/TC高于HF、GF组(P均＜0.05),而FBG、FIns、TC、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、动脉粥样硬化指数(AI)、血脂综合指数(LCI)和肝脏TC含量低于HF、GF组(P均＜0.05);与HF组和GF组比较,JAZF1组血管内膜脂质堆积减少,主动脉内斑块泡沫细胞聚集较少,斑块面积、斑块面积/管腔面积、主动脉粥样斑块内巨噬细胞CD68表达、肝脏14C标记TC放射活性及肝和小肠14C标记TC放射活性降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 JAZF1基因过表达可减少ApoE-/-小鼠肝脏TC含量,并抑制TC合成,改善脂代谢,抑制巨噬细胞在斑块内的聚集,减轻和延缓AS的形成.
-
JAZF1基因过表达对鼠肝细胞糖脂代谢相关基因表达的影响
目的 探讨JAZF1过表达对鼠肝细胞IAR-20及Hepal-6糖脂代谢相关基因的影响.方法 克隆鼠JAZF1编码区并构建pIRES2-EGFP-JAZF1表达载体,利用脂质体法将目的 基因转染到鼠肝细胞IAR-20及Hepal-6中,采用实时荧光定量PCR测定各处理组JAZF1 mRNA表达情况,以及糖脂代谢相关基因SREBP1、AOC、FAS、HSL、PPARα、ATGL、GluT-1、GluT-4和细胞因子FGF-21mRNA的变化情况.结果 JAZF1基因在鼠肝细胞中过表达导致脂代谢基因SREBP1,AOC,FAS表达降低(P<0.01),PPARα和HSL表达增加(P<0.01),对ATGL无影响(P>0.05),使糖转运相关基因GluT-1表达增加(P<0.01),GluT-4无显著变化(P>0.05),对FGF-21无影响(P>0.05).结论 JAZF1过表达可以抑制肝细胞的脂肪生成,促进脂肪分解,并可能增加基础葡萄糖转运.
-
JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢的影响
目的 探讨JAZF1基因抑制对3T3-L1脂肪细胞糖、脂代谢相关基因的影响.方法 构建JAZF1小发夹RNA (shRNA)表达载体并转染3T3-L1细胞,实时荧光定量PCR(RT-QPCR)和蛋白印迹法检测JAZF1 mRNA和蛋白水平的表达；氢三放射示踪法检测3T3-L1细胞糖摄取率；蛋白印记法检测糖、脂代谢相关基因蛋白水平；油红O染色检测脂肪细胞甘油三酯(TG)含量变化.结果 成功构建JAZF1-shRNA；转染脂肪细胞48 h后,JAZF1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组(P＜0.05)；氢3放射性示踪法显示转染组葡萄糖摄取率明显降低(P＜0.05)；PPAR-γ蛋白表达升高(P＜0.05),激素敏感脂肪酶(HSL)、内脏脂肪素(Visfatin)、胰岛素诱导基囚-2 (Insig-2)蛋白表达降低(均P＜0.05)；油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显,比对照组升高约25％(P＜0.05).结论 JAZF1基因抑制可减少基础糖转运,增加脂质与胆固醇合成,减少脂质分解并减少相关脂肪细胞因子的表达.
-
JAZF1基因对3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK信号途径的影响
目的 探讨JAZF1 (juxtaposed with another zinc finger gene 1)基因对3T3-L1脂肪细胞蛋白激酶B(Akt)和AMP活化的蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响.方法 构建pGenesil-JAZF1 shRNA重组质粒,转染3T3-L1脂肪细胞后分别用胰岛素或利拉鲁肽处理细胞.2-脱氧-3H-D-葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取,Western印迹法检测各组细胞Akt和AMPK的磷酸化水平.结果 成功构建的pGenesil-JAZF1shRNA重组载体转染3T3-L1脂肪细胞后下调JAZF1表达,使基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取降低33.6％和38.8％(均P＜0.05).胰岛素或利拉鲁肽增加3T3-L1脂肪细胞Akt和AMPK磷酸化水平(均P＜0.05),JAZF1表达下调降低基础和2种激素刺激的Akt和AMPK活性(均P＜0.05).结论 JAZF1基因可能通过Akt和AMPK信号通路改善糖代谢.
关键词： JAZF1 蛋白激酶B AMP活化的蛋白激酶 胰岛素 利拉鲁肽 -
未知功能基因JAZF1过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响
目的 观察JAZF1基因(Juxtaposed with another zincfinger gene 1)过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢相关基因的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)法检测JAZF1 mRNA在健康C57BL/6J小鼠多种组织表达分布情况;构建JAZF1真核表达载体并瞬时转染3T3-L1细胞,RT-QPCR法检测JAZF1、糖脂代谢相关基因mRNA的表达;用Western印迹法测定各组细胞JAZF1蛋白水平;油红O染色比色法检测细胞内脂质积聚的变化.结果 转染48 h后,JAZF1转染组脂肪细胞中,JAZF1 mRNA及蛋白表达明显高于阴性对照和空载组,激素敏感脂肪酶(HSL)mRNA表达水平明显增加(P<0.05),脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA相对表达量明显降低(均P<0.01),脂肪细胞甘油三酯酶(ATGL)、葡萄糖转运子1(GLUT1)、GLUT4 mRNA表达并无明显改变;油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显降低(P<0.05).结论 JAZFl在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中起着一定作用.3T3-L1细胞过表达JAZF1可减少脂质合成、增加脂解,并可明显改善脂质积聚,可能是肥胖和糖尿病治疗的一个潜在靶点.
-
邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对小鼠精母细胞JAZF1mRNA及孤核受体TR4蛋白表达的影响
目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对小鼠精母(GC-2 spd)细胞JAZF1 mRNA及TR4蛋白表达的影响.方法 将GC-2 spd细胞置于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200 μmol/L DEHP的培养液培养24 h.采用Real-time PCR方法检测细胞JAZF1 mRNA的相对表达水平,采用Western blot检测TR4蛋白表达水平.结果 与对照组比较,50、100、200 μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的JAZF1 mRNA表达升高,而200 μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的TR4 蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DEHP对生精细胞具有生殖毒性作用,可能通过JAZF1调控孤核受体TR4的表达从而影响雄性生殖功能.
-
JAZF1基因调节棕榈酸诱导肝细胞促炎因子表达的作用
目的 探讨JAZF1过表达对棕榈酸诱导肝细胞促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)α、单核细胞趋化蛋白一1 (MCP-1)及白细胞介素(IL)一8表达的影响. 方法 采用棕榈酸作用于肝细胞以构建肝细胞脂肪变性模型,并行油红O染色;将Ad-JAZF1转染入脂肪变性的肝细胞模型中,用RT-PCR法检测转染前后肝细胞JAZF1、TNF α、MCP-1及IL-8 mRNA表达,Western blot法检测JAZF1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法检测上述促炎因子的分泌情况.对数据的比较,组内采用配对t检验;组间采用方差分析,进一步两两比较采用LSD法.结果 与对照组相比,不同浓度(0、0.125、0.25、0,5、1 mmol/L)棕榈酸诱导肝细胞促炎因子TNF α、MCP-1及IL-8 mRNA的表达,其相对表达量随着浓度升高呈逐渐升高趋势(P＜0.01),但在0.5 mmol/L和1 mmol/L浓度组间,差异没有统计学意义.以0.25 mmol/L棕榈酸作用于肝细胞0、6、12、24、48 h,促炎因子TNF α、MCP-1及IL-8 mRNA的相对表达水平随时间延长逐渐升高,在12h达高峰,随后逐渐下降,呈时间依赖性,且各时间组组间差异均有统计学意义(FTNFα=26.51,FMCP-1=57.20,FIL-8=353.85,P值均＜ 0.01).与Ad-GFP空载体组相比,Ad-JAZF1转染组肝细胞JAZF1 mRNA和蛋白质的相对表达水平明显增高.JAZF1过表达可以抑制肝细胞中由棕榈酸诱导的TNF α、MCP-1及IL-8 mRNA的表达,使其相对表达量分别降低89.69％、77.68％及83.21％(P＜0.01),同时TNF α、MCP-1及IL-8相对分泌量也分别减少37％、37％及41％(P＜0.01). 结论 棕榈酸能促进肝细胞促炎因子mRNA的表达;JAZF1基因过表达能够抑制棕榈酸诱导的肝细胞促炎因子的表达及释放.
